Name: Un modello animale di grandi dimensioni per lesioni renali acute da occlusione temporanea bilaterale dellarteria renale (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-02T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 2 s
Description: Scopri un modello suino per lesioni renali acute da ischemia-riperfusione con occlusione bilaterale percutanea dell'arteria renale. Questo metodo minimamente invasivo riproduce scenari clinici reali per studi traslazionali.

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Vorremmo ringraziare il Dr. Arthur Nedder per il suo aiuto e la sua guida. Questo lavoro è stato supportato dal Richard A. and Susan F. Smith President's Innovation Award, Michael B. Klein and Family, The Sidman Family Foundation, The Michael B. Rukin Charitable Foundation, The Kenneth C. Griffin Charitable Research Fund e The Boston Investment Council.

Tutti gli studi in vivo sono stati condotti in conformità con le linee guida del National Institutes of Health sulla cura e l'uso degli animali e sono stati approvati dal Boston Children's Hospital's Animal Care and Use Committee (Protocol 18-06-3715). Tutti gli animali hanno ricevuto cure umane nel rispetto della Guida alla cura e all'uso degli animali da laboratorio. La figura 1 mostra la sequenza temporale, tra cui anestesia, preparazione chirurgica e punti di tempo per le misurazioni dei risultati primari di questo studio.
1. Induzione, anestesia e intubazione
<ol><li>Per evitare stress e disagio inutili, sedare il maiale per iniezione intramuscolare di una miscela di tiletamina/zolazepam 4-6 mg/kg e xiazina 1,1-2,2 mg/kg, nonché isoflurane 3% con una maschera facciale.</li>
	<li>Cannucolare la vena udita per ottenere l'accesso venoso con una cannula 20 G IV dopo aver disinfettato l'area con il 95% di etanolo. Avviare un'infusione di manutenzione (0,9% NaCl a 5 mL/kg/h).</li>
	<li>Intubare il maiale con un tubo endotracheale (taglia 7 per suini del peso di 40-50 kg) una volta confermata l'adeguatezza anestetica. Eseguire la ventilazione a palloncino con una frequenza di 12 respiri / min e trasportare il maiale in sala operatoria.</li>
	<li>Posizionare l'animale sul tavolo operatorio in posizione supina. Avviare immediatamente la ventilazione meccanica a pressione positiva con FiO2 0,50, 10 mL /kg di volume mareale e una frequenza di 12 respiri/min sotto capnografia continua.</li>
	<li>Posizionare un pulsossimetro sull'orecchio o sul labbro inferiore per un monitoraggio continuo.</li>
	<li>Mantenere la normotermia (37 °C) utilizzando un cuscinetto riscaldato ad aria.</li>
	<li>Per mantenere l'anestesia generale, mantenere la somministrazione di isoflurane allo 0,5-4% attraverso il tubo endotracheale. Durante tutta la procedura, monitorare continuamente ECG, pressione arteriosa, temperatura e capnografia per misurare la profondità dell'anestesia.</li>
	<li>Inserire un catetere Foley per controllare lo stato del fluido dell'animale e monitorare l'uscita delle urine raccogliendo l'urina in un sacchetto di drenaggio. NOTA: Le femmine di suini sono preferite ai maschi a causa delle caratteristiche anatomiche della loro uretra che consente una più facile cateterizzazione.</li>
</ol>2. Preparazione chirurgica e accesso vascolare
<ol><li>Drappeggia l'animale in modo sterile.</li>
	<li>Disinfettare l'area laterale destra del collo applicando betadina e quindi 95% di etanolo per 3 volte.</li>
	<li>Eseguire un taglio per la cateterizzazione dell'arteria carotidea destra e della vena giugulare destra. Ritrarre lateralmente il muscolo sternocleidomastoide e sezionarlo fino all'arteria carotidea destra e alla vena giugulare destra.</li>
