Quadruple-Checkerboard: una modifica della scacchiera tridimensionale per lo studio delle combinazioni di farmaci

La quaderboard quadrupla è una tecnica che studia tutte le possibili combinazioni che si possono ottenere combinando quattro farmaci, ed è importante trovare un trattamento per i microrganismi resistenti, principalmente MDR o anche noti come microrganismi multiresistenti ai farmaci. Questa tecnica non richiede molta manodopera e i risultati possono essere ottenuti il giorno successivo o al termine del periodo di incubazione. Oltre a questo, può studiare tutte le combinazioni possibili e non solo combinazioni specifiche e molto limitate che si possono ottenere combinando questi quattro farmaci e tutti, tutti in un esperimento.

Oltre a questo, questa tecnica può essere utilizzata in molteplici discipline e non solo in microbiologia e nemmeno in microbiologia. È in grado di studiare tutte le possibili combinazioni tra diversi agenti antimicrobici e non solo agenti antibatterici. Oltre alla parte di microbiologia, può essere utilizzato per studiare combinazioni tra farmaci antitumorali, tra estratti vegetali e farmaci, e anche tra pannelli di trattamenti molecolari molecolari efficaci.

Preparazione Posizionare 4 96, ben posizionare le piastre una accanto all'altra in modo da formare un quadrato con un nastro adesivo, fissando insieme il fondo. Ripeti questo passaggio per ottenere quattro pannelli contenenti ciascuno quattro piastre e chiamali uno, un due, un tre e un quattro. Aggiungere 50 microlitri Mueller.

Suggerimento e brodo ai pozzetti tra la colonna due e la colonna 11 nel 1696, le piastre del pozzetto dei quattro pannelli aggiungono 200 microlitri di brodo Mueller Hinton al pozzo H 12 che funge da controllo negativo. Pozzetti, nelle piastre da 1696 pozzetti dei quattro pannelli, aggiungere un brodo Mueller Hinton da 50 microlitri ai pozzetti A, uno e H, uno, che funge da pozzetti di controllo positivo nelle piastre da 1696 pozzetti dei quattro pannelli, un farmaco, una diluizione seriale di cefotaxima in un tubo conico a 15 ml. Acqua distillata sterile.

Calcolare il volume da rimuovere dalla soluzione madre del farmaco seguendo la formula C uno V uno uguale a C due V due. Rimuovere il volume calcolato dai 15 ml di acqua distillata sterile e aggiungere lo stesso volume della soluzione madre del farmaco Alla pipetta a tubo conico 50 microlitri della soluzione farmaceutica preparata in ciascun pozzetto nella colonna 11 e nella colonna 12, ad eccezione del pozzetto H 12, iniziare la diluizione seriale rimuovendo 50 microlitri dalla colonna 11 e inserendoli nei pozzetti corrispondenti nella colonna 10, e poi dalle 10 fino a raggiungere la colonna due dove i 50 microlitri prelevati dalla colonna due verranno scartati. Ripetere la diluizione seriale per ciascuna delle piastre da 1696 pozzetti dei quattro pannelli.

Farmaco due diluizioni seriali di amika in un tubo conico a 10 ml. Acqua distillata sterile. Calcolare il volume da rimuovere dalla soluzione madre del farmaco.

Rimuovere il volume calcolato dai 10 ml di acqua distillata sterile e aggiungere lo stesso volume della soluzione madre del farmaco al tubo conico. Prendi una piastra separata da 96 pozzetti, aggiungi cento microlitri di brodo sterile Mueller Hinton ai pozzetti tra la rosa G e B.In questa piastra, aggiungi centinaia di microlitri del farmaco precedentemente preparato. Due, soluzione ai pozzetti della fila G.Diluire in serie Dalla fila G alla fila B prelevando centinaia di microlitri da ciascun pozzetto in RO G.E infine scartando il cento microlitri dai pozzetti della fila B.Ripetere questi passaggi per preparare otto piastre separate da 96 pozzetti trasferimento di farmaco due ai quattro pannelli pipettare 50 microlitri di farmaco due dai pozzetti tra le file G e B nel pozzetti corrispondenti in ogni piastra Nei quattro pannelli, una piastra preparata a 96 pozzetti contiene un centinaio di microlitri di farmaco due.

Questo è sufficiente per due piastre in un pannello di farmaci. Tre vivi di lombo oltre a quattro diversi tubi conici a 14 ml di acqua distillata sterile. Calcolare il volume da rimuovere dalla soluzione madre del farmaco.

