Creazione di due aneurismi digeriti con elastasi sacculare con emodinamica diversa in un coniglio

Il nostro protocollo descrive una tecnica riproducibile per creare un modello di aneurismi di coniglio con emodinamica sia del moncone che della biforcazione e condizione della parete degenerata in un singolo animale e durante un singolo approccio chirurgico con bassi tassi di morbilità e mortalità e alti tassi di pervietà. Il modello consente un confronto diretto del decorso naturale degli aneurismi sacculari rispetto al ruolo dell'emodinamica, nonché la sperimentazione di dispositivi endovascolari in due distinte condizioni di configurazione e flusso dell'aneurisma. Lo svantaggio principale di questo metodo rimane lo stesso della creazione del classico modello di biforcazione e aneurismi del moncone, la necessità di sofisticate attrezzature di laboratorio e competenze microchirurgiche specifiche.

Utilizzare un bisturi per fare un'incisione cutanea mediana dall'osso ioide fino a 1,5 centimetri caudali allo sterni del manubrio. Preparare il tessuto sottocutaneo e grasso dall'incisione mediale mentre si esegue un'emostasi meticolosa. Liberare il muscolo sternocefalo dal tessuto connettivo aderente e applicare la lidocaina localmente per evitare il mioclono.

Esporre l'arteria carotide comune destra, o CCA, medialmente del muscolo sternocefalico, e tenerla bagnata con tamponi bagnati. Preparare le parti laterali e prossimali del muscolo sternocefalo e ritrarlo medialmente con un anello vascolare per esporre il CCA. Identificare la vena giugulare esterna e proteggerla con un micro tampone bagnato.

Sezionare attentamente il tessuto connettivo lungo il CCA fino alla biforcazione del tronco brachiocefalico per esporre l'arteria. Se piccoli rami stanno emergendo dall'arteria, coagularli con il cauterizzatore. Applicare due clip temporanee, con la prima all'origine del CCA e la seconda distale di due centimetri da esso.

Posizionare un cuscinetto di gomma sotto il recipiente e risciacquare con papaverina cloridrato per la vasodilatazione. Rimuovere accuratamente l'avventizia usando microforbici. Eseguire un'arteriotomia sotto la clip distale con un catetere a quattro calibro 22 e inserire il catetere caudalmente fino alla clip prossimale.

Lavare il segmento per via intraluminale con cloruro di sodio eparinizzato fino a quando non c'è sangue visibile. Quindi fissare il catetere con una legatura 4-0. Attraverso il catetere, iniettare da 0,1 a 0,2 millilitri di elastasi nel segmento dell'arteria e incubare per 20 minuti.

Dopo 20 minuti di tempo di incubazione con elastasi, eliminare la soluzione di elastasi e cambiare la siringa per sciacquare il segmento dell'arteria circa 10 volte con lo 0,9% di soluzione salina. Applicare due legature, con la prima a cinque millimetri distale della clip prossimale e la seconda appena prossimale sotto l'arteriotomia. Tagliare il vaso a circa tre millimetri sopra la prima legatura e ancora una volta tra la seconda legatura e la clip distale.

Mantenere questo innesto autologo in una soluzione eparinizzata fino alla creazione dell'aneurisma della biforcazione. Aprire con attenzione la prima clip prossimale e misurare l'aneurisma. Per creare un aneurisma di biforcazione, rimuovere attentamente l'avventizia e praticare un'incisione longitudinale di circa due millimetri lateralmente nel moncone del CCA destro.

Applicare due clip temporanee sul CCA sinistro per delimitare il segmento di circa un centimetro e rimuovere l'avventizia intermedia. Eseguire un'arteriotomia con un ago calibro 23. Quindi, lavare il segmento con cloruro di sodio eparinizzato.

Ingrandire l'arteriotomia usando microforbici a circa quattro o cinque millimetri per consentire la sutura del CCA destro e della sacca dell'aneurisma. Per eseguire l'anastomosi, suturare la parete posteriore prossimale della carotide destra smussata con cinque punti, a partire dal bordo prossimale dell'arteriotomia sul CCA sinistro. Quindi, suturare il retro della sacca dell'aneurisma con quattro o cinque punti, a partire dal bordo distale dell'arteriotomia sul CCA sinistro.

Continuare con il dorso distale a livello dell'incisione della bocca di pesce per suturare con il retro verticale dell'innesto di aneurisma con tre punti. Suturare il lato anteriore dell'incisione della bocca di pesce con tre punti, iniziando verso l'alto e spostandosi verso il basso. Finire con la sutura anteriore tra il CCA sinistro e il lato anteriore dell'innesto di aneurisma e CCA destro con circa sei punti.

Prima di terminare l'anastomosi, sciacquare i vasi con soluzione salina eparinizzata allo 0,9% per via intraluminale. Rimuovere la clip sul CCA destro mentre si esercita una certa pressione sull'anastomosi con i micro tamponi per l'emostasi. Quindi, continua rimuovendo la clip distale dal CCA sinistro.

Se non c'è sanguinamento maggiore, continuare con l'estrazione della clip prossimale sul CCA sinistro per consentire il flusso sanguigno. Al follow-up, la pervietà dell'aneurisma è stata confermata dall'angiografia a risonanza magnetica. Viene mostrata una sequenza TOF tridimensionale acquisita con una risonanza magnetica a tre tesla focalizzata sulle arterie del collo.

L'aneurisma del moncone è osservato sull'arteria succlavia destra e l'aneurisma della biforcazione è osservato sulla biforcazione creata anastomosi il CCA destro sull'arteria succlavia sinistra. La pervietà dell'aneurisma è stata confermata anche dall'ispezione macroscopica dopo l'estrazione del tessuto. Le scanalature principali sulla clip indicano un millimetro, mentre le scanalature minori indicano 0,5 millimetri.

L'analisi microscopica del moncone e degli aneurismi della biforcazione è stata eseguita dopo aver colorato i campioni con ematossilina-eosina. Due passaggi sono fondamentali durante l'intervento chirurgico, in primo luogo, l'esposizione e la dissezione dell'arteria carotide destra fino al tronco brachiocefalico, e in secondo luogo, la protezione delle strutture vitali come la trachea, la vena giugulare e il nervo laringeo.