	<li>Inserire una toria angioografica 5F sia nell'arteria che nella vena. Fissalo con una sutura 2-0 di seta.</li>
	<li>Inserire una toria angioografica 5F utilizzando la tecnica Seldinger nell'arteria femorale sinistra.<ol>
<li>Per eseguire la tecnica Seldinger forare l'arteria femorale usando un ago cavo. Inserire una punta morbida guidare attraverso il lume e far avanzare nell'arteria femorale.</li>
		<li>Tenere il filo guida sicuro con la mano mentre si rimuove l'ago. Passa la torcia angiografia sopra il filo guida nell'arteria femorale e ritira il filo guida. Utilizzare la guida ecografiche, se necessario.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. Induzione di ischemia renale-lesione da riperfusione
<ol><li>Somministrare 200 UI/kg di eparina di sodio per via endovenosa per ottenere l'anticoagulazione sistemica (tempo di coagulazione attivato dal bersaglio (ACT) > 300 s).</li>
	<li>Eseguire un'angiografia iniettando un agente di contrasto iodinato sotto fluoroscopia per identificare le arterie renali. NOTA: Per ridurre il rischio di nefrotossicità indotta dal contrasto, diluire l'agente di contrasto iodinato in una soluzione 1:1 con soluzione salina normale. Tabulare il dosaggio per tutti gli animali per garantire un dosaggio equivalente.</li>
	<li>Identificare le arterie renali, far avanzare manualmente il filo guida nel catetere guida.</li>
	<li>Posizionare il catetere guida 5F JL4 nell'arteria renale sinistra attraverso l'arteria carotidea destra (Figura 1A).</li>
	<li>Posizionare il secondo catetere guida 5F JL4 nell'arteria renale destra attraverso l'arteria femorale sinistra (Figura 1A).</li>
	<li>Utilizzare i guidewires per dirigere un catetere di dilatazione dell'angioplastica transluminale percutanea 5F (PTA) in ogni arteria renale. NOTA: È preferibile posizionare il palloncino sull'arteria renale prossimale in modo che nessun ramo o collaterale dell'arteria renale sia lasciato brevetto dopo l'inflazione del palloncino.</li>
	<li>Posizionare ogni catetere a palloncino in posizione e collegare una linea di pressione a ciascun catetere.</li>
	<li>Controllare la presenza di forme d'onda dell'impulso arterioso nel monitor di pressione per garantire il corretto posizionamento del catetere.</li>
	<li>Gonfiare ogni palloncino e mirare a una pressione di circa 2,5 atm all'interno del palloncino (Figura 1B).</li>
	<li>Per confermare la cessazione del flusso sanguigno ai reni osservare l'appiattimento della forma d'onda del polso sulla punta del catetere a palloncino.</li>
	<li>Iniettare un mezzo di contrasto iodinato (diluizione 1:1) e verificare la presenza di eventuali opacizzazioni dei vasi renali. NOTA: È anche possibile riempire il palloncino con un agente di contrasto iodinato per la visualizzazione del palloncino gonfiato. Tuttavia, questo metodo non è così sensibile come l'appiattimento della forma d'onda dell'impulso per confermare l'occlusione delle arterie renali.</li>
	<li>Dopo 60 minuti di occlusione, sgonfiare e rimuovere accuratamente i cateteri a palloncino dalle arterie renali.</li>
	<li>Eseguire un'angiografia (utilizzando un mezzo di contrasto diluito 1:1) per confermare la persistenza dell'arteria renale e la creazione di una riperfusione renale(Figura 1C).</li>
	<li>Rimuovere la toria angioografica 5F dall'arteria femorale sinistra.</li>
	<li>Applicare una pressione ferma nel sito di cateterizzazione per 30 minuti.</li>
	<li>Invertire l'effetto dell'eparina mediante somministrazione di protamina (3 mg/kg) fino a quando ACT non si normalizza.</li>
