Name: Applicazione della tomografia a coerenza ottica a un modello murino di retinopatia (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-01-12T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 22 s
Description: Impara la tomografia a coerenza ottica per diagnosticare la retinopatia nei modelli murini. Questa tecnica non invasiva consente imaging ad alta risoluzione e misurazioni quantitative dello spessore retinico in tempo reale.

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Fonte del progetto: Fondazione di scienze naturali della provincia del Guangdong (2018A0303130306). Gli autori desiderano ringraziare l'Ophthalmic Research Laboratory, il Joint Shantou International Eye Center della Shantou University e la Chinese University di Hong Kong per i finanziamenti e i materiali.

Le operazioni sono state eseguite a seguito della Dichiarazione sull'uso degli animali nella ricerca oftalmica e visiva dell'Associazione per la ricerca in visione e oftalmologia. Il progetto sperimentale è stato approvato dal Comitato etico istituzionale per gli animali (Medical Ethics Committee of JSIEC, EC 20171213(4)-P01). In questo studio sono stati utilizzati topi C57BL / 6J di due mesi e topi knockout Vldlr . C'erano 7 topi in ogni gruppo, tutti femmine e pesavano da 20 g a 24 g.
1. Condizioni sperimentali
<ol><li>Assegnare i topi a due gruppi: un gruppo sperimentale composto da topi knockout Vldlr e un gruppo di controllo composto da topi C57BL / 6J.</li>
	<li>Dai da mangiare ai topi con cibo e acqua in modo convenzionale.</li>
	<li>Allevare i topi nel laboratorio animale in condizioni stabili di temperatura ambiente (22 ° C), umidità (50-60%), ciclo luce-buio (12 h-12 h) e intensità luminosa ambiente (350-400 lux).</li>
	<li>Preparare l'attrezzatura sperimentale: tomografia a coerenza ottica con oftalmoscopio laser a scansione confocale (cSLO) per piccoli animali (Figura 1A).</li>
	<li>Preparare tutti i materiali necessari per l'esperimento (Figura 1B) e pesare i topi (Figura 1C).</li>
</ol>2. Registrazioni informative
<ol><li>Registra le informazioni: gruppo, codice, data di nascita, età, sesso, peso e dosaggio anestetico.</li>
</ol>3. Avviamento e collaudo dello strumento
<ol><li>Accendere il computer e avviare il software.</li>
	<li>Fare clic sul pulsante Programma di test per completare il programma di test.</li>
	<li>Accendere il termostato e preriscaldarlo alla temperatura di 37 °C.</li>
	<li>Avviare la procedura del modulo dello Strumento di personalizzazione di Office dopo il test del programma.</li>
	<li>Crea un nuovo soggetto e inserisci le informazioni del mouse.</li>
	<li>Preriscaldare la coperta elettrica e coprirla con asciugamani chirurgici.</li>
</ol>4. Anestesia
<ol><li>Utilizzare polvere anestetica liofilizzata contenente Tiletamina e Zolazepam per preparare la miscela anestetica. NOTA: Seguire le raccomandazioni del comitato etico animale locale per la scelta, il dosaggio e la via di somministrazione dell'anestesia. Anestetizzare l'animale con un anestetico che fornirà immobilità e perdita di percezione del dolore per almeno 1 ora, dopo di che l'animale si riprende rapidamente. Il dosaggio deve essere basato sulla durata del tempo di esperimento, sul peso dell'animale e su altri fattori.</li>
	<li>Anestetizzare l'animale usando la miscela anestetica preparata. Assicurarsi di mantenere l'animale caldo durante l'intera procedura fino al recupero.</li>
</ol>5. Applicazione di gocce midriatiche
<ol><li>Ottenere il contenimento manuale del mouse per la collottola, far sporgere leggermente il bulbo oculare e ruotare la testa del mouse con un occhio rivolto verso l'alto.</li>
	<li>Applicare le gocce midriatiche per dilatare le pupille (Figura 2A).</li>
	<li>Controllare la dilatazione della pupilla dopo 10 minuti.</li>
</ol>6. Posizionamento del mouse
<ol><li>Posiziona un mouse su una piattaforma elettrica.</li>
	<li>Rivestire entrambi gli occhi con gel ialuronato di sodio medicale (Figura 2B).</li>
