Name: In vivo Imaging a due fotoni di megacariociti e proplatati nel midollo osseo del cranio del topo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-07-28T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 58 s
Description: Scopri l'imaging a due fotoni di megacariociti e proplatati nel midollo osseo del cranio del topo. Questo metodo consente la visualizzazione in tempo reale della formazione delle piastrine in vivo.

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Gli autori desiderano ringraziare Florian Gaertner (Institute of Science and Technology Austria, Klosterneuburg, Austria) per la sua consulenza esperta sugli esperimenti di microscopia a due fotoni nel momento in cui abbiamo stabilito la tecnica in laboratorio, e Yves Lutz presso l'Imaging Center IGBMC / CBI (Illkirch, Francia) per la sua esperienza e l'aiuto con il microscopio a due fotoni. Ringraziamo anche Jean-Yves Rinkel per il suo aiuto tecnico e Ines Guinard per il disegno dello schema in Figura 1. Ringraziamo ARMESA (Association de Recherche et Développement en Médecine et Santé Publique) per il suo supporto nell'acquisizione del microscopio a due fotoni. AB è stata sostenuta da borse di studio post-dottorato dell'Etablissement Français du Sang (APR2016) e dell'Agence Nationale de la Recherche (ANR-18-CE14-0037-01).

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<li>Kohler, A., Geiger, H., Gunzer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+hematopoietic+stem+cells+in+the+marrow+of+long+bones+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Imaging hematopoietic stem cells in the marrow of long bones in vivo.</a> Methods in Molecular Biology. 750, 215-224 (2011).</li>
<li>Lewandowski, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+cellular+imaging+pinpoints+the+role+of+reactive+oxygen+species+in+the+early+steps+of+adult+hematopoietic+reconstitution%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">In vivo cellular imaging pinpoints the role of reactive oxygen species in the early steps of adult hematopoietic reconstitution.</a> Blood. 115 (3), 443-452 (2010).</li>
<li>Reismann, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+intravital+imaging+of+the+femoral+bone+marrow+reveals+plasticity+within+marrow+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Longitudinal intravital imaging of the femoral bone marrow reveals plasticity within marrow vasculature.</a> Nature Communications. 8 (1), 2153(2017).</li>
<li>Chen, Y., Maeda, A., Bu, J., DaCosta, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Femur+window+chamber+model+for+in+vivo+cell+tracking+in+the+murine+bone+marrow%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Femur window chamber model for in vivo cell tracking in the murine bone marrow.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (113), e542205(2016).</li>
<li>Guesmi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual-color+deep-tissue+three-photon+microscopy+with+a+multiband+infrared+laser%5BTitle%5D)+AND+%22Light+Science+%26+Applications%22%5BJournal%5D)">Dual-color deep-tissue three-photon microscopy with a multiband infrared laser.</a> Light Science & Applications. 7, 12(2018).</li>
<li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-photon+imaging+of+mouse+brain+structure+and+function+through+the+intact+skull%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Three-photon imaging of mouse brain structure and function through the intact skull.</a> Nature Methods. 15 (10), 789-792 (2018).</li>
<li>Kim, J., Bixel, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+multiphoton+imaging+of+the+bone+and+bone+marrow+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">Intravital multiphoton imaging of the bone and bone marrow environment.</a> Cytometry A. 97 (5), 496-503 (2020).</li>
</ol>

Gli autori non hanno conflitti di interesse da dichiarare.

I meccanismi di formazione delle piastrine dipendono fortemente dall'ambiente del midollo osseo. Quindi, la microscopia intravitale è diventata uno strumento importante sul campo per visualizzare il processo in tempo reale. I topi con megacariociti fluorescenti possono essere ottenuti incrociando topi che esprimono la cre ricombinatasi in megacariociti con qualsiasi topo reporter floxed contenente una cassetta di espressione genica fluorescente condizionale. Qui sono stati utilizzati topi reporter mTmG (B6.129 (Cg) -...

