Trapianto di pelle murina
16 gennaio 2008
Trapianto allogenico pelle è un modello standard per le risposte T test della cellula ospite per diversi antigeni MHC-donatore. Questo video-articolo fornisce un tutorial visivo di ogni passo coinvolti in esecuzione di un trapianto di BALB/c--> C57BL / 6 della pelle.
Benvenuti nel laboratorio del Dottor Michael Kalen. Sono Kim Gard. Oggi dimostreremo un modello di trapianto cutaneo che utilizza la combinazione di ceppi allogenici BC e black six, uno dei modelli più rigorosi e meno complessi tecnicamente per lo studio del rigetto del trapianto di tessuto.
Il trapianto di pelle è una tecnica standard utilizzata per saggiare le risposte allogeniche ed è comunemente impiegata per valutare l'efficacia di diverse strategie di induzione della tolleranza. Cominciamo dunque. Questa procedura inizia con il prelievo della pelle dal nostro mouse donatore BAB.
Prima eutanasia il donatore in conformità con la procedura operativa standard del comitato per il benessere degli animali (Iacuc). Ora inumidisca i peli alla base con alcol, prelevi la pelle rimuovendo l'orecchio il più vicino possibile alla base e lo collochi sul ghiaccio. Successivamente, divida ogni disco auricolare scartando la lamina ventrale collagena e lasci galleggiare il tessuto sul ghiaccio.
Ora la pelle del donatore è pronta per il trapianto. La procedura di trapianto inizia anestetizzando l'animale ricevente mediante procedure approvate. Una volta che il ricevente è sufficientemente anestetizzato, rimuovere l'animale dalla camera e somministrare bup e next per via IP per il sollievo dal dolore.
Posizionare il ricevente in posizione laterale e assicurarsi che l'animale sia completamente sedato eseguendo una pinzatura delle dita dei piedi. Inumidire il pelo con alcol e rasare. Una volta che il ricevente è stato rasato accuratamente, praticare un'incisione di circa uno-due centimetri.
Posizionare la scansione del donatore sopra l'incisione e rimuovere il liquido in eccesso con un bastoncino sterile. Ora rimuovere con cura l'eccesso di pelle del donatore, l'animale e la benda. Verificare che la benda non sia troppo stretta valutando la respirazione, quindi controllare che le braccia siano libere di muoversi.
Ora fissare la benda con un singolo punto di sutura. Collocare il topo in una gabbia pulita con una lampada riscaldante fino a quando l'animale non si sarà ripreso nei primi giorni. Dopo l'intervento chirurgico, monitorare l'animale alcune volte al giorno per rilevare segni di malessere e somministrare buprenorfina secondo necessità per il dolore.
Cinque a sette giorni dopo l'intervento chirurgico, le bende vengono rimosse. Dimostrerò la rimozione delle bende su un ricevente al sesto giorno dal trapianto. Una volta che il topo è completamente anestetizzato, rimuovere il punto di sutura e, utilizzando un paio di forbici con punta smussata, tagliare delicatamente la benda e rimuoverla, avendo cura di non disturbare il trapianto.
Riportare l'animale in una gabbia pulita e monitorare giornalmente i segni di rigetto. A seconda della combinazione di ceppi scelta, la maggior parte dei trapianti di pelle viene rigettata, il che di solito corrisponde all'80% di necrosi entro il giorno otto-dodici. Questo topo è all'ottavo giorno post-operatorio e ha ricevuto trapianti bilaterali.
A sinistra si trova un trapianto sinogeno di controllo black six, che non verrà rigettato. A destra è presente il trapianto allogenico BAB sea che verrà rigettato. Ecco un altro trapianto di date che è in fase di rigetto.
Infine, un trapianto di pelle con data diversa che viene quasi completamente rigettato. Questi tre esempi illustrano la normale variabilità della cinetica del rigetto del trapianto cutaneo. Nell'esperimento precedente, vi abbiamo mostrato come eseguire un trapianto di pelle bilaterale.
Questo modello è un metodo rapido e semplice per monitorare le risposte alloreattive e ha un'ampia gamma di applicazioni. Ad esempio, il trapianto di cute può essere utilizzato per saggire l'efficacia di vari agenti immunosoppressori, anticorpi bloccanti e protocolli di induzione della tolleranza. Ecco tutto.
Grazie per aver guardato e buona fortuna con i vostri esperimenti.
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Panoramica
Questo articolo video fornisce un tutorial visivo sulla realizzazione di un modello di trapianto cutaneo mediante la combinazione di ceppi allogenici da BALB/c a C57BL/6. Questo modello è essenziale per lo studio delle risposte dei linfociti T dell'ospite ad antigeni donatori con diversità di MHC.
Componenti Chiave dello Studio
Area della Scienza
- Neuroscienze
- Immunologia
- Biologia del trapianto
Sfondo
- Il trapianto cutaneo è una tecnica standard per valutare le risposte allogeniche.
- Questo modello è uno dei meno complessi dal punto di vista tecnico per lo studio del rigetto del trapianto di tessuto.
- Viene comunemente utilizzato per valutare diverse strategie di induzione della tolleranza.
- Lo studio prevede l'uso di ceppi specifici di topi per il trapianto.
Scopo dello studio
- Dimostrare la procedura per il trapianto di pelle.
- Fornire una guida visiva ai ricercatori interessati alle risposte allogeniche.
- Facilitare la comprensione degli aspetti tecnici della procedura.
Metodi Utilizzati
- Prelevare la pelle da un topo donatore BALB/c.
- Eseguire il trapianto su un topo ricevente C57BL/6.
