Name: Dissezione ovarica planaria per analisi ultrastrutturale e colorazione anticorpale (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-09-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 8 s
Description: Impara la dissezione ovarica in planarie Schmidtea mediterranea per analisi ultrastrutturale con microscopia elettronica a trasmissione e colorazione anticorpale. Questo metodo consente imaging di alta qualità della biologia cellulare degli ovociti.

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<ol><li>Brubacher, J. L., Vieira, A. P., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+the+planarian+Schmidtea+mediterranea+for+high-resolution+histology+and+transmission+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Preparation of the planarian Schmidtea mediterranea for high-resolution histology and transmission electron microscopy.</a> Nature Protocols. 9 (3), 661-673 (2014).</li>
<li>Carpenter, K. S., Morita, M., Best, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructure+of+the+photoreceptor+of+the+planarian+Dugesia+dorotocephala.+I.+Normal+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Ultrastructure of the photoreceptor of the planarian Dugesia dorotocephala. I. Normal eye.</a> Cell Tissue Research. 148 (2), 143-158 (1974).</li>
<li>Ishii, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ultrastructure+of+the+protonephridial+flame+cell+of+the+freshwater+planarian+Bdellocephala+brunnea%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">The ultrastructure of the protonephridial flame cell of the freshwater planarian Bdellocephala brunnea.</a> Cell Tissue Research. 206 (3), 441-449 (1980).</li>
<li>Morita, M., Best, J. B., Noel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electron+microscopic+studies+of+planarian+regeneration%3A+I.+Fine+structure+of+neoblasts+in+Dugesia+dorotocephala%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ultrastructure+Research%22%5BJournal%5D)">Electron microscopic studies of planarian regeneration: I. Fine structure of neoblasts in Dugesia dorotocephala.</a> Journal of Ultrastructure Research. 27 (1), 7-23 (1969).</li>
<li>Hyman, L. H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHyman%2C+LH+%22The+invertebrates%3A+Platyhelminthes+and+Rhynchocoela%2C+the+acoelomate+Bilateria%22">The invertebrates: Platyhelminthes and Rhynchocoela, the acoelomate Bilateria</a>. 2, 550(1951).</li>
<li>Higuchi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+and+categorization+of+fluorescence+activated+cell+sorted+planarian+stem+cells+by+ultrastructural+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%2C+Growth+%26+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Characterization and categorization of fluorescence activated cell sorted planarian stem cells by ultrastructural analysis.</a> Development, Growth & Differentiation. 49 (7), 571-581 (2007).</li>
<li>Chong, T., Stary, J. M., Wang, Y., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+markers+to+characterize+the+hermaphroditic+reproductive+system+of+the+planarian+Schmidtea+mediterranea%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Molecular markers to characterize the hermaphroditic reproductive system of the planarian Schmidtea mediterranea.</a> BMC Developmental Biology. 11, 69(2011).</li>
<li>Handberg-Thorsager, M., Salo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+planarian+nanos-like+gene+Smednos+is+expressed+in+germline+and+eye+precursor+cells+during+development+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Development+Genes+and+Evolution%22%5BJournal%5D)">The planarian nanos-like gene Smednos is expressed in germline and eye precursor cells during development and regeneration.</a> Development Genes and Evolution. 217 (5), 403-411 (2007).</li>
<li>Kobayashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+identification+of+D-tryptophan+as+a+bioactive+substance+for+postembryonic+ovarian+development+in+the+planarian+Dugesia+ryukyuensis%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">The identification of D-tryptophan as a bioactive substance for postembryonic ovarian development in the planarian Dugesia ryukyuensis.</a> Scientific Reports. 7, 45175(2017).</li>
<li>Maezawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Planarian+D-amino+acid+oxidase+is+involved+in+ovarian+development+during+sexual+induction%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+Development%22%5BJournal%5D)">Planarian D-amino acid oxidase is involved in ovarian development during sexual induction.</a> Mechanisms of Development. 132, 69-78 (2014).</li>