Le piastrine sono prodotte da cellule specializzate in megacariociti situate nel midollo osseo. Il modo preciso in cui i megacariociti rilasciano piastrine nella circolazione è rimasto a lungo poco chiaro a causa della sfida tecnica nell'osservare eventi in tempo reale attraverso l'osso. La microscopia a due fotoni ha contribuito a superare questa sfida e ha portato a importanti progressi nella comprensione del processo di formazione delle piastrine. Le prime osservazioni in vivo di megacariociti sono state fatte da von Andrian e colleghi nel 2007, con la visualizzazione di megacariociti fluorescenti attraverso il cranio1. Ciò è stato possibile perché lo strato osseo nel cranio frontoparietale di topi giovani adulti ha uno spessore di poche decine di micron ed è sufficientemente trasparente da consentire la visualizzazione di cellule fluorescenti nel midollo osseo sottostante2.
Gli studi successivi hanno applicato questa procedura per valutare la formazione di proplatelet in varie condizioni e per decifrare i meccanismi sottostanti3,4,5,6. Questi studi hanno fornito la prova definitiva che i megacariociti estendono dinamicamente le protrusioni, chiamate proplatelet, attraverso la barriera endoteliale dei vasi sinusoidi (Figura 1). Questi propulati vengono poi rilasciati come lunghi frammenti che rappresentano diverse centinaia di piastrine in volume. Le piastrine si formeranno dopo il rimodellamento delle proplatelet nella microcircolazione degli organi a valle, in particolare nei polmoni7. Ad oggi, tuttavia, il processo preciso e i meccanismi molecolari rimangono oggetto di dibattito. Ad esempio, il ruolo proposto delle proteine citoscheletriche nell'allungamento delle proplatelet differisce tra le condizioni in vitro e in vivo 3e le differenze nella formazione dei proplatelet sono state dimostrate in condizioni infiammatorie6. A complicare ulteriormente le cose, un recente studio ha contestato il concetto guidato dai proplatelet e ha proposto che in vivo,le piastrine si formino essenzialmente attraverso un meccanismo di gemmazione della membrana a livello di megacariociti8.
Questo documento presenta un protocollo per l'osservazione di megacariociti e proplatelet nel midollo osseo dall'osso del cranio in topi viventi, utilizzando una procedura minimamente invasiva. Approcci simili sono stati precedentemente descritti per visualizzare altre cellule del midollo, in particolare cellule staminali ematopoietiche e progenitrici9. L'attenzione qui è sull'osservazione di megacariociti e piastrine per dettagliare alcuni parametri che possono essere misurati, in particolare le morfologie delle proplatelet e la velocità piastrinica. Questo protocollo presenta come inserire un catetere nella vena giugulare per iniettare traccianti fluorescenti e farmaci e osservare attraverso l'osso del cranio. L'osso calvarioriale viene esposto con un intervento chirurgico minore in modo che un anello sia incollato all'osso. Questo anello serve a immobilizzare la testa e prevenire i movimenti dovuti alla respirazione e formare una tazza piena di soluzione salina come mezzo di immersione della lente. Questa tecnica ben si presta a i) osservare in tempo reale la geometria sinusoide e i megacariociti che interagiscono con la parete del vaso; ii) seguire i megacariociti nel processo di formazione, allungamento e rilascio delle proplatelet; e iii) misurare i movimenti piastrinici per monitorare il flusso sanguigno sinusoide complesso. I dati ottenuti utilizzando questo protocollo sono stati recentemente pubblicati3.