	<li>Avvitare una doppia lente sferica 60 D (lente preimpostata) sul dispositivo cSLO (Figura 1A-5, 6).</li>
	<li>Posizionare una lente a contatto 100 D sulla cornea del topo con il lato concavo che tocca il gel ialuronato di sodio sulla superficie corneale (Figura 2C, D e Figura 3A-II).</li>
	<li>Posizionare il mouse sulla piccola piattaforma animale a temperatura costante e tenere l'occhio a 1-2 mm di distanza dall'obiettivo del dispositivo cSLO (Figura 3A).</li>
	<li>Regolare l'angolo della lente a contatto con una pinza per mantenere la pupilla al centro della lente.</li>
	<li>Perfeziona le regolazioni della testa per rendere l'occhio rivolto dritto in avanti.</li>
</ol>7. Oftalmoscopio laser a scansione confocale (cSLO)
<ol><li>Fare clic sul pulsante dello Strumento di personalizzazione di Office , scegliere il modulo mouse e avviare il programma cSLO (Figura 4B).</li>
	<li>Selezionare la modalità IR (sorgente luminosa: luce rossa) e regolare il parametro (intervallo: 2047, Figura 4D).</li>
	<li>Selezionare l'occhio da esaminare (occhio destro: figura 4C-1; occhio sinistro: figura 4C-2). </li>
	<li>Controllare la leva e spostare lentamente la lente preimpostata verso la lente a contatto.</li>
	<li>Regolare il valore diottrico fino a quando l'imaging del polo posteriore è chiaro (Figura 4E).</li>
	<li>Effettuare ulteriori regolazioni per allineare l'immagine del polo posteriore retinico, centrandola sulla testa del nervo ottico.</li>
</ol>8. Tomografia a coerenza ottica (OCT)
<ol><li>Avviare il programma dello Strumento di personalizzazione di Office (Figura 4G).</li>
	<li>Fare clic sull'indicatore di stato verso l'alto e verso il basso finché non viene visualizzata l'immagine dello Strumento di personalizzazione di Office (Figura 4H).</li>
	<li>Regolare i parametri: Range Min (Figura 4I) = 0-20, Range Max (Figura 4J) = 40-60.</li>
	<li>Regolare la distanza dell'obiettivo preimpostata e la direzione della posizione fino a ottenere un'immagine OCT ideale.</li>
	<li>Selezionare la posizione di scansione spostando la linea standard nel cSLO (Figura 4M).</li>
	<li>Avviare la scansione dalla testa del nervo ottico.</li>
	<li>Raccogli le immagini nello stesso ordine per ciascun occhio: linea orizzontale: testa del nervo ottico → superiore → inferiore; Linea verticale: testa del nervo ottico → nasale → temporale.</li>
	<li>Raccogli immagini da quattro direzioni.</li>
	<li>Fare clic su Media per sovrapporre i segnali immagine cSLO e OCT (Figura 4F e Figura 4O).</li>
	<li>Fare clic sul pulsante di ripresa per acquisire l'immagine SLO-OCT (Figura 4P).</li>
	<li>Salvare ed esportare tutte le immagini (Figura 4Q, R).</li>
</ol>9. La fine dell'esperimento (dopo l'esame OCT)
<ol><li>Posizionare il mouse sulla coperta elettrica per tenerlo caldo fino al risveglio. NOTA: Il topo deve essere monitorato fino a quando non riacquista sufficiente coscienza per mantenere la recumbency sternale. L'esposizione postoperatoria alla luce intensa deve essere ridotta al minimo.</li>
	<li>Rimuovere la lente a contatto 100 D.</li>
	<li>Applicare il gel per gli occhi levofloxacina per proteggere la cornea.</li>
	<li>Rimetti il mouse nella gabbia dopo che si è svegliato. NOTA: Assicurarsi che il topo esaminato non venga restituito alla compagnia di altri topi fino a quando non si è completamente ristabilito.</li>
	<li>Spegnere il software e spegnere il computer.</li>
	<li>Pulire la lente a contatto 100 D con acqua; Asciugare la lente.</li>
	<li>Pulire e disinfettare l'ambiente.</li>
</ol>10. Analisi delle immagini
<ol><li>Confronta le immagini OCT dei topi knockout Vldlr con quelle dei topi C57BL / 6J.</li>
	<li>Osservare più posizioni: scansioni verticali e orizzontali che passano attraverso la papilla ottica; scansioni superiori, inferiori, nasali e temporali; e scansioni anomale del sito di riflessione.</li>
