Un modello murino efficace di danno unilaterale da ischemia-riperfusione renale

Il danno da ischemia-riperfusione renale è la principale causa di insufficienza renale acuta. Questo modello è molto utile per comprendere i cambiamenti fisiopatologici che si verificano nel rene dopo un insulto ischemico. Questo modello è efficiente in termini di tempo e costi e fornisce dati altamente riproducibili.

Oltre a questo, questo modello di ischemia renale unilaterale consente al ricercatore di lavorare con tempi ischemici più lunghi mantenendo un alto tasso di sopravvivenza. Per cominciare, posizionare il mouse anestetizzato sul tavolo delle operazioni. Dopo aver sterilizzato l'area chirurgica, utilizzare una lama di bisturi per eseguire un'incisione chirurgica laterale dorsale di circa un centimetro sul fianco destro dietro la costola e continuare il coddley di circa un centimetro parallela alla linea mediana lombare.

Transect la muscolatura addominale usando le forbici per visualizzare lo spazio retroperitoneale. Utilizzare un batuffolo di cotone sterile per rimuovere le piccole quantità di sangue prodotte durante il sezionamento dei muscoli. Quindi, spingere il rene destro fuori dalla cavità addominale.

Esporre lentamente e con attenzione il rene con una pinza grigia e identificare il peduncolo renale. Quindi rimuovere con cura il tessuto adiposo intorno al peduncolo. Utilizzare un Halsted Mosquito Hemostat per manipolare il morsetto vascolare.

Per indurre l'ischemia, posizionare il morsetto vascolare sopra l'arteria renale e la vena presenti nel peduncolo renale evitando di bloccare l'uretere adiacente. Coprire il rene bloccato con una garza sterile imbevuta di soluzione salina per evitare l'essiccazione. Lasciare i reni sulla garza per 30 minuti e monitorare periodicamente la profondità e l'umidità dell'anestesia della garza.

Poco prima della fine del periodo di ischemia, scoprire il rene e tenere l'Halsted Mosquito Hemostat, pronto per la rimozione del morsetto. Alla fine del periodo di ischemia, aprire il morsetto vascolare con l'emostato e rimuovere il morsetto per consentire la perfusione del rene. Per gli animali di controllo fittizi, eseguire l'intervento chirurgico dimostrato senza bloccare il peduncolo renale.

Dopo aver verificato il cambiamento di colore del rene, riportare il rene nella cavità addominale. Chiudere i muscoli addominali in uno schema crociato con sutura riassorbibile 5-0. Chiudere la pelle in un modello di materasso orizzontale con sutura riassorbibile 5-0.

Pulire la ferita con la soluzione di povidone-iodio. Dopo la lesione da perfusione da ischemia, la riduzione del peso corporeo è stata osservata in alcuni topi con meno del 10% del peso corporeo iniziale. Tuttavia, la maggior parte dei topi ha recuperato il loro peso corporeo iniziale tra i giorni 4 e 7 dopo l'intervento chirurgico.

I topi di controllo non hanno mostrato alcun cambiamento di peso corporeo dopo l'intervento chirurgico. Diversi cambiamenti nella morfologia renale post-operatoria sono stati identificati utilizzando ematossilina-eosina, acido periodico Schiff e colorazione Trichrome di Masson. La presenza di colata proteica nel lume tubulare è stata osservata dopo quattro ore.

La dilatazione tubulare è stata rilevata a otto ore e il calco tubulare e la necrosi cellulare nei segmenti midollari sono stati notati a 16 ore dopo l'intervento chirurgico IRI. Dopo 24 ore dall'intervento chirurgico, è stata osservata una dilatazione tubulare. L'infiltrazione di linfociti e macrofagi e nuclei cellulari ingrossati sono stati rilevati dopo 48 ore.

Entro il giorno 4, sono state osservate cellule tubulari mitotiche e al giorno 7 dopo l'intervento chirurgico IRI è stata rilevata la fibrosi focale. La corteccia renale dei topi durante la riperfusione precoce è stata monitorata utilizzando la colorazione PAS e la progressiva attenuazione del bordo del pennello era visibile. Le aree della fibrosi interstiziale al giorno 7 post-operatorio sono state visualizzate utilizzando la colorazione del tricomi di Masson.

È stato sviluppato un sistema di punteggio delle lesioni tubolari per classificare il danno nel tempo. I punteggi più alti di lesioni tubulari sono stati ottenuti tra 8 ore e 24 ore dopo l'IRI renale. Alcuni dei passaggi più critici sono il corretto posizionamento del morsetto vascolare nel peduncolo renale e il mantenimento di una temperatura corporea costante durante l'intervento chirurgico.