<table><tbody><tr><td>Software GNU Octave</td><td>Progetto</td><td></td> GNU <td>https://www.gnu.org/software/octave/</td></tr><tr><td>&nbsp; Histoacryl 5 x 0, 5 mL</td><td>Braun</td><td>1050052</td><td>soluzione iniettabile di colla chirurgica</td></tr><tr><td>Rivelatori ibridi HyD Leica Microsystems 4tunes</td><td>Leica Microsystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>GNU project</td><td></td><td>Versione minima richiesta</td></tr><tr><td>Imalgene/Ketamina 1000 fl/10 mL</td><td>Boehring</td><td>03661103003199</td><td>protezione</td></tr> <tr><td>per gli occhiMicroscopio Leica SP8 MP DIVE dotato di obiettivo ad acqua 25x, apertura numerica di 0,95</td><td>Leica Microsystems</td><td></td><td>Eccitazione simultanea di AlexaFluor-488 e Qtracker-655</td></tr><tr><td>Matlab</td><td>MathWorks</td><td></td><td>https://www.mathworks.com/</td></tr> <tr><td>Ocrygel 10 g</td><td>Laboratoires T.V.M.</td><td>03700454505621</td><td>Pasta dentale siliconica blu e gialla</td></tr><tr><td>Picodent twinsin speed</td><td>Rotec</td><td>13001002</td><td></td></tr><tr><td>Qtracker 655 etichetta vascolare</td><td>Invitrogen</td><td>Q21021MP</td><td>soluzione iniettabile</td></tr><tr><td>Scanner risonante, 8 o 12 kHz</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rompun Xilazina 2% fl/25 mL</td><td>Bayer</td><td>04007221032311</td><td></td></tr><tr><td>Gel</td><td></td><td></td> <td>di supercollaper incollare l'anello all'osso</td></tr><tr><td>Catetere Surflo IV - Blu 22 G</td><td>Terumo</td><td>SR-OX2225C1</td><td></td></tr><tr><td>Laser pulsante Ti:Saph (Coerente) (femtosecondo)</td><td>Coerente</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

in vivo imaging a due fotoni di megacariociti e proplatati nel midollo osseo del cranio del topo

In Vivo Two-photon Imaging of Megakaryocytes and Proplatelets in the Mouse Skull Bone Marrow

Le piastrine sono prodotte da megacariociti, cellule specializzate situate nel midollo osseo. La possibilità di immagine dei megacariociti in tempo reale e del loro ambiente nativo è stata descritta più di 10 anni fa e getta nuova luce sul processo di formazione delle piastrine. I megacariociti estendono protrusioni allungate, chiamate proplatelet, attraverso il rivestimento endoteliale dei vasi sinusoidi. Questo documento presenta un protocollo per l'immagine simultanea in tempo reale di megacariociti marcati fluorescenti nel midollo osseo del cranio e nei vasi sinusoidi. Questa tecnica si basa su un intervento chirurgico minore che mantiene intatto il cranio per limitare le reazioni infiammatorie. La testa del topo è immobilizzata con un anello incollato al cranio per impedire ai movimenti di respirare.
Utilizzando la microscopia a due fotoni, i megacariociti possono essere visualizzati per un massimo di poche ore, consentendo l'osservazione di protrusioni cellulari e proplatelet nel processo di allungamento all'interno di vasi sinusoidi. Ciò consente la quantificazione di diversi parametri relativi alla morfologia delle sporgenze (larghezza, lunghezza, presenza di aree di costrizione) e al loro comportamento di allungamento (velocità, regolarità o presenza di pause o fasi di retrazione). Questa tecnica consente anche la registrazione simultanea delle piastrine circolanti nei vasi sinusoidi per determinare la velocità piastrinica e la direzione del flusso sanguigno. Questo metodo è particolarmente utile per studiare il ruolo dei geni di interesse nella formazione piastrinica utilizzando topi geneticamente modificati ed è anche suscettibile di test farmacologici (studiare i meccanismi, valutare i farmaci nel trattamento dei disturbi della produzione piastrinica). È diventato uno strumento inestimabile, soprattutto per integrare gli studi in vitro poiché è ormai noto che la formazione di proplatelet in vivo e in vitro si basa su meccanismi diversi. È stato dimostrato, ad esempio, che i microtubuli in vitro sono necessari per l'allungamento del proplatelet di per sé. Tuttavia, in vivo, servono piuttosto come un'impalcatura, l'allungamento è principalmente promosso dalle forze del flusso sanguigno.

Utilizzando questo protocollo, il tracciante fluorescente, Qtracker-655, è stato somministrato per via endovenosa per l'immagine dei vasi sinusoidi del midollo anastomoso nel midollo osseo del cranio e la direzione del flusso come raffigurato dalle frecce(Figura 4A,a sinistra). Utilizzando mouse mTmG, le piastrine fluorescenti eGFP sono state registrate oltre 20 s in ogni ramo del vaso e la loro velocità è stata misurata utilizzando il software ImageJ e GNU Octave(Figura...

Descriviamo qui il metodo per l'imaging di megacariociti e proplatelet nel midollo dell'osso del cranio di topi viventi usando la microscopia a due fotoni.