	<li>Osservare lo spessore, la forma, la stratificazione e le lesioni anomale della riflettanza della retina in ogni immagine, nonché l'interfaccia vitreale della retina e del corpo vitreo.</li>
	<li>Registrare le posizioni, le caratteristiche e il numero di lesioni.</li>
</ol>11. Correzione della stratificazione retinica
<ol><li>Fare clic su Esame carico (Load Examination ) nell'interfaccia dello Strumento di personalizzazione di Office (Figura 5A).</li>
	<li>Richiamare le immagini dello Strumento di personalizzazione di Office di un mouse da una finestra popup.</li>
	<li>Seleziona immagini: scansione delle immagini OCT attraverso la papilla ottica, orizzontalmente o verticalmente.</li>
	<li>Fare doppio clic sull'immagine nel contenitore multimediale per visualizzarla sullo schermo (Figura 5C).</li>
	<li>Fare clic su Layer Detection (Rilevamento strati ) per completare la stratificazione automatica sulla retina (Figura 5D).</li>
	<li>Selezionate le linee divisorie su entrambi i lati del livello preparato per l'analisi (Figura 6D-10).</li>
	<li>Selezionate una linea divisoria separata (Figura 6B-6) e fate clic su Modifica livello (Figura 6A-1) per attivare la linea quando viene visualizzato un cerchio rosso (Figura 6B-7).</li>
	<li>Regolare la spaziatura (Figura 6A-4, ad esempio, 50) e l'intervallo limite (Figura 6A-5, ad esempio, 50).</li>
	<li>Modificare la linea di demarcazione spostando il cerchio rosso (confrontare la linea di demarcazione verde nella Figura 6B e nella Figura 6C; La Figura 6C mostra il risultato modificato).</li>
</ol>12. Spessore della laminazione retinica
<ol><li>Fare clic sul pulsante Marcatore misura (Figura 6D-9).</li>
	<li>Selezionare la linea di demarcazione dello strato da analizzare (ad esempio, nello strato nucleare esterno, selezionare la 4° e la 5° linea di divisione nell'elenco) per visualizzare il limite dello strato sull'immagine OCT (Figura 6D-10).</li>
	<li>Selezionare Connetti con layer (Figura 6D-11) e Rimani connesso in movimento (Figura 6D-12).</li>
	<li>Selezionare l'area in cui visualizzare i risultati (la colonna selezionata è colorata, Figura 6D-13). </li>
	<li>Fare clic sulla posizione da analizzare sull'immagine dello Strumento di personalizzazione di Office per visualizzare la linea di misurazione (perpendicolare all'asse orizzontale e coerente con il colore dell'area risultante) (Figura 6D-14).</li>
	<li>Fare clic sulla colonna successiva per la misurazione successiva e visualizzare i dati precedenti (Figura 6E-15).</li>
	<li>Leggere il valore Vert (spessore della posizione misurata) nella riga Lunghezza in μm (tessuto) (Figura 6E, rettangolo rosso).</li>
	<li>Fare clic su Elimina marcatore (Figura 6E-16) e Nuovo marcatore (Figura 6E-17) per ripetere il test in modo che i risultati coprano i dati originali (se è necessaria una nuova misurazione).</li>
	<li>Premere Stampa Scr sulla tastiera per salvare le schermate oppure fare clic su Salva esame per salvare direttamente (Figura 5H).</li>
	<li>Inserisci i dati in un foglio di calcolo o in un software statistico per l'analisi statistica.</li>
</ol>13. Misurazione dello spessore retinico completo
<ol><li>Selezionare la linea 1 (ILM, membrana limitante interna, Figura 7B) e la linea 7 (OS-RPE, OS: segmenti fotorecettori esterni; RPE: strato epiteliale pigmentato retinico, Figura 7C) nell'elenco nell'angolo in alto a destra. NOTA: Lo spessore completo della retina indica lo spessore dello strato di neurepitelio retinico, che è la retina tra ILM e OS-RPE su OCT).</li>
	<li>Misurare lo spessore retinico su entrambi i lati della papilla ottica ad un intervallo specifico.<ol><li>Ad esempio: dall'aspetto della struttura retinica sul bordo della papilla ottica, misurare 4 valori con spaziatura di 200 μm del righello orizzontale (Figura 7G, H).</li>
	</ol></li>
	<li>Registrare tutti i valori misurati in un foglio di calcolo.</li>
	<li>Utilizzare più test t (uno per riga) per confrontare i valori misurati di ciascuna posizione corrispondente in entrambi i gruppi.</li>
</ol>