<li>Rouhana, L., Tasaki, J., Saberi, A., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+dissection+of+the+planarian+reproductive+system+through+characterization+of+Schmidtea+mediterranea+CPEB+homologs%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Genetic dissection of the planarian reproductive system through characterization of Schmidtea mediterranea CPEB homologs.</a> Developmental Biology. 426 (1), 43-55 (2017).</li>
<li>Sato, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+origin+of+the+germline+stem+cells+as+revealed+by+the+expression+of+nanos-related+gene+in+planarians%5BTitle%5D)+AND+%22Development%2C+Growth+%26+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Identification and origin of the germline stem cells as revealed by the expression of nanos-related gene in planarians.</a> Development, Growth & Differentiation. 48 (9), 615-628 (2006).</li>
<li>Tharp, M. E., Collins, J. J., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+lophotrochozoan-specific+nuclear+hormone+receptor+is+required+for+reproductive+system+development+in+the+planarian%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">A lophotrochozoan-specific nuclear hormone receptor is required for reproductive system development in the planarian.</a> Developmental Biology. 396 (1), 150-157 (2014).</li>
<li>Wang, Y., Zayas, R. M., Guo, T., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((nanos+function+is+essential+for+development+and+regeneration+of+planarian+germ+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">nanos function is essential for development and regeneration of planarian germ cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (14), 5901-5906 (2007).</li>
<li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+nuclear+hormone+receptor+and+lipid+metabolism+axis+are+required+for+the+maintenance+and+regeneration+of+reproductive+organs%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">A nuclear hormone receptor and lipid metabolism axis are required for the maintenance and regeneration of reproductive organs.</a> bioRxiv. , 279364(2018).</li>
<li>Saberi, A., Jamal, A., Beets, I., Schoofs, L., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GPCRs+direct+germline+development+and+somatic+gonad+function+in+planarians%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biology%22%5BJournal%5D)">GPCRs direct germline development and somatic gonad function in planarians.</a> PLoS Biology. 14, 1002457(2016).</li>
<li>Steiner, J. K., Tasaki, J., Rouhana, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Germline+defects+caused+by+Smed-boule+RNA-interference+reveal+that+egg+capsule+deposition+occurs+independently+of+fertilization%2C+ovulation%2C+mating%2C+or+the+presence+of+gametes+in+planarian+flatworms%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genetics%22%5BJournal%5D)">Germline defects caused by Smed-boule RNA-interference reveal that egg capsule deposition occurs independently of fertilization, ovulation, mating, or the presence of gametes in planarian flatworms.</a> PLoS Genetics. 12, 1006030(2016).</li>
<li>Iyer, H., Issigonis, M., Sharma, P. P., Extavour, C. G., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+premeiotic+function+for+boule+in+the+planarian+Schmidtea+mediterranea%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">A premeiotic function for boule in the planarian Schmidtea mediterranea.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (25), 3509-3518 (2016).</li>
<li>Rouhana, L., Vieira, A. P., Roberts-Galbraith, R. H., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PRMT5+and+the+role+of+symmetrical+dimethylarginine+in+chromatoid+bodies+of+planarian+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">PRMT5 and the role of symmetrical dimethylarginine in chromatoid bodies of planarian stem cells.</a> Development. 139 (6), 1083-1094 (2012).</li>
<li>Wang, Y., Stary, J. M., Wilhelm, J. E., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+functional+genomic+screen+in+planarians+identifies+novel+regulators+of+germ+cell+development%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">A functional genomic screen in planarians identifies novel regulators of germ cell development.</a> Genes & Development. 24 (18), 2081-2092 (2010).</li>
<li>Guo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subcellular+analyses+of+planarian+meiosis+implicates+a+novel%2C+double-membraned+vesiculation+process+in+nuclear+envelope+breakdown%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Subcellular analyses of planarian meiosis implicates a novel, double-membraned vesiculation process in nuclear envelope breakdown.</a> bioRxiv. , 620609(2019).</li>