In vivo Imaging a due fotoni di megacariociti e proplatati nel midollo osseo del cranio del topo

Platelets are produced by megakaryocytes, specialized cells located in the bone marrow. The possibility to image megakaryocytes in real time and their ...

Questo metodo permette la visualizzazione in tempo reale di diversi eventi, che si svolgono nel midollo osseo del topo cranico, come i megacariociti, estendendo le proplatelet all'interno dei vasi sinusoidi. Il vantaggio principale di questa tecnica è un intervento chirurgico minore necessario per ridurre al minimo la reazione infiammatoria, consentendo una visualizzazione in vivo degli eventi nelle condizioni quasi di fabbrica. Per iniziare, trasportare il mouse nella sala immagini.Accendere il microscopio e il computer e impostare i parametri richiesti. Una volta che il mouse è completamente anestetizzato, posizionare il mouse su una piastra riscaldata, riscaldata a 37 gradi Celsius per tutte le successive manipolazioni, radersi la testa e la gola del mouse e applicare il gel sugli occhi per prevenire la secchezza. Posizionare il mouse sulla schiena e fissare le gambe anteriori con nastro chirurgico per allungare la gola.Dopo aver disinfettato la gola, fare un'incisione da 0,7 a 1 centimetro sulla vena giugulare destra o sinistra usando le forbici e allungare il tessuto connettivo adiacente per esporre la vena del giocoliere esterno sulla parte superiore del muscolo pettorale. Riempire il catetere con soluzione fisiologica calda e sterile. Penetrare il catetere attraverso il muscolo pettorale e quindi inserire il catetere nella vena.Rimuovere delicatamente l'ago, collegare la siringa con i traccianti fluorescenti e iniettare il volume morto del catetere. Posizionare una goccia di colla chirurgica per stabilizzare il catetere. Riportare con attenzione il mouse in posizione prona.Disinfettare il cuoio capelluto con etanolo al 70% con un asciugamano di carta mentre si rimuovono i capelli sciolti. Utilizzare forbici e pinzette sterili per fare un'incisione a forma di T sulla linea mediana fino a un centimetro tra le orecchie sul cuoio capelluto per esporre il calvario. Esporre il cranio con una pinzetta, quindi utilizzare forbici e pinzette per rimuovere con cura il periosteo.Utilizzare un batuffolo di cotone sterile imbevuto di soluzione fisiologica per rimuovere tutto il periosteo e qualsiasi detrito o capello che potrebbe alterare l'imaging. Risciacquare il cranio con soluzione salina per rimuovere eventuali tracce di sangue e asciugare rapidamente l'osso con un batuffolo di cotone. Applicare il gel di colla sull'anello, posizionare l'anello sull'osso esposto e mantenerlo per alcuni secondi per consentire all'anello di attaccarsi saldamente al cranio.Inumidire leggermente il cranio con un batuffolo di cotone soluzione salina. Preparare la pasta dentale siliconica mescolando accuratamente i componenti blu e giallo in un rapporto uno a uno. Sigillare l'anello applicando la pasta dentale per evitare perdite durante l'imaging.Rimuovere con attenzione qualsiasi pasta dentale o colla che potrebbe essere entrata nell'anello. Quindi riempire l'anello con soluzione salina per controllare la perdita. Posiziona il mouse sul supporto e metti un impacco piegato sotto la testa dell'animale per sollevare la testa e impedire il distacco dell'anello dal cranio quando è attaccato al supporto.Avvitare l'anello sul supporto del blocco. Posizionare il supporto e il gruppo del mouse nella camera riscaldata