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</ol>

Gli autori non dichiarano alcun potenziale conflitto di interessi.

In questo studio, l'imaging OCT utilizzando un sistema di imaging retinico di piccoli animali è stato applicato per valutare i cambiamenti retinici nei topi knockout Vldlr , che dimostrano distacco posteriore del vitreo incompleto, neovascolarizzazione sottoretinica e assottigliamento dello spessore retinico. OCT è un metodo di imaging non invasivo per esaminare la condizione della retina in vivo. La maggior parte dei dispositivi OCT sono progettati per l'esame oculistico umano. Le dimensioni dell'appar...

La tomografia a coerenza ottica (OCT) è una tecnica di imaging in grado di fornire in vivo l'alta risoluzione e l'imaging trasversale per il tessuto 1,2,3,4,5,6,7,8, in particolare per l'esame non invasivo nella retina 9,10,11,12 . Può anche essere utilizzato per quantificare alcuni importanti biomarcatori, come lo spessore della retina e lo spessore dello strato di fibre nervose retiniche. Il principio dell'OCT è la riflettometria a coerenza ottica, che ottiene informazioni trasversali sui tessuti dalla coerenza della luce riflessa da un campione e la converte in forma grafica o digitale attraverso un sistema informatico7. L'OCT è ampiamente utilizzato nelle cliniche oftalmologiche come strumento essenziale per la diagnosi, il follow-up e la gestione per i pazienti con disturbi della retina. Può anche fornire informazioni sulla patogenesi delle malattie della retina.
Oltre alle applicazioni cliniche, l'OCT è stato utilizzato anche negli studi sugli animali. Sebbene la patologia sia il gold standard della caratterizzazione morfologica, l'OCT ha il vantaggio dell'imaging non invasivo in vivo e del follow-up longitudinale. Inoltre, è stato dimostrato che l'OCT è ben correlato con l'istopatologia nei modelli animali di retinopatia 11,13,14,15,16,17,18,19,20. Il topo è l'animale più comunemente usato negli studi biomedici. Tuttavia, i suoi piccoli bulbi oculari rappresentano una sfida tecnica per condurre l'imaging OCT nei topi.
Rispetto all'OCT utilizzato per la prima volta per l'imaging retinico nei topi21,22, l'OCT nei piccoli animali è stato ora ottimizzato rispetto ai sistemi hardware e software. Ad esempio, OCT, in combinazione con il tracker, riduce significativamente il rapporto segnale-rumore; Gli aggiornamenti del sistema software OCT consentono di rilevare automaticamente più strati retinici; e il proiettore DLP integrato aiuta a ridurre gli artefatti di movimento.
Il recettore della lipoproteina a bassissima densità (Vldlr) è una proteina transmembrana nelle cellule endoteliali. È espresso sulle cellule endoteliali vascolari retiniche, sulle cellule epiteliali pigmentate retiniche e intorno alla membrana limitante esterna23,24. La neovascolarizzazione sottoretinica è il fenotipo dei topi knockout Vldlr 23. Pertanto, i topi knockout Vldlr vengono utilizzati per studiare la patogenesi e la potenziale terapia della neovascolarizzazione sottoretinica. Questo articolo dimostra l'applicazione dell'imaging OCT per rilevare lesioni retiniche nei topi knockout Vldlr, sperando di fornire qualche riferimento tecnico per la ricerca sulla retinopatia in piccoli modelli animali.