<li>Grudniewska, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+signatures+of+somatic+neoblasts+and+germline+cells+in+Macrostomum+lignano%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Transcriptional signatures of somatic neoblasts and germline cells in Macrostomum lignano.</a> Elife. 5, 20607(2016).</li>
<li>Wudarski, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+free-living+flatworm+Macrostomum+lignano%5BTitle%5D)+AND+%22Evodevo%22%5BJournal%5D)">The free-living flatworm Macrostomum lignano.</a> Evodevo. 11, 5(2020).</li>
<li>Wudarski, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+transgenesis+and+annotated+genome+sequence+of+the+regenerative+flatworm+model+Macrostomum+lignano%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Efficient transgenesis and annotated genome sequence of the regenerative flatworm model Macrostomum lignano.</a> Nature Communications. 8 (1), 2120(2017).</li>
<li>Maezawa, T., Sekii, K., Ishikawa, M., Okamoto, H., Kobayashi, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMaezawa%2C+T+%22Reproductive+and+Developmental+Strategies%3A+The+Continuity+of+Life%22">Reproductive and Developmental Strategies: The Continuity of Life</a>. Kobayashi, K., Kitano, T., Iwao, Y., Kondo, M. , Springer. Japan, Tokyo. 175-201 (2018).</li>
<li>Newmark, P. A., Reddien, P. W., Cebria, F., Sanchez Alvarado, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ingestion+of+bacterially+expressed+double-stranded+RNA+inhibits+gene+expression+in+planarians%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Ingestion of bacterially expressed double-stranded RNA inhibits gene expression in planarians.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100, Suppl 1 11861-11865 (2003).</li>
<li>Orii, H., Mochii, M., Watanabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+%22soaking+method%22+for+RNA+interference+in+the+planarian+Dugesia+japonica%5BTitle%5D)+AND+%22Development+Genes+and+Evolution%22%5BJournal%5D)">A simple "soaking method" for RNA interference in the planarian Dugesia japonica.</a> Development Genes and Evolution. 213 (3), 138-141 (2003).</li>
<li>Rouhana, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+interference+by+feeding+in+vitro-synthesized+double-stranded+RNA+to+planarians%3A+methodology+and+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">RNA interference by feeding in vitro-synthesized double-stranded RNA to planarians: methodology and dynamics.</a> Developmental Dynamics. 242 (6), 718-730 (2013).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>16% paraformaldeide Scienze</td><td>della microscopia elettronica</td><td>15710</td> Scienze della <td></td></tr><tr><td>microscopia elettronica</td><td>OsO4 acquosa</td> di grado EM <td>2% 19152</td><td></td></tr><tr><td>Scienze della microscopia elettronica</td> della<td>glutaraldeide al 50%</td><td>16320</td><td></td></tr><tr><td>Micrografia digitale</td> di grado EM <td>Gatan Inc.</td><td></td><td>Versione 2.33.97.1, raccolta dati TEM</td></tr><tr><td>resina Epon</td><td>Microscopia elettronica Scienze</td><td>14120</td><td>Embed 812 Kit, liquido, resina epossidica</td></tr><tr><td>Etanolo</td><td>Ted Pella</td><td>19207</td><td>Denaturato</td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>H3570</td><td></td></tr><tr><td>Siero di cavallo</td><td>Sigma</td><td>H1138</td><td></td></tr><tr><td>Microscopia elettronica con acetato di piombo</td><td>Scienze</td><td></td><td></td>6080564</tr><tr><td>MilliQ acqua</td><td></td><td></td><td>trattata con osmosi inversa</td></tr><tr><td>N-acetil-L-cisteina</td><td>Sigma</td><td>A7250</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>sigma</td><td>P7793</td><td></td></tr><tr><td>Prolong Diamond Antifade Mountant</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>P36965</td><td></td></tr><tr><td>Ossido di propilene</td><td>Microscopia elettronica</td><td>Scienze 75569</td><td>Grado EM</td></tr><tr><td>&nbsp; Proteinasi K</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25530049</td><td></td></tr><tr><td>Blu di toluidina O Microscopia</td><td>elettronica Scienze</td><td>92319</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio elettronico a trasmissione</td><td>FEI</td><td></td><td>Tecnai G2 Spirit BioTWIN</td></tr><tr><td>Acetato di uranile</td><td>Microscopia elettronica</td><td>Scienze 541093</td><td></td></tr></tbody></table>