del microscopio. Impostare le lunghezze d'onda laser appropriate per i quattro quattro scelti e il recupero delle luci emesse.Utilizzando il catetere inter juggler iniettare 50 microlitri di soluzione micromolare 0,2 del tracciante fluorescente per etichettare la vascolarizzazione. Posizionare lo stadio del microscopio con il supporto e il mouse sotto l'obiettivo del microscopio. Assicurarsi che l'anello sia sempre pieno di soluzione salina e riempirlo se necessario e immergere l'obiettivo e la soluzione salina.Utilizzare l'epifluorescenza per localizzare i vasi del midollo osseo e osservare i megacariociti allineati lungo i vasi sinusoidi. Per le acquisizioni lunghe, imposta un'acquisizione spazio-temporale 3D con un'immagine da 384 x 384 pixel utilizzando uno scanner di risonanza Hertz da otto chili e la modalità bidirezionale. Utilizza la media di linea con una buona risoluzione, quindi scegli la dimensione del passo Z ottimizzata e imposta l'intervallo di tempo necessario prima di iniziare l'acquisizione.Per acquisizioni brevi e rapide, scegli un tipo di acquisizione spazio-temporale e riduci al minimo le dimensioni dell'immagine. Se necessario, regolare l'immagine sulla nave ruotando il campo di imaging. Utilizzare la massima velocità di scansione disponibile e la scansione bidirezionale.Riduci al minimo la media delle linee per trovare il compromesso ottimale tra definizione dell'immagine e rapidità dell'acquisizione. Acquisisci un solo piano Z e riduci al minimo l'intervallo di tempo per l'acquisizione. Per misurare la velocità piastrinica dovrebbero essere sufficienti da 10 a 20 secondi di acquisizione.Il tracciante fluorescente è stato somministrato per via endovenosa per immaginare i vasi sinusoidi del midollo anastomoso nel midollo osseo del cranio, con la direzione del flusso raffigurata dalla freccia. La velocità piastrinica fluorescente è stata registrata in ogni ramo del vaso ed è stata osservata una variazione. I vasi sinusoidi presentano flussi complessi a causa delle anastomosi, con presenza di riflusso del flusso e persino stasi.Le frecce indicavano la direzione opposta del flusso alla biforcazione. La velocità piastrinica è stata misurata anche per i rami dei vasi sinistro e destro indicati irregolarità nel tempo in ciascun ramo del vaso con fasi di accelerazione, stasi e decelerazione. Sono state osservate diverse morfologie di proplatelet, tra cui proplatelet con margini irregolari, poi proplatelets longed e proplatelet spesse e corte.Quando i megacariociti estendevano i proplatelet nelle aree di flussi complessi, i proplatelet si spostavano da un ramo del vaso all'altro, secondo la direzione del flusso. Dopo aver interrotto il flusso sanguigno, i proplatelet si sono rilassati e il topo ha subito inaspettatamente un arresto cardiaco, ha indicato l'importanza delle forze idrodinamiche nell'allungamento del proplatelet. La larghezza e la lunghezza dei proplatelet sono state misurate anche con una larghezza media di 5,2 micrometri e una lunghezza massima media di circa 185 micrometri.Tracciare la lunghezza del proplatelet in funzione del tempo consente la visualizzazione del comportamento dei proplatelet durante le fasi di allungamento, stasi o persino retrazione. È stata osservata la velocità media di allungamento di circa 10 micrometri al minuto. L'installazione del catetere, ha permesso l'iniezione di farmaci per studiare gli effetti sulla formazione di proplatelet o altri eventi di interesse in tempo reale.

