Utilizzo di un'iniezione cell-tracer per studiare l'origine delle cellule che formano neointima in un modello di parete laterale sacculare di ratto

Utilizzando un'applicazione diretta intra-aortale cell-tracer, possiamo analizzare il ruolo delle cellule endoteliali provenienti dall'arteria madre nella formazione neointima in due diversi punti temporali. Un grande vantaggio di questa tecnica è un'iniezione diretta, un punto, interpretativa in vivo che rende questo modello una tecnica robusta e riproducibile. Prima dell'intervento chirurgico, incubare le sacche arteriose da ratti donatori in 0,1% di sodio dodecil solfato per 10 ore a 37 gradi Celsius per ottenere aneurismi decellularizzati.

Raccogli queste buste dagli animali donatori pochi giorni prima dell'intervento. Per iniziare, analizzare il comportamento dell'animale e ispezionare le mucose e il turgore come parte dell'esame clinico preoperatorio. Registra il peso di ogni animale.

Per l'induzione dell'anestesia, mettere tutti i ratti in una scatola pulita fornita di ossigeno fino alla perdita di coscienza dopo cinque o 10 minuti. Controllare la profondità dell'anestesia dall'assenza del riflesso di prelievo del pedale. Posizionare i ratti in posizione supina e radere l'area toraco-addominale con un rasoio elettrico.

Usando il nastro adesivo, fissare le zampe del topo su una tavola coperta da una piastra riscaldante collegata a una sonda rettale autoregolante. Inserire la sonda rettale nell'ano del ratto per mantenere la temperatura desiderata di 37 gradi Celsius con l'aiuto di una piastra riscaldante. Quindi installare un sensore sulla zampa posteriore destra collegato a un sistema computerizzato per il controllo intraoperatorio dei segni vitali.

Per la cura perianestetica, applicare un lubrificante oftalmico sterile sugli occhi e coprirli con una maschera di alluminio opaco per evitare l'essiccazione e il danneggiamento della lampada chirurgica. Disinfettare il campo chirurgico con iodio povidone e drappeggiare il campo chirurgico in modo sterile. Metti un micro tampone con imbottitura viola sotto le parti prossimale e distale dell'aorta per visualizzare meglio l'arteria non appena viene separata dalla vena cavale.

Quindi proteggere l'addome con una garza bianca. Il giorno dell'operazione, sciogliere due microlitri del cell-tracer mediante pipettaggio in un millilitro di PBS. Trasferire la miscela su una siringa da un millilitro munita di cannula.

Spegnere la luce in sala operatoria. Utilizzando un microscopio, eseguire l'iniezione di un punto nella parte ventrale centrale dell'aorta con micro pinze e iniettare con attenzione un millilitro di soluzione salina eparinizzata allo 0,9%. Iniettare accuratamente il tracciante cellulare e spegnere immediatamente anche il microscopio operatorio.

Proteggi di nuovo l'addome con una garza bagnata. Lasciare incubare il colorante per almeno 15 minuti. Quindi accendere il microscopio e le luci della sala operatoria.

Utilizzare micro pinze e micro forbici per eseguire l'arteriotomia longitudinale in modo che la sua lunghezza sia in media il diametro dell'aneurisma raccolto. Posizionare l'aneurisma accanto all'aorta prima di eseguire l'arteriotomia per garantire la lunghezza corretta. Suturare l'aneurisma con otto a 10 punti singoli utilizzando una sutura 10-0 non assorbibile.

Prima del punto finale, consegnare la bobina con una densità di imballaggio di un centimetro. In questo modello è possibile eseguire il trattamento con bobina o stent. Quindi rimuovere con cura i morsetti temporanei, iniziando distalmente, sotto irrigazione continua con soluzione salina eparinizzata.

Chiudi la ferita in modo stratificato. Alla fine dell'intervento chirurgico, invertire l'anestesia con un'iniezione sottocutanea. Lasciare che ogni animale operato si riprenda in una gabbia pulita fino a quando non è completamente sveglio e riscaldato secondo necessità con una lampada riscaldante.

I volumi di aneurisma al basale tirato per il settimo giorno e il giorno 21 non differivano significativamente per gli aneurismi decellularizzati o vitali tra i gruppi di trattamento della bobina o dello stent. I volumi di FU tirati per gli aneurismi decellularizzati hanno mostrato una crescita non significativa dell'aneurisma in spirale rispetto agli aneurismi stentati. Il volume di FU tirato era significativamente maggiore nel nucleo vitale arrotolato rispetto al gruppo stentato.

Le quantità di cellule positive al tracciante cellulare nella neointima degli aneurismi decellularizzati non differivano significativamente tra i gruppi trattati con stent o arrotolati al settimo giorno FU, ma erano significativamente più alte nei ratti stentati al giorno 21 FU.No differenze significative sono state osservate nei ratti suturati ad aneurisma vitale a sette giorni o 21 giorni FU.In aneurismi decellularizzati a sette giorni FU, significativamente più cellule positive al tracciante cellulare sono rimaste nel trombo dello stent trattato rispetto al gruppo trattato con bobina. Questa differenza non è stata osservata negli aneurismi vitali a sette giorni di FU. Ricordarsi di spegnere sempre le luci in sala operatoria prima di iniettare il cell-tracer per evitare lo sbiadimento. Inoltre, lasciare incubare il colorante per almeno 15 minuti.