<table><tbody><tr><td>Lente a contatto 100-Dpt</td><td>Volk Optical,Inc, Mentor, OH</td><td></td><td>Accessorio appartenente alla RETImap</td></tr><tr><td>Doppia lente in vetro asferica 60-Dpt</td><td>Volk Optical,Inc, Mentor, OH</td><td></td><td>Accessorio appartenente alla RETImap</td></tr><tr><td>Coperta riscaldante elettrica</td><td>POPOCOLA</td><td>CW-DRT-01</td><td>50 x 35 cm</td></tr><tr><td>Siringa per iniezione (1 mL)</td><td>Kaile</td><td></td><td>0,45 x 16RWLB</td></tr><tr><td>Levofloxacina cloridrato Eye Gel EBE</td><td>FARMACEUTICO Co.LTD</td><td></td><td>5 g: 0,015 g</td></tr><tr><td>Gel medico di ialuronato di sodio</td><td>Alcon</td><td>16H01E</td><td></td></tr><tr><td>Siringhe da microlitro Shanghai</td><td>high pigeon industry and trade co., LTD</td><td>Q31/0113000236C001-2017</td><td>50 &; L</td></tr><tr><td>Soluzione di iodio povidone</td><td>Guangdong medihealth pharmaceutical Co., LTD</td><td></td><td>100 mL</td></tr><tr><td>RETImap</td><td>ROLAND CONSULT</td><td>19-99_50-2.1_1.2E</td><td>cSLO/ERG/VEP/FA/OCT/GFP</td></tr><tr><td>Orecchini per piccoli animali</td><td>OSMO POCKET OT110</td><td>INS1005-1S</td><td></td></tr><tr><td>Tropicamide Fenilefrina Collirio</td><td>Santen Pharmaceutical Co., LTD</td><td></td><td>5 mg/mL</td></tr><tr><td>Xilazina</td><td>Sigma</td><td>X1251-5G</td><td>5 g</td></tr><tr><td>Zoletil 50</td><td>Virbac.S.A</td><td>7FRPA</td><td>Tiletamina 125 mg + Zolazepam 125 mg</td></tr></tbody></table>

applicazione della tomografia a coerenza ottica a un modello murino di retinopatia

Application of Optical Coherence Tomography to a Mouse Model of Retinopathy

La tomografia a coerenza ottica (OCT) offre un metodo non invasivo per la diagnosi di retinopatia. La macchina OCT può acquisire immagini della sezione trasversale retinica da cui è possibile calcolare lo spessore della retina. Sebbene l'OCT sia ampiamente utilizzato nella pratica clinica, la sua applicazione nella ricerca di base non è così prevalente, specialmente nei piccoli animali come i topi. A causa delle piccole dimensioni dei loro bulbi oculari, è difficile condurre esami di imaging del fondo nei topi. Pertanto, è necessario un sistema di imaging retinico specializzato per ospitare l'imaging OCT su piccoli animali. Questo articolo illustra un sistema specifico per i piccoli animali per le procedure di esame dello PTOM e un metodo dettagliato per l'analisi delle immagini. Vengono presentati i risultati dell'esame OCT retinico di topi knockout a bassissima densità del recettore delle lipoproteine (Vldlr) e topi C57BL/6J. Le immagini OCT dei topi C57BL / 6J hanno mostrato strati retinici, mentre quelle di topi knockout Vldlr hanno mostrato neovascolarizzazione sottoretinica e assottigliamento della retina. In sintesi, l'esame OCT potrebbe facilitare il rilevamento non invasivo e la misurazione della retinopatia nei modelli murini.

Grazie alle scansioni ad alta risoluzione dell'OCT, è possibile osservare gli strati della retina del topo e identificare riflessi anomali e le loro posizioni esatte. Le immagini OCT retiniche di topi knockout Vldlr e topi C57BL / 6J sono state confrontate in questo studio. Le immagini OCT di tutti i topi C57BL / 6J hanno mostrato vari strati retinici con riflettività diversa e la demarcazione era chiara (Figura 8D). Al contrario, tutti i topi knockout di Vldlr hanno mostra...