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Installazione dell'assemblaggio dell'anello cranico nel modello murino: una procedura chirurgica per l'assemblaggio della finestra di visualizzazione dell'impianto sul cranio murino per l'imaging del midollo osseo del cranio ad alta risoluzione

L'imaging time-lapse nell'animale vivente fornisce informazioni preziose sulla riorganizzazione strutturale nel cervello intatto. Qui, introduciamo una preparazione di cranio assottigliato che consente l'imaging transcranico di strutture sinaptiche marcate in fluorescenza nella corteccia di topo vivente mediante microscopia a due fotoni.

Two-Photon<em&gt; In vivo</em&gt; Imaging di spine dendritiche nella corteccia mouse Uso un teschio Diluito-Preparazione

Combinatorie 5 proteine ​​fluorescenti marcatura di cellule staminali e progenitrici ematopoietiche consente il monitoraggio in vivo clonale tramite confocale e microscopia a due fotoni, fornendo approfondimenti midollo osseo emopoietico architettura durante la rigenerazione. Questo metodo permette di mappatura destino non invasiva di cellule HSPCs derivate spettralmente-codificati nei tessuti intatti per lunghi periodi di tempo dopo il trapianto.

In vivo clonale Monitoraggio di staminali ematopoietiche e cellule progenitrici Contrassegnato da cinque proteine ​​fluorescenti che utilizzano confocale e microscopia Multiphoton

La natura delle interazioni tra staminali e progenitrici di cellule ematopoietiche (HSPCs) e nicchie di midollo osseo è poco conosciuta. Modifiche hardware personalizzato e un protocollo di acquisizione multi-step consentono l'utilizzo di due fotoni e microscopia confocale per immagine ex vivo HSPCs etichettati homed all'interno delle aree del midollo osseo, interazioni monitoraggio e movimento.

In Vivo inseguimento 4-dimensionale di emopoietiche staminali e progenitrici celle di topo adulto cranica di Midollo Osseo

I monociti sono regolatori chiave dell'immunità innata e svolgono un ruolo critico nel rinnovamento del sistema fagocitario mononucleare periferico e in caso di infiammazione. Questo manoscritto descrive la procedura di imaging in tempo reale del midollo osseo calvaria di topo per studiare il meccanismo di mobilizzazione dei monociti.

Monitoraggio midollo osseo di topo monociti<em&gt; In Vivo</em

Descriviamo un protocollo per monitorare il comportamento dei neutrofili e dei monociti nelle vene mesenteriche in condizioni stazionarie e infiammatorie utilizzando la microscopia confocale intravitale su topi anestetizzati.

Imaging neutrofili e monociti in mesenterica Veins intravitale Microscopia su topi anestetizzati in tempo reale

Il protocollo descrive un nuovo modello di camera a finestra del femore murino che può essere utilizzato per tracciare il movimento delle cellule nel midollo osseo femorale in vivo. La microscopia a fluorescenza multifotone intravitale viene utilizzata per visualizzare tre componenti del midollo osseo femorale (vascolarizzazione, matrice di collagene e neutrofili) nel tempo.

Femore finestra del modello Camera per<em&gt; In Vivo</em&gt; Monitoraggio delle cellule nel midollo osseo murino

Microscopia di fluorescenza intravital (IVFM) del calvarium è applicata in combinazione con i modelli genetici animali per studiare l'homing e l'attecchimento di cellule ematopoietiche in nicchie del midollo osseo (BM).

La combinazione di microscopia di fluorescenza Intravital (IVFM) con modelli genetici per studiare la dinamica di attecchimento delle cellule ematopoietiche per nicchie di midollo osseo

Qui presentiamo un protocollo per analizzare l'ultrastruttura dei megacariociti in situ utilizzando la microscopia elettronica a trasmissione (TEM). I midolli ossei murini vengono raccolti, fissati, incorporati in resina epossidica e tagliati in sezioni ultrassteste. Dopo la colorazione di contrasto, il midollo osseo viene osservato al microscopio TEM a 120 kV.

Sul posto Esplorazione della megacariopoiesi murina usando la microscopia elettronica a trasmissione

Qui, descriviamo in dettaglio il metodo di espianto del midollo osseo, dalla preparazione del campione all'analisi microscopica del vetrino, per valutare la capacità dei megacariociti che si sono differenziati nel loro ambiente fisiologico di formare proplatelet.

Dinamica di formazione dei proplatelet degli espianti di midollo osseo fresco del topo

La microscopia intravitale consente lo studio di processi biologici dinamici come la rigenerazione dei tessuti e lo sviluppo del tumore. Il midollo osseo calvariale, un tessuto altamente dinamico, offre informazioni sull'emopoiesi e sulla funzione vascolare. L'utilizzo di un impianto di fissazione della testa biocompatibile stampato in 3D consente l'imaging longitudinale ripetitivo, migliorando la nostra comprensione delle dinamiche dei tessuti e del microambiente tumorale.

Imaging longitudinale intravitale della dinamica vascolare nel midollo osseo calvariale

Scopri l'imaging a due fotoni di megacariociti e proplatati nel midollo osseo del cranio del topo. Questo metodo consente la visualizzazione in tempo reale della formazione delle piastrine in vivo.

In vivo Imaging a due fotoni di megacariociti e proplatati nel midollo osseo del cranio del topo

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