	<li>Per campionare l'urina durante il periodo post-operatorio, fissare un tubo al catetere Foley con una sutura di seta 2-0 usando un punto interrotto sulla pelle.</li>
	<li>Lasciare le suonerie angioografiche nell'arteria carotidea destra e la vena giugulare destra in posizione e fissarle con una sutura di seta 2-0 utilizzando un punto interrotto per consentire il prelievo del sangue durante lo studio.</li>
	<li>Chiudi l'incisione del collo con una sutura di seta 2-0 usando un punto continuo in 2 strati.</li>
	<li>Somministrare bupivacaina (3 mg/kg) nel sito di incisione per ridurre al minimo il dolore.</li>
	<li>Continuare a idratare l'animale con 0,9% nacl a 5 mL/kg/h per un totale di 2 ore dopo la fine dell'ischemia.</li>
	<li>Posizionare una macchia di fentanil (25-50 μg/h) sul retro dell'animale per ridurre al minimo il dolore post-operatorio.</li>
	<li>Somministrare un'iniezione intramuscolare di buprenorfina (0,005-0,1 mg/kg) per ridurre al minimo il dolore post-operatorio.</li>
	<li>Monitorare l'animale e mantenerlo sulla ventilazione meccanica fino al risveglio.</li>
</ol>4. Recupero degli animali
<ol><li>Dopo il risveglio, ospitare l'animale in una stanza a temperatura controllata.</li>
	<li>Continua a trasformare l'animale da un lato laterale all'altro fino a quando non riacquista piena coscienza e capacità di ambulare.</li>
	<li>Fornire acqua e cibo ad libitum.</li>
</ol>5. Valutazione funzionale
<ol><li>Raccogliere il sangue e i campioni di urina secondo il protocollo desiderato. NOTA: In questo studio sono stati designati i seguenti punti di tempo: basale (1 h dopo l'inizio del protocollo di idratazione e prima dell'occlusione delle arterie renali), fine dell'ischemia e riperfusione (2 h, 6 h, 24 h).</li>
	<li>Raccogliere i campioni di sangue arterioso e venoso. Conservarli in eparina di litio o vacutainer rivestiti con EDTA per un'analisi successiva. NOTA: Eleva il sangue direttamente dai cateteri nell'arteria carotide e nella vena giugulare.</li>
	<li>Raccogliere i campioni di urina dal catetere Foley e conservarli in tubi da 15 ml per l'analisi. NOTA: Raccogliere l'urina dal sacchetto di drenaggio collegato al catetere Foley.</li>
	<li>Per determinare la produzione di urina, svuotare il sacchetto di drenaggio e raccogliere l'urina per 1 h. NOTA: Per il momento di 6 ore in cui un sacchetto di drenaggio non è collegato al catetere Foley, chiudere il tubo collegato al catetere Foley per 30 minuti e quindi raccogliere l'urina con una siringa da 60 ml per determinare la produzione di urina.</li>
</ol>6. Eutanasia
<ol><li>Dopo la fine del periodo di riperfusione, eseguire l'anestesia e monitorare come descritto sopra.</li>
	<li>Continuare l'idratazione con 0,9% NaCl a 5 mL/kg/h.</li>
	<li>Utilizzare i cateteri arterioso e venoso per il prelievo del sangue e il catetere Foley per determinare la produzione di urina. Raccogliere i campioni finali di sangue e urine e calcolare l'uscita delle urine.</li>
	<li>Eseguire un'incisione di laparotomia della linea mediana di 15 cm utilizzando una lama di dimensioni 10 dallo xifoide fino al bacino medio.</li>
	<li>Utilizzare un retrattile laterale dritto per ritrarre la pelle addominale.</li>
	<li>Sezionare gli attacchi peritoneali laterale della parete addominale per esporre il retroperitoneo destro e sinistro.</li>
	<li>Identificare e sezionare senza mezzi termini sia le arterie renali che le vene.</li>
	<li>Ligate sia arterie renali che vene con una sutura di seta 2-0 ed eseguire nefromie bilaterali per raccogliere campioni di tessuto intero per l'analisi istologica e metabolica.</li>
	<li>Eutanasia dell'animale con il metodo preferito di eutanasia (ad esempio, esanguinamento, pentobarbital)</li>
</ol>