Qui, descriviamo una tecnica di imaging in vivo che utilizza la tomografia a coerenza ottica per facilitare la diagnosi e la misurazione quantitativa della retinopatia nei topi.

Applicazione della tomografia a coerenza ottica a un modello murino di retinopatia

Optical coherence tomography (OCT) offers a noninvasive method for the diagnosis of retinopathy. The OCT machine can capture retinal crosssectional images ...

La tomografia a coerenza ottica è ampiamente utilizzata nella diagnosi clinica di diverse malattie della retina, ma è ancora difficile da applicare nei modelli murini. Questo protocollo descrive come gestire la tecnica OCT negli animali. Questa tecnologia può essere applicata ad animali con diverse dimensioni del bulbo oculare.Consente l'imaging della sezione trasversale retinica non invasivo, ad alta risoluzione e in tempo reale, insieme a misurazioni quantitative dello spessore della retina. L'OCT aiuta nella diagnosi della retinopatia identificando le caratteristiche della lesione come la posizione, la gamma, la forma e le dimensioni delle lesioni, nonché tutte le sospette anomalie retiniche come la neovascolarizzazione retinica. Questo protocollo è applicabile agli studi sugli animali o alle malattie del fondo oculare, comprese le malattie della retina.Prima di iniziare la procedura, essere preparati e seguire il protocollo passo dopo passo. Esegui l'esperimento quando l'animale è anestetizzato. Si dovrebbe essere in grado di ottenere immagini OCT di buona qualità dopo un po 'di pratica.Per iniziare, accendere il computer e avviare il software. Fare clic sul pulsante del programma di test per completare il programma di test. Quindi, accendere il termostato e preriscaldarlo a 37 gradi Celsius.Dopo il test del programma, avviare la procedura del modulo dello Strumento di personalizzazione di Office. Crea un nuovo soggetto e inserisci le informazioni del mouse. Quindi, preriscaldare la coperta elettrica e coprirla con asciugamani chirurgici.Posizionare il topo anestetizzato sulla piattaforma della coperta elettrica e rivestire immediatamente entrambi gli occhi con gel ialuronato di sodio medico. Quindi, posizionare una lente a contatto 100D sulla cornea del topo con il lato concavo che tocca il gel ialuronato di sodio sulla superficie corneale. Quindi, posizionare il mouse sulla piccola piattaforma animale a temperatura costante del dispositivo cSLO.Regolare l'angolo della lente a contatto con una pinza per mantenere la pupilla al centro della lente. Perfeziona le regolazioni della testa per rendere l'occhio rivolto dritto in avanti. Fare clic sul pulsante Strumento di personalizzazione di Office, scegliere il modulo mouse e avviare il programma cSLO.Quindi, utilizzare la leva operativa per spostare lentamente la lente preimpostata verso la lente a contatto. Effettuare ulteriori regolazioni per allineare l'immagine del polo antero-posteriore, centrandola sulla testa del nervo ottico. Avviare quindi il programma dello Strumento di personalizzazione di Office e fare clic sull'indicatore di stato verso l'alto e verso il basso finché non viene visualizzata l'immagine dello Strumento di personalizzazione di Office.Regolare l'intervallo minimo compreso tra 0 e 20 e l'intervallo massimo tra 40 e 60. Quindi, regolare la distanza dell'obiettivo preimpostata e la direzione della posizione fino a ottenere un'immagine OCT ideale. Selezionare la posizione di scansione spostando la linea standard nel cSLO.Quindi, fare clic su Media per sovrapporre il segnale dell'immagine cSLO e OCT e fare clic sul pulsante di scatto per acquisire l'immagine dello Strumento di personalizzazione di Office SLO. Dopo l'esperimento, rimuovere la lente a contatto 100D e applicare il gel per gli occhi levofloxacina per proteggere la cornea. Per la correzione della stratificazione retinica, fare clic su Esame carico nell'interfaccia dello Strumento di personalizzazione di Office e richiamare le