dissezione ovarica planaria per analisi ultrastrutturale e colorazione anticorpale

Planarian Ovary Dissection for Ultrastructural Analysis and Antibody Staining

Il metodo qui presentato è stato descritto da Guo et al.21. La chiave per una dissezione di successo è identificare la pigmentazione ovarica e posizionare correttamente le guide. La strategia del metodo è quella di passare da posizioni ampie a una posizione specifica. Innanzitutto, per raggiungere questo obiettivo, fare affidamento sui modelli di pigmentazione dorsale e ventrale (Figura 1A, B). La pigmentazione ventrale, dove risiedono le ovaie, diven...

Dissezione ovarica planaria per analisi ultrastrutturale e colorazione anticorpale

Accessibility to germ cells allows the study of germ cell development, meiosis, and recombination. The sexual biotype of the freshwater planarian, ...

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Questo protocollo descrive una procedura per l'individuazione e organi da sezionare il pesce zebra adulto.

Dissezione di organi dal Zebrafish adulti

Come nicchie e le cellule staminali si formano durante lo sviluppo è una questione importante con implicazioni pratiche.

Dissezione e colorazione di Drosophila Larvali ovaie

Qui presentiamo un adattamento del passivo chiarezza e metodo di ricostruzione 3D per la visualizzazione del vasculature ovarico e capillari follicolari nelle ovaie intatte del mouse.

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L'ovaio di Drosophila è un sistema eccellente modello per studiare lo sviluppo di nicchia delle cellule staminali. Anche se i metodi per la dissezione ovaie larvale e adulte sono stati pubblicati, le dissezioni pupal ovaia richiedono tecniche differenti che non sono stati pubblicati in dettaglio. Qui descriviamo un protocollo per la dissezione, colorazione e montaggio pupale ovaie.

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Qui, presentiamo un protocollo per quantificare i follicoli nelle ovaie colte di giovani topi senza sezionamento seriale. Mediante immunofluorescenza di intero organo e tessuto di compensazione, sezionamento fisico viene sostituito con sezionamento ottico. Questo metodo di preparazione del campione e visualizzazione mantiene l'integrità dell'organo e facilita la quantificazione automatizzata di cellule specifiche.

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Qui, presentiamo un protocollo ottimizzato per l'imaging di intere ovaie per analisi quantitative e qualitative utilizzando immunocolorazione a montaggio intero, microscopia multifotonica e visualizzazione e analisi 3D. Questo protocollo supporta un'elaborazione ad alto rendimento, affidabile e ripetibile applicabile per tossicologia, diagnostica clinica e saggi genomici della funzione ovarica.

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Viene presentato un metodo per la microdissezione dell'ovidotto di topo che consente la raccolta dei singoli segmenti mantenendo l'integrità dell'RNA. Inoltre, viene descritta la procedura di dissociazione delle cellule oviduttali non enzimatiche. I metodi sono appropriati per la successiva analisi genica e proteica dei segmenti oviduttali funzionalmente diversi e delle cellule oviduttali dissociate.

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Il protocollo dimostra un metodo di dissezione semplice e facile, adatto per gli insetti femmina migratori di tipo selvatico catturati con trappole a proiettori. Questa tecnica può chiarire in modo significativo la stessa specie confrontando entrambi i tessuti riproduttivi, vale a dire il sacco di accoppiamento e lo sviluppo ovarico degli insetti femmina wild-type.

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Questo video dimostra tutta montare immunoistochimica, un metodo con cui il modello di espressione spaziale e temporale di un antigene può essere visualizzata in embrioni di pollo giovani. Questo metodo è stato originariamente introdotto da Jane e Tom Dodd Jessell.

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Impara la dissezione ovarica in planarie Schmidtea mediterranea per analisi ultrastrutturale con microscopia elettronica a trasmissione e colorazione anticorpale. Questo metodo consente imaging di alta qualità della biologia cellulare degli ovociti.

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