<ol><li>Ali Pour, P., Kenney, M. C., Kheradvar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioenergetics+consequences+of+mitochondrial+transplantation+in+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Heart+Association%22%5BJournal%5D)">Bioenergetics consequences of mitochondrial transplantation in cardiomyocytes.</a> Journal of the American Heart Association. 9 (7), 014501(2020).</li>
<li>Giraud, S., Favreau, F., Chatauret, N., Thuillier, R., Maiga, S., Hauet, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+large+pig+for+renal+ischemia-reperfusion+and+transplantation+studies%3A+The+Preclinical+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedicine+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Contribution of large pig for renal ischemia-reperfusion and transplantation studies: The Preclinical Model.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2011, 14(2011).</li>
<li>Amdisen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Testing+Danegaptide+effects+on+kidney+function+after+ischemia%2Freperfusion+injury+in+a+new+porcine+two+week+model%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Testing Danegaptide effects on kidney function after ischemia/reperfusion injury in a new porcine two week model.</a> PLoS ONE. 11 (10), 1-13 (2016).</li>
<li>Bhargava, P., Schnellmann, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+energetics+in+the+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial energetics in the kidney.</a> Nature Reviews Nephrology. 13 (10), 629-646 (2017).</li>
<li>Bonventre, J. V., Weinberg, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+the+pathophysiology+of+ischemic+acute+renal+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Recent advances in the pathophysiology of ischemic acute renal failure.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 14 (8), 2199-2210 (2003).</li>
<li>Case, J., Khan, S., Khalid, R., Khan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+Acute+Kidney+Injury+in+the+Intensive+Care+Unit%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Care+Research+and+Practice%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of Acute Kidney Injury in the Intensive Care Unit.</a> Critical Care Research and Practice. 2013, 9(2013).</li>
<li>Jabbari, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+transplantation+ameliorates+ischemia%2Freperfusion-induced+kidney+injury+in+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta+%28BBA%29+-+Molecular+Basis+of+Disease%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial transplantation ameliorates ischemia/reperfusion-induced kidney injury in rat.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Molecular Basis of Disease. 1866 (8), 165809(2020).</li>
<li>Malagrino, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Catheter-based+induction+of+renal+ischemia%2Freperfusion+in+swine%3A+Description+of+an+experimental+model%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reports%22%5BJournal%5D)">Catheter-based induction of renal ischemia/reperfusion in swine: Description of an experimental model.</a> Physiological Reports. 2 (9), 1-13 (2014).</li>
<li>Freeman, R. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nephropathy+requiring+dialysis+after+percutaneous+coronary+intervention+and+the+critical+role+of+an+adjusted+contrast+dose%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Nephropathy requiring dialysis after percutaneous coronary intervention and the critical role of an adjusted contrast dose.</a> American Journal of Cardiology. 90 (10), 1068-1073 (2002).</li>
<li>Gasthuys, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+maturation+of+the+glomerular+filtration+rate+in+conventional+growing+piglets+as+potential+juvenile+animal+model+for+preclinical+pharmaceutical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Postnatal maturation of the glomerular filtration rate in conventional growing piglets as potential juvenile animal model for preclinical pharmaceutical research.</a> Frontiers in Pharmacology. 8 (431), 1-7 (2017).</li>
<li>Doulamis, I. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+transplantation+by+intra-arterial+injection+for+acute+kidney+injury%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+-+Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial transplantation by intra-arterial injection for acute kidney injury.</a> American Journal of Physiology - Renal Physiology. 319 (3), 403-413 (2020).</li>
<li>Rewa, O., Bagshaw, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+kidney+injury-epidemiology%2C+outcomes+and+economics%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Acute kidney injury-epidemiology, outcomes and economics.</a> Nature Reviews Nephrology. 10 (4), 193-207 (2014).</li>
<li>Grossini, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Levosimendan+Protection+against+Kidney+Ischemia%2FReperfusion+Injuries+in+Anesthetized+Pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacology+and+Experimental+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Levosimendan Protection against Kidney Ischemia/Reperfusion Injuries in Anesthetized Pigs.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 342 (2), 376-388 (2012).</li>
<li>Laskey, W. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Volume-to-creatinine+clearance+ratio.+A+pharmacokinetically+based+risk+factor+for+prediction+of+early+creatinine+increase+after+percutaneous+coronary+intervention%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+College+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Volume-to-creatinine clearance ratio. A pharmacokinetically based risk factor for prediction of early creatinine increase after percutaneous coronary intervention.</a> Journal of the American College of Cardiology. 50 (7), 584-590 (2007).</li>
</ol>