immagini dello Strumento di personalizzazione di Office da una finestra popup.Quindi, fare doppio clic sull'immagine nel contenitore multimediale per visualizzarla sullo schermo. Quindi, fare clic sul rilevamento dello strato per completare la stratificazione automatica sulla retina. Dopo aver selezionato la linea di divisione su entrambi i lati del livello preparato per l'analisi, fate clic su Modifica livello per regolare la spaziatura e l'intervallo limite.Quindi, modificare la linea spostando il cerchio rosso. Per misurare lo spessore della laminazione retinica, fare clic sul pulsante indicatore di misura e selezionare la linea di demarcazione del livello da analizzare per visualizzare il limite del livello sull'immagine dello Strumento di personalizzazione di Office. Quindi, selezionate Connetti con layer e rimanete connessi in movimento.Quindi, selezionare l'area in cui visualizzare i risultati e fare clic sulla posizione da analizzare sull'immagine dello Strumento di personalizzazione di Office per visualizzare la linea di misurazione. Fare clic sulla colonna successiva per le misurazioni successive e per visualizzare i dati precedenti. Per misurare lo spessore completo della retina, selezionare la riga uno e la linea sette nell'elenco nell'angolo in alto a destra.Quindi, dall'aspetto della struttura retinica sul bordo della papilla ottica, misurare quattro valori a intervalli di distanza di 200 micrometri sul righello orizzontale. Le immagini OCT dei topi C57BL / 6 hanno mostrato vari strati retinici con una chiara demarcazione. Al contrario, i topi knockout Vldlr hanno mostrato lesioni iperriflettenti anormali.Le immagini OCT hanno mostrato alcune bande riflettenti centrali sulle superfici retiniche dei topi knockout Vldlr. Queste bande aderivano al vaso retinico, essendo coerenti con le caratteristiche OCT del distacco vitreo incompleto. Una lesione iperriflettente è apparsa sullo spazio sottoretinico e si è diffusa allo strato nucleare esterno, ma non ha sfondato lo strato plessiforme esterno.L'aspetto OCT di questa lesione era coerente con i risultati patologici. La sezione patologica ha mostrato che la neovascolarizzazione ha rotto lo strato di epitelio pigmentato retinico, i segmenti interno-esterno del fotorecettore e la membrana limitante esterna, invadendo lo strato nucleare esterno, ma non lo strato plessiforme esterno. Un'altra banda di lesione iperriflettente, situata nello spazio sottoretinico, non ha coinvolto lo strato nucleare esterno.Coerentemente con i risultati patologici, questa neovascolarizzazione sottoretinica non ha sfondato la membrana limitante esterna. Il confronto dello spessore retinico dell'occhio destro nelle direzioni temporale, nasale, superiore e inferiore del polare posteriore tra i due gruppi ha rivelato che lo spessore retinico dei topi knockout Vldlr era significativamente inferiore a quello dei topi C57BL / 6J. Quando si esegue il protocollo, posizionare correttamente una lente a contatto 100D sulla cornea, quindi regolare la posizione dell'immagine.Selezionare la posizione di scansione e sovrapporre l'immagine prima di scattare. Seguendo questa procedura, è possibile l'OCT del segmento anteriore, che richiede la modifica della distanza tra la lente preimpostata e la cornea. Può mostrare la cornea, la camera anteriore, l'iride, il corpo ciliare e la lente.Questa tecnica fornisce uno strumento importante per la ricerca sulla retinopatia in piccoli modelli animali, promuovendo il rilevamento non invasivo e la misurazione della retinopatia nella ricerca di base.

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Questo video dimostra una tecnica di imaging in vivo per rilevare e quantificare l'infiammazione oculare in un modello murino di uveite post-infettiva. La tecnica, nota come tomografia a coerenza ottica (OCT), genera immagini in sezione trasversale ad alta risoluzione dell'occhio per valutare la progressione della malattia.