Rimuovere il volume calcolato dai 14 ml di acqua distillata sterile da ciascun tubo e aggiungere il volume corrispondente del farmaco. Dopo aver preparato le concentrazioni richieste del terzo farmaco, prelevare 50 microlitri e aggiungerlo ai pozzetti corrispondenti tra le righe B e G e le colonne due e 12 nella piastra corrispondente. In ogni pannello, dove C uno corrisponde alle quattro piastre P uno e ai quattro pannelli C due corrisponde alle quattro piastre P due e ai quattro pannelli, C3 corrisponde alle quattro P tre piastre e ai quattro pannelli e C quattro corrisponde alle quattro P quattro piastre e ai quattro pannelli farmaco quattro trimetoprim sulfametossazolo aggiunta a un tubo conico aggiungere 14 ml.

Sforzati di distillare l'acqua. Calcolare il volume da rimuovere dalla soluzione madre del farmaco. Rimuovere il volume calcolato dai 14 ml di acqua distillata sterile di ciascuna provetta e aggiungere il volume richiesto del farmaco.

Dopo aver preparato le concentrazioni richieste del quarto farmaco, prelevare 50 microlitri e aggiungerlo ai pozzetti corrispondenti tra le righe B e G e le colonne due e 12. Nelle quattro tavole del pannello corrispondente, dove C uno corrisponde al pannello uno, C due corrisponde al pannello due, C3, corrisponde al pannello tre e C quattro corrisponde al pannello quattro. Preparazione e aggiunta di inoculo batterico uguale I-E-S-B-L mediante trasferimento ad ansa sterile.

Una colonia dell'isolato batterico equivale a essere precedentemente coltivata su una piastra in due ml di brodo sterile Mueller Hinton e vortice Controllare la torbidità dove dovrebbe essere 0,5 McFarland utilizzando una densità aggiungere un brodo sterile di Mueller Hinton TML alla tazza sterile per l'urina aggiungere inoculo batterico dall'inoculo McFarland 0,5 alla tazza per l'urina seguendo la formula C uno V uno uguale a C due V due dove V uno equivale a 800 microlitri pipetta a tubo 50 microlitri della soluzione di inoculo e ad ogni pozzetto tranne H 12, che è il controllo della sterilità, incubare bene i pannelli a 37 gradi Celsius durante la notte. Questa figura rappresenta il pannello A uno. I dimori di colore sono i pozzetti che contengono la crescita batterica e le frecce nere rappresentano i pozzetti sulla crescita.

Nessuna interfaccia di crescita nella piastra uno, nella piastra due e nella piastra tre. Possiamo vedere che c'è inibizione nella riga D contenente una MIC su otto di Amikacin oltre a diversi sub MIC di cefotaxima e Levofloxacina oltre a una MIC su otto di Trimethoprim sulfametossazolo nella piastra quattro. Notiamo che non si vede alcuna crescita batterica nel quadrante contenente la combinazione.

Questo perché in questa piastra abbiamo la MIC di Levofloxacina che inibirà totalmente la crescita. La prima figura B rappresenta il secondo pannello. In questo pannello, possiamo vedere che l'inibizione della crescita batterica si osserva anche nella RD, che contiene sottofarmaci di cefotaxima e levofloxacina oltre a una MIC su otto di amikacina e una su quattro MIC di trimetoprim sulfametossazolo, la figura uno C rappresenta il pannello A tre.

In questa figura, possiamo vedere che l'inibizione della crescita batterica si vede nella riga C e nella riga D contenenti diversi sub mic di cefotaxima e levofloxacina, e l'aggiunta a metà MIC di trimetoprim sulfametossazolo, e una su quattro MIC di Amikacin nella riga C e una su due MIC di Amikacin nella riga D la figura 1D rappresenta il pannello A quattro. In questo pannello abbiamo una MIC di Trimetoprim sulfametossazolo in combinazione con diverse concentrazioni di Cefotaxima, amikacina e Levofloxacina. In questa figura, possiamo vedere che la crescita batterica è totalmente inibita nel quadrante contenente la combinazione dove questa inibizione è l'effetto dell'unica MIC di Trimetoprim sulfametossazolo nel foglio FIC, tutto nel file Excel.

La tabella mostrerà la FIC sonora finale, con l'interpretazione del valore ottenuto. In conclusione, la tecnica Q checkerboard studia tutte le possibili combinazioni tra quattro farmaci in un unico esperimento. I risultati si ottengono il giorno successivo e vengono interpretati in modo facile e veloce utilizzando un modello Excel.