Gli autori non dichiarano interessi finanziari concorrenti.

L'AKI è un disturbo clinico comune che colpisce fino al 50% dei pazienti adulti ricoverati in tuttoil mondo 6,12. È necessario un modello animale clinicamente rilevante per indagare ulteriormente la fisiopatologia della malattia e potenziali obiettivi terapeutici. Sebbene ci siano diversi modelli murini che replicano l'AKI, questi non imitano completamente i rispettivi scenari clinici e l'anatomia del rene umano. Questo studio propone un modello suino clinicament...

La lesione renale acuta (AKI) è una condizione comunemente diagnosticata tra i pazienti chirurgici associati a morbilitàe mortalità significative 1,2. I dati disponibili mostrano che l'AKI può colpire anche la metà di tutti i pazienti ricoverati in tutto il mondo e porta al tasso di mortalità del 50% nei pazienti nell'unità di terapiaintensiva 1,3. Nonostante la sua elevata prevalenza, l'attuale terapia AKI rimane limitata alle strategie preventive, come la gestione dei fluidi e la dialisi. Pertanto, c'è un interesse costante nell'esplorare terapie alternative per AKI4,5,6.
L'AKI è tipicamente classificato in pre-renale, intrinseco e post-renale in base alla suaeziologia 4,5,6. La maggior parte dei pazienti chirurgici con AKI sono associati a cause pre-renali dovute all'ipovolemia, con conseguente lesione da ischemia-riperfusione (IRI) dei reni2. Clinicamente, la produzione di urina diminuisce e i livelli di creatinina aumentano a causa della diminuzione della funzione renale. Il rene è un organo ad alto tasso metabolico e suscettibile all'ischemia. Un modello animale di grandi dimensioni altamente riproducibile di IRI renale è necessario per ottenere una migliore comprensione della fisiopatologia dell'AKI e dei suoi potenziali approcci terapeutici5.
Per imitare lo scenario clinico dell'ipoperfusione renale peri-operativamente, si ritiene opportuno un modello di occlusione bilaterale dell'arteria renale. I modelli precedentemente descritti che comportano un'occlusione unilaterale dell'arteria renale con o senza resezione del rene contralaterale non forniscono un'applicabilitàclinica sufficiente 7,8. Sebbene questi modelli siano sufficienti per causare L'AKI, non assomigliano a scenari clinici reali né in termini di tipo né di durata della lesione.
Lo scopo di questo documento è quello di presentare un modello porcino di occlusione temporanea bilaterale percutanea delle arterie renali mediante occlusione palloncino-catetere sotto angiografia. L'occlusione bilaterale dell'arteria renale imita lo scenario clinico dell'ipoperfusione renale, seguita dalla successiva rimozione del palloncino per la riperfusione9,10. Vengono descritti i passaggi tecnici, tra cui cateterizzazione, guida del catetere, angiografia e monitoraggio emodinamico. Questo metodo non solo consente un'occlusione altamente controllata e replicabile delle arterie renali, ma l'approccio percutaneo riduce al minimo l'impatto della risposta infiammatoria limitando la quantità di insulto al corpo rispetto a un approccio aperto.