Imaging con tomografia a coerenza ottica per la valutazione dell'uveite in un modello murino

Fonte: Jagodzinska, J., et. al., Tomografia a coerenza ottica: imaging delle cellule gangliari retiniche del topo In Vivo. J. Vis. Exp. (2017) &lt;br /&gt; In questo video, dimostriamo l'uso della tomografia a coerenza ottica del dominio spettrale (SD-OCT) per visualizzare gli strati retinici e valutare i cambiamenti strutturali in un modello murino geneticamente modificato con neuropatia ottica.

Imaging in vivo della retina di topo mediante tomografia a coerenza ottica

Questo manoscritto descrive un protocollo per l'imaging in vivo della retina di topo con tomografia a coerenza ottica ad alta risoluzione spettrale dominio (SD-OCT). Si concentra sulle cellule retiniche del ganglio (RGC) nella regione peripapillare, con diverse analisi e quantificazione approcci descritti.

Tomografia a coerenza ottica: Imaging Mouse ganglionari cellule In Vivo

Qui dimostriamo un nuovo approccio all'utilizzo di tomografia a coerenza ottica spectral-domain ad alta risoluzione (HR-SD-OCT) per assistere la consegna degli agenti di terapia genica nello spazio subretinal, valutare la sua copertura area e caratterizzano la vitalità del fotoricettore.

Tomografia ottica di coerenza di risoluzione ultraelevata Mouse per aiutare l'iniezione intraoculare nella ricerca retinica terapia genica

Questo protocollo descrive come ad alta definizione tecniche di imaging come la tomografia ottica di coerenza di dominio spettrale e scansione laser oftalmoscopia può essere utilizzata in piccoli roditori, utilizzando un sistema di piattaforma di imaging oftalmico, per ottenere informazioni su lo spessore retinico e microglial cellula distribuzione, rispettivamente.

In Vivo Imaging dei topi Reporter Cx3cr1gfp/gfp con tomografia a coerenza ottica Spectral-domain e scansione Laser oftalmoscopia

Un protocollo dettagliato per la valutazione delle letture strutturali e visivi in roditori dalla risposta di tomografia e optokinetic ottica di coerenza è presentato. I risultati forniscono informazioni preziose per la ricerca oftalmologica, nonché neurologica.

Tramite tomografia ottica di coerenza e risposta Optokinetic come strutturale e funzionale sistema visivo letture in topi e ratti

Qui, descriviamo l'uso della tomografia a coerenza ottica di dominio spettrale (SD-OCT) per visualizzare strutture retiniche e oculari in vivo in modelli di degenerazione retinica, glaucoma, retinopatia diabetica e miopia.

Valutazioni strutturali in vivo della malattia oculare in modelli di roditori mediante tomografia a coerenza ottica

Qui, descriviamo un modello di topo di ischemia retinica mediante occlusione bilaterale transitoria comune dell'arteria carotide usando suture semplici e un morsetto. Questo modello può essere utile per comprendere i meccanismi patologici dell'ischemia retinica causati da anomalie cardiovascolari.

Un modello murino di lesione retinica ischemica indotta dall'occlusione dell'arteria carotide comune transiente

Qui, descriviamo un protocollo ottimizzato per l'occlusione venosa retinica utilizzando il bengala rosa e un sistema di microscopio di imaging retinico guidato dal laser con raccomandazioni per massimizzare la sua riproducibilità in ceppi geneticamente modificati.

Ottimizzazione del modello murino di occlusione venosa retinica per limitare la variabilità

Il presente protocollo delinea i passaggi per l'allineamento in vivo delle immagini in fibra di tomografia a coerenza ottica a luce visibile (vis-OCTF) con le immagini confocali ex vivo della stessa retina murina allo scopo di verificare la morfologia osservata del fascio assonale delle cellule gangliari retiniche nelle immagini in vivo .

Allineamento di fibrogrammi per tomografia a coerenza ottica a luce visibile con immagini confocali della stessa retina murina

Impara la tomografia a coerenza ottica per diagnosticare la retinopatia nei modelli murini. Questa tecnica non invasiva consente imaging ad alta risoluzione e misurazioni quantitative dello spessore retinico in tempo reale.

Applicazione della tomografia a coerenza ottica a un modello murino di retinopatia

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