- Monitorare le risposte dei linfociti T dell'ospite dopo il trapianto.
- Utilizzare un formato video per migliorare l'apprendimento e la comprensione.
Risultati principali
- Dimostrazione riuscita della procedura di trapianto cutaneo.
- Rappresentazione visiva dei passaggi coinvolti nel processo.
- Informazioni sulle risposte immunitarie indotte dal tessuto trapiantato.
- Valutazione dell'efficacia del modello nello studio del rigetto del trapianto.
Conclusioni
- Il video rappresenta una risorsa preziosa per i ricercatori in biologia dei trapianti.
- Evidenzia l'importanza del modello BALB/c verso C57BL/6 negli studi immunologici.
- Il tutorial aiuta a comprendere le complessità del trapianto di pelle allogenico.
Domande frequenti
Rilevanza Industriale del Progetto
Il trapianto cutaneo in modelli murini fornisce un sistema rigoroso ma tecnicamente accessibile per valutare le risposte dei linfociti T dell'ospite ad antigeni con diversità di MHC, sostenendo direttamente la validazione degli obiettivi nella scoperta di farmaci immunomodulatori. Questo saggio consente una riduzione del rischio meccanicistica quantificando la cinetica del rigetto alloigenico, fornendo informazioni per decisioni di avanzamento o interruzione nello sviluppo di agenti immunosoppressori e strategie di induzione della tolleranza. La sua riproducibilità e le letture quantitative della sopravvivenza dell'innesto aumentano la fiducia predittiva nei percorsi preclinici di immunologia.
Applicazioni Strategiche nella Ricerca e Sviluppo in Biopharma
Scoperta Precoce e Validazione dell'Obiettivo
- Valore scientifico: Verifica ipotesi terapeutiche misurando il rigetto del trapianto mediato da linfociti T come lettura funzionale della risposta allogenica.
- Valore operativo: Consente una valutazione rapida dell'interazione con il bersaglio da parte di immunomodulatori mediante un modello chirurgico standardizzato.
- Valore predittivo: Supporta la selezione del portafoglio correlando la sopravvivenza del trapianto con il meccanismo d'azione nelle vie di induzione della tolleranza.
Sviluppo di screening e saggi
- Prontezza del saggio: Genera endpoint quantitativi basati sulla necrosi (ad esempio, 80% di necrosi entro il giorno 8–12) per lo screening di composti.
- Riproducibilità: Procedure standardizzate di raccolta e trapianto garantiscono un attecchimento dell'innesto costante tra esperimenti.
- Scalabilità: Il breve tempo di procedura (<10 min) e la minima complessità tecnica permettono la valutazione ad alto rendimento di candidati.
Ricerca Translazionale e Preclinica
- Rilevanza per la patologia: Modella il rigetto del trapianto allogenico umano, consentendo la valutazione preclinica di regimi immunosoppressivi.
- Continuità traslazionale: Collega la scoperta alla validazione preclinica fornendo un saggio di risposta immunitaria funzionale.
- Decisioni basate sul rischio: La cinetica del rigetto guida la selezione della dose e la tempistica per i candidati terapeutici.
Integrazione di Pipeline e Flusso di Lavoro
Il saggio di trapianto cutaneo si inserisce nel percorso di scoperta che va dalla validazione del bersaglio all'ottimizzazione del composto promettente fino ai test di efficacia preclinica, fornendo dati sulla risposta immunitaria in punti critici di decisione.
- Biologia della scoperta: Verifica la modulazione mediata dal bersaglio delle risposte allogeniche, chiarendo il coinvolgimento delle vie nel rigetto del trapianto.
- Screening: Fornisce metriche quantitative sulla sopravvivenza del trapianto che consentono il confronto tra candidati immunosoppressori.
- Analisi: Produce punteggi relativi al tempo di rigetto e alla necrosi, che supportano l'analisi statistica degli effetti del trattamento.
- Ricerca traslazionale: Collega i risultati meccanicistici agli esiti preclinici attraverso una valutazione standardizzata del rigetto.
- Riutilizzo aziendale: Stabilisce una piattaforma immunologica riutilizzabile per valutare diverse modalità terapeutiche in diversi progetti.
Impatto Operativo ed Aziendale
- Valore scientifico: Fornisce un'analisi meccanicistica del rigetto mediato dai linfociti T, riducendo l'ambiguità nei meccanismi degli immunomodulatori.
- Valore operativo: Offre un saggio standardizzato, semplice da eseguire e con elevata riproducibilità tra esperimenti.
- Valore strategico: Migliora l'efficienza delle decisioni di avanzamento o interruzione dello sviluppo predeterminando precocemente il potenziale immunosoppressivo clinico.
- Impatto sul portafoglio: Permette una priorizzazione basata sul rischio, fondata sulla cinetica quantitativa del rigetto e sulla modulazione del bersaglio.
Considerazioni sull'implementazione
- Richiede competenze specifiche in chirurgia murina e tecnica asettica per il prelievo cutaneo e il posizionamento del trapianto.
- Dipende dall'uso di stereomicroscopi, strumenti per la sutura e condizioni ambientali controllate (ad esempio, lampade a calore) per le cure post-operatorie.
- Necessita di protocolli standardizzati di valutazione della necrosi del trapianto per garantire la comparabilità tra diversi gruppi di ricerca.
- Deve tenere conto della cinetica specifica del rigetto in base alla linea animale quando si traducono i risultati tra diversi sistemi modello.
- Limitato alla valutazione delle risposte mediate dai linfociti T; non coglie i meccanismi innati dell'immunità o quelli dipendenti dagli anticorpi senza modifiche specifiche.