<table><tbody><tr><td>Iniezione di cloruro di sodio allo 0,9%, usp, contenitore in plastica viaflex da 100 ml</td><td>Baxter</td><td>2B1302</td><td>Per l'idratazione animale</td></tr><tr><td>Agente di contrasto 100,0 ml di mezzi di iniezione btl ioversal 74%</td><td>CARDINAL HEALTH</td><td>133311</td><td>Per visualizzare la vascolarizzazione</td></tr><tr><td>Bard Bardia Sacca di drenaggio urinario a sistema chiuso</td><td>BARD Inc</td><td>802001</td><td>Per la raccolta delle urine</td></tr><tr><td>BD Vacutainer K2 EDTA</td><td>BD</td><td>367841</td><td>Per la conservazione di campioni di sangue</td></tr><tr><td>BD Vacutainer Litio Eparina</td><td>BD</td><td>366667</td><td>Per la conservazione di campioni di sangue</td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Henry Schein</td><td>6906950</td><td>Per la disinfezione della pelle</td></tr><tr><td>Divaricatore Bookwalker</td><td>Codman</td><td></td><td>Per la retrazione cutanea</td></tr><tr><td>Bupivacaina 0,25%</td><td>Hospira</td><td></td><td>Somministrare nel sito di incisione per analgesia</td></tr><tr><td>Buprenorfina SR</td><td>Zoo Pharm</td><td></td><td>Flacone da 10 mg/ml, Dose: 0,2 mg/kg SC</td></tr><tr><td>Cath angio 5,0 Fr x100,0 cm 0,038 in JR4</td><td>MERIT MEDICAL SYSTEM INC</td><td>7523-21</td><td>Per l'identificazione delle arterie renali</td></tr><tr><td>Tubo endotracheale cuffiato</td><td>Emdamed</td><td></td><td>Per stabilire una via aerea sicura per la durata dell'operazione</td></tr><tr><td>ECG Medtronics- Physiocontrol LifePak 20 Monitor della saturazione di ossigeno</td><td>GE Healthcare Madison </td><td></td> WI <td>Per il monitoraggio della saturazione di ossigeno</td></tr><tr><td>Gonfiatore Encore 26</td><td>BOSTON SCIENTIFIC</td><td>710113</td><td>Per gonfiare i cateteri a palloncino</td></tr><tr><td>Etanolo 95% (alcol etilico)</td><td>Henry Schein</td><td></td><td>Per la disinfezione della pelle</td></tr><tr><td>Cerotto al fentanil</td><td>Mylan</td><td></td><td>Dose: 25-50mcg/ora, TD</td></tr><tr><td>Gold rivestito in silicone Foley</td><td>TELEFLEX MEDICAL INC</td><td></td> 180730160 <td>Per l'urina raccolta</td></tr><tr><td>Eparina sodica</td><td>LEO Pharma A/S</td><td></td><td>Dose: 200 UI/kg Ecografo IV</td></tr><tr><td>i33</td><td>Phillips</td><td></td><td>Utilizzare la guida ecografica per la cateterizzazione femorale, se necessario</td></tr><tr><td>, Filo guida diagnostico Inqwire - 0,035" (0,89 mm) - 260 cm (102") - 1,5 mm j-tip</td><td>MERIT MEDICAL SYSTEM INC</td><td>6609-33</td><td>Per guidare i cateteri a palloncino verso le arterie renali</td></tr><tr><td>Catetere endovenoso, misura 20 gauge</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>Inc SC-360097</td><td>Per la somministrazione di fluidi</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Patterson Veterinary Supply, Inc.</td><td>21283620</td><td>Dose: 3%, INH</td></tr><tr><td>Metzenbaum blunt curvo 14,5 cm - 5(3/4)"</td><td>Rudolf Medical</td><td>RU-1311-14M</td><td>Per la dissezione e il taglio dei tessuti</td></tr><tr><td>Kit trasduttore monouso neonatale con dispositivo di lavaggio da 30 ml/ora e doppi rubinetti a 4 vie per il monitoraggio continuo</td><td>Argon Medical</td><td>041588505A</td><td>Per la misurazione della pressione</td></tr><tr><td>Catetere per dilatazione PTA Powerflex pro 6 x 20 mm - lunghezza stelo (135 cm)</td><td>CARDINAL HEALTH</td><td>4400602X</td><td>Per l'occlusione delle arterie renali Linee di</td></tr><tr><td>monitoraggio della pressione mll/mll - 12" trasparente, mll/mll</td><td>Smiths Medical</td><td>B1571/MX571</td><td>Per la misurazione della pressione</td></tr><tr><td>Pacchetto procedurale</td><td>Molnlycke Health Care</td><td>97027809</td><td>Telo chirurgico, garze, siringhe, becher ecc</td></tr>. <tr><td>Protamina</td><td>Henry Schein</td> 1044148 <td>Per l'inversione dell'eparina</td><td></td></tr><tr><td>Lama del bisturi - misura #10</td><td>Cardinal Health (Allegiance)</td><td>32295-010</td><td>Per le incisioni cutanee</td></tr><tr><td>Rubinetto iv a 4 vie lrg bore rotg maschio ll adptr strl</td><td>Peoplesoft</td><td>1550</td><td>Per tubi di collegamento</td></tr><tr><td>Divaricatore laterale dritto</td><td>Codman</td><td></td><td>Per la retrazione della pelle</td></tr><tr><td>Sutura perma hnd 18in 2-0 treccia di seta nera</td><td>CARDINAL HEALTH 1</td><td>A185H</td><td>Per sutura sito di incisione e fissaggio cateteri</td></tr><tr><td>Siringa iniezione di contrasto 10ml fisso maschio luer rosso</td><td>MERIT MEDICAL SYSTEM INC</td><td>MSS111-R</td><td>Per somministrare l'agente</td></tr><tr><td>di contrasto Siringa medica 60ml ll plst strl ltx free disp</td><td>CARDINAL HEALTH 1</td><td>BF309653</td><td>Per la raccolta delle urine e il lavaggio dell'angiocath</td></tr><tr><td>Tilzolan (tiletamina / zolazepam)</td> <td>Patterson Veterinary Supply, Inc.</td><td>07-893-1467</td><td>Dose: 4-6 mg/kg, IM</td></tr><tr><td>xilazina</td><td>Putney, INC</td><td></td><td>Dose: 1,1-2,2 mg/kg, IM</td></tr></tbody></table>

un modello animale di grandi dimensioni per lesioni renali acute da occlusione temporanea bilaterale dell'arteria renale

A Large Animal Model for Acute Kidney Injury by Temporary Bilateral Renal Artery Occlusion

