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Tecnica di frazionamento quantitativo dei microtubuli per separare microtubuli stabili, microtubu...
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JoVE Journal Biochemistry
Quantitative Microtubule Fractionation Technique to Separate Stable Microtubules, Labile Microtubules, and Free Tubulin in Mouse Tissues

Tecnica di frazionamento quantitativo dei microtubuli per separare microtubuli stabili, microtubuli labili e tubulina libera nei tessuti di topo

Full Text
2,732 Views
07:21 min
November 17, 2023

DOI: 10.3791/63358-v

Ayaka Hagita-Tatsumoto1,2, Tomohiro Miyasaka1,2,3

1Department of Neuropathology, Faculty of Life and Medical Sciences,Doshisha University, 2Center for Research in Neurodegenerative Diseases,Doshisha University, 3Laboratory of Physiology and Anatomy, School of Pharmacy,Nihon University

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

I microtubuli, che sono polimeri di tubulina, svolgono un ruolo cruciale come componente del citoscheletro nelle cellule eucariotiche e sono noti per la loro instabilità dinamica. Questo studio ha sviluppato un metodo per frazionare i microtubuli per separarli in microtubuli stabili, microtubuli labili e tubulina libera per valutare la stabilità dei microtubuli in vari tessuti di topo.

Il nostro nuovo protocollo aiuta a distinguere e quantificare tre stati degli anelli tubolari, come i microtubuli stabili, i microtubuli labili e i tubuli liberi nei tessuti animali. Questa tecnica è composta da semplici passaggi e può valutare la stabilità strutturale del tubo, che non può essere rilevata dalla quantificazione della modifica post-traduzionale del tubo. Questo metodo è essenziale per la ricerca e lo sviluppo di metodi terapeutici per le malattie in cui la stabilità dei microtubuli è fondamentale, come il morbo di Alzheimer e i tumori.

Iniziare la procedura preparando l'abbigliamento da laboratorio per la dissezione dei tessuti. Riempi una scatola con ghiaccio tritato e posizionaci sopra due piastre di Petri. Riempire un piatto con soluzione tampone fosfato ghiacciata o PBS per il lavaggio transitorio e la conservazione dei tessuti sezionati.

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Questo mese in JoVE numero 201 Tubulina microtubulo labile microtubulo stabile modificazione post-traduzionale proteina associata ai microtubuli frazionamento agenti mirati ai microtubuli

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