La lesione renale acuta (AKI) è associata a un rischio più elevato di morbilità e mortalità post-operatoria. La lesione da ischemia-riperfusione (IRI) è la causa più comune di AKI. Per imitare questo scenario clinico, questo studio presenta un modello animale di grandi dimensioni altamente riproducibile di IRI renale nei suini utilizzando un'occlusione bilaterale temporanea percutanea palloncino-catetere delle arterie renali. Le arterie renali sono occluse per 60 minuti introducendo i cateteri a palloncino attraverso l'arteria femorale e carotide e avanzandoli nella porzione prossimale delle arterie. Il contrasto iodinato viene iniettato nell'aorta per valutare eventuali opacifica dei vasi renali e confermare il successo dell'occlusione dell'arteria. Ciò è ulteriormente confermato dall'appiattimento della forma d'onda dell'impulso sulla punta dei cateteri a palloncino. I palloncini vengono sgonfiati e rimossi dopo 60 minuti di occlusione bilaterale dell'arteria renale e gli animali possono riprendersi per 24 ore. Alla fine dello studio, la creatinina plasmatica e l'azoto urea nel sangue aumentano significativamente, mentre l'eGFR e la produzione di urina diminuiscono significativamente. La necessità di contrasto iodinato è minima e non influisce sulla funzione renale. L'occlusione bilaterale dell'arteria renale imita meglio lo scenario clinico dell'ipoperfusione renale perioperatoria e l'approccio percutaneo riduce al minimo l'impatto della risposta infiammatoria e il rischio di infezione visto con un approccio aperto, come una laparotomia. La capacità di creare e riprodurre questo modello suino clinicamente rilevante facilita la traduzione clinica all'uomo.

Analisi funzionale I risultati rappresentativi di questo studio provengono da 6 animali e i dati mostrati sono ± errore standard della media. La funzione renale viene valutata determinando la produzione di urina, il tasso di filtrazione glomerulare stimato (eGFR), la creatina plasmatica e l'azoto urea nel sangue (BUN). I biomarcatori della funzione renale sono valutati utilizzando un analizzatore di chimica portatile. l'eGFR è calcolato secondo la seguente formula: eGFR =1,879 × BW1,092/P<s...

Questo studio presenta un modello animale di grandi dimensioni altamente riproducibile di lesione renale ischemia-riperfusione nei suini utilizzando occlusione bilaterale percutanea percutanea palloncino-catetere delle arterie renali per 60 minuti e riperfusione per 24 ore.

Un modello animale di grandi dimensioni per lesioni renali acute da occlusione temporanea bilaterale dell'arteria renale

Acute kidney injury (AKI) is associated with higher risk for morbidity and mortality post-operatively. Ischemia-reperfusion injury (IRI) is the most ...

Questo studio descrive un modello animale di grandi dimensioni riproducibile di lesione renale da riperfusione di ischemia, che può essere utilizzato per studiare la fisiopatologia della lesione renale acuta ed esplorare potenziali modalità terapeutiche. Questo metodo è altamente riproducibile e riduce al minimo l'impatto della risposta infiammatoria limitando la quantità di insulto al corpo rispetto a un approccio aperto. Questo modello preclinico imita scenari clinici, come il trapianto renale, l'ipoperfusione renale a seguito di shock cardiogenico, procedure trascateteriche con conseguente ischemia renale e procedure cardiovascolari con tempi di arresto cardio-circolatori prolungati.Per iniziare, disinfettare l'area laterale destra del collo applicando betadina e quindi 95% di etanolo tre volte. Drappeggia l'animale in modo sterile. Eseguire un taglio per la cateterizzazione dell'arteria carotidea destra e della vena giugulare destra.Ritrarre lateralmente il muscolo sternocleidomastoide e sezionarlo fino all'arteria carotidea destra e alla vena giugulare destra. Inserire una toria angioografica 5F sia nell'arteria che nella vena. Fissalo con una sutura 2-0 di seta.Inserire una toria angioografica 5F utilizzando la tecnica Seldinger nell'arteria femorale sinistra forando l'arteria con un ago cavo. Inserire un filo guida a punta morbida attraverso il lume e farlo avanzare nell'arteria femorale. Tenere il filo guida sicuro con una mano mentre si rimuove l'ago.Passare la torcia angioografica sopra il filo guida nell'arteria femorale e ritirare il filo guida utilizzando la guida ad ultrasuoni, se necessario. Somministrare per via endovenosa 200 UI per chilogrammo di eparina di sodio per ottenere l'anticoagulazione sistemica. Per eseguire l'angiografia, iniettare un agente di contrasto iodinato sotto fluoroscopia per identificare le arterie renali.Identificare le arterie renali e far avanzare manualmente il filo guida nel catetere guida. Posizionare il catetere guida 5F JL4 nell'arteria renale sinistra attraverso l'arteria carotidea destra. Posizionare il secondo catetere guida 5F JL4 nell'arteria renale destra attraverso l'arteria femorale sinistra.Utilizzare i fili guida per dirigere un'angioplastica transluminale percutanea 5F, o catetere di dilatazione PTA, in ogni arteria renale. Posizionare ogni catetere a palloncino in posizione e collegare una linea di pressione a ciascun catetere. Controllare la presenza di forme di onda d'impulso arteriosa nel monitor di pressione per garantire il corretto posizionamento del catetere.Gonfiare ogni palloncino e mirare a una pressione di circa 2,5 pressione atmosferica all'interno del palloncino. Per confermare la cessazione del flusso sanguigno ai reni, osservare l'appiattimento della forma d'onda del polso sulla punta del catetere a palloncino. Iniettare un mezzo di contrasto iodinato in una diluizione 1:1 con soluzione salina e verificare la presenza di eventuali opacizza dei vasi renali.Dopo 60 minuti di occlusione, sgonfiare e rimuovere accuratamente i cateteri a palloncino dalle arterie renali. Eseguire un'angiografia utilizzando un mezzo di contrasto diluito 1:1 per confermare la persistenza dell'arteria renale e la creazione di una riperfusione renale. Rimuovere la toria angioografica 5F dall'arteria femorale sinistra.Applicare dalla pressione nel sito di cateterizzazione per 30 minuti. Invertire l'effetto dell'eparina con la somministrazione di tre milligrammi per chilogrammo di protamina fino alla normalizzazione del tempo di coagulazione attivo. Per campionare l'urina durante il periodo post-operatorio, fissare un tubo al catetere Foley con una sutura di seta 2-0 usando un punto interrotto sulla pelle.Per il prelievo del sangue, lasciare le suonerie angioografiche nell'arteria carotidea destra e la vena giugulare destra in posizione e fissarle con una sutura di seta 2-0. somministrare tre milligrammi per chilogrammo di bupivacaina nel sito di incisione per ridurre al minimo il dolore. Continuare a idratare l'animale con 0,9 cloruro di sodio per un totale di due ore dopo la fine dell'ischemia.Chiudi l'incisione del collo con una sutura di seta 2-0 usando un punto interrotto in due strati. Posizionare una macchia di fentanil da 25 a 50 microgrammi all'ora sul retro dell'animale per ridurre al minimo il dolore post-operatorio e monitorare l'animale sulla ventilazione meccanica fino a quando non si sveglia. Raccogliere i campioni finali di sangue e urine e calcolare l'uscita delle urine.Eseguire un'incisione di laparotomia della linea mediana utilizzando una lama di dimensioni 10 dallo xifoide fino al bacino medio. Utilizzare un retrattile laterale dritto per ritrarre la pelle addominale. Sezionare gli attacchi peritoneali laterale della parete addominale per esporre il retroperitoneo destro e sinistro.Identificare e sezionare senza mezzi termini sia le arterie renali che le vene. Ligate sia arterie renali che vene con una sutura di seta 2-0 ed eseguire nefromie bilaterali per raccogliere campioni di tessuto intero per l'analisi istologica e metabolica. La funzione renale è stata valutata determinando la produzione di urina, eGFR, creatina plasmatica e BUN.Dopo 60 minuti di occlusione bilaterale dell'arteria renale, la produzione di urina è stata significativamente diminuita ed è rimasta in questo modo a sei e 24 ore dopo la riperfusione. Allo stesso modo, è stata osservata una significativa diminuzione dell'eGFR, che è sceso dal basale rispetto alla fine dell'ischemia a due ore, sei ore e 24 ore di riperfusione. La creatinina plasmatica è stata significativamente aumentata a due, sei e 24 ore di riperfusione rispetto al basale.Bun è stato aumentato rispetto al basale a sei e 24 ore di riperfusione. Evidenti aree necrotiche ed emorragiche sono state distribuite in modo non uniforme in entrambi i reni alla fine dei 60 minuti di ischemia renale bilaterale e delle 24 ore di riperfusione. La colorazione tricromatica di Masson rivelò una necrosi coagulativa confluente, che si trovava nei tubuli prossimali della corteccia renale.Sono state valutate anche le sezioni in plastica incorporata. Tutte le diapositive tricromatiche di Masson sono state valutate per necrosi cellulare, perdita del bordo del pennello, formazione del calco e dilatazione dei tubuli. La necrosi tubolare acuta, o punteggio ATN, ha mostrato lesioni significative alla corteccia renale e al midollo.Quando si esegue questo protocollo, controllare il posizionamento dei siti di palloncini sulla vicinanza di RC e occludere totalmente il flusso al rene. Assicurati che non si piei in quell'acqua. Seguendo questa procedura, le sonde di flusso del catetere endovascolare possono essere inserite nelle arterie renali per valutare il flusso sanguigno renale, oppure possono essere eseguite biopsie renali per valutare la lesione renale del tessuto.

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