Name: Un approccio di impianto retrogrado per il posizionamento del catetere di dialisi peritoneale nei topi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-07-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 27 s
Description: Impara un approccio di impianto retrogrado per cateteri di dialisi peritoneale nei topi. Questa tecnica migliorata previene malfunzionamenti meccanici e consente studi a lungo termine sulla fibrosi peritoneale.

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Questo lavoro è stato supportato da NIH 1R01HL132325 e R21 DK119740-01 (VCC) e AHA Cardio-oncology SFRN CAT-HD Center grant 857078 (VCC e SL).

Per questo studio, sono stati utilizzati otto topi femmina C57BL / 6J, 8-12 settimane di età e un peso medio di 20 g. I topi sono stati alloggiati in condizioni standard e sono stati nutriti con chow e acqua ad libitum. Questo studio è stato eseguito con l'approvazione dell'Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC), Boston University Medical Center (AN-1549). Le procedure qui descritte sono state eseguite in condizioni sterili.
1. Anestetizzare il topo in una camera di isoflurano e iniettare l'analgesico per via sottocutanea
<ol><li>Tieni l'animale dalla base della coda. Tenere l'animale sulla superficie dorsale della mano non dominante.</li>
	<li>Trasferire l'animale nella camera di induzione anestetica continua riempita con isoflurano al 3% -4%. Confermare un'adeguata anestesia generale dall'assenza del riflesso del pizzico degli arti posteriori destro e sinistro. Mantenere il mantenimento dell'anestesia generale con Isoflurano 1% -3%.</li>
	<li>Applicare unguento oftalmico su entrambi gli occhi.</li>
	<li>Somministrare un'iniezione sottocutanea di buprenorfina.<ol><li>Sciogliere lo stock di buprenorfina ad una concentrazione di 0,3 mg/ml in cloruro di sodio (NaCl) 0,9% per raggiungere la concentrazione finale di 0,03 mg/ml.</li>
		<li>Iniettare un dosaggio di 0,05-0,1 mg/kg di 0,03 mg/mL di buprenorfina, insieme a 500 μL di NaCl sterile 0,9%, 20 minuti prima dell'intervento chirurgico in un topo da 20 g (2 μg o 66 μL di 0,03 mg/ml di buprenorfina per topo).</li>
	</ol></li>
</ol>2. Preparazione della pelle
<ol><li>Posizionare il topo completamente anestetizzato in posizione laterale sinistra, esponendo il fianco destro alla coperta riscaldante. Rasare il lato destro dell'addome, appena vicino alla linea mediana dell'area paraspinale e giù fino alla coda dell'animale.</li>
	<li>Disinfettare l'area rasata tre volte usando un batuffolo di cotone con l'applicazione alternata della soluzione antisettica o dello scrub e alcool al 70% o soluzione salina sterile con un movimento circolare, iniziando dal sito di incisione chirurgica e spostandosi verso l'esterno. Eliminare il batuffolo di cotone dopo ogni utilizzo. Fare attenzione a non bagnare eccessivamente le aree non chirurgiche dell'animale con alcol o antisettico in quanto ciò può peggiorare l'ipotermia. NOTA: È importante diluire correttamente le soluzioni antisettiche e non lasciare scrub chirurgici sulla pelle durante l'intervento chirurgico, poiché possono essere irritanti e devono essere risciacquati. Controllare frequentemente la temperatura della coperta riscaldante durante la procedura per assicurarsi che la temperatura non diminuisca.</li>
</ol>3. Misurare la lunghezza del catetere e contrassegnare il punto di inserimento all'interno dell'addome e del tubo sopra la pelle preparata
<ol><li>Assegnare la tasca della porta di accesso 1 cm sopra la coda dell'animale. Tenere il segmento di installazione con l'indice non dominante e il dito del pollice sull'area assegnata vicino alla coda.</li>
	<li>Posizionare il catetere sopra la pelle e stimare il luogo per l'inserimento del tubo del catetere all'interno della cavità addominale. Segnare il punto assegnato per l'inserimento del tubo, rispettando la flessione minima del tubo vicino alla linea mediana anteriore. NOTA: Tutte le procedure devono essere eseguite con guanti sterili e il catetere deve essere mantenuto sterile durante la misurazione. Gli strumenti chirurgici devono essere sterilizzati in autoclave a 121 °C prima dell'uso. Fare riferimento alla figura supplementare S1 per gli strumenti necessari per la procedura.</li>
</ol>4. Personalizzare la sezione del serbatoio del catetere peritoneale
<ol><li>Perforare un foro laterale sul telaio della sezione del serbatoio con il targhiere auricolare del mouse (Figura 1 e Figura 2). Va notato che il pugno all'orecchio è uno strumento chirurgico e deve essere sterile.</li>
</ol>5. Posizionare la porta di instillazione
<ol><li>Fai un'incisione cutanea orizzontale larga 1 cm 1 cm sopra la coda. Sezionare bruscamente il piano sottocutaneo dallo strato muscolare sottostante per creare una sacca per il posizionamento del catetere per garantire che la porta di instillazione risieda liberamente nella tasca ideale della porta.</li>
	<li>Tenere la punta delle forbici del diaframma verso la linea mediana per creare un tunnel obliquo per il posizionamento del tubo (Figura 3A).</li>
	<li>Passare la sutura 3.0 dal foro laterale personalizzato. Fissare la porta di accesso al letto muscolare stringendo la sutura passata, mantenendo il tubo cefala.</li>
</ol>6. Effettuare l'incisione del sito di inserimento della punta del catetere
<ol><li>Fare un'incisione di 1 cm sull'area precedentemente contrassegnata vicino alla linea mediana. Confermare il tratto ben sviluppato passando le forbici attraverso il tratto.</li>
	<li>Prelevare delicatamente la punta del catetere con una pinza per posizionare il catetere in un corso retrogrado. NOTA: Evitare di pizzicare i fori laterali del tubo.</li>
	<li>Far passare il tubo del catetere attraverso il tratto preparato (Figura 3B). Fare un'incisione di 1 cm sullo strato muscolare vicino alla linea mediana destra.</li>
</ol>7. Confermare il funzionamento del catetere
<ol><li>Prima di chiudere tutte le incisioni, assicurarsi che il catetere posizionato sia funzionale. Controllare la funzione con una siringa da 1 mL collegata all'ago Huber specifico per la porta.</li>
	<li>Iniettare 200 μL di soluzione salina normale nella porta di instillazione. Cerca un flusso regolare con tolleranza zero per la resistenza.</li>
	<li>Lavare la porta e il catetere con eparina al 10% per mantenere la pervietà.</li>
</ol>8. Chiudere le incisioni cutanee
<ol><li>Chiudere le incisioni cutanee attorno al serbatoio del porto (Figura 3C) con punti di sutura riassorbibili 3-0.</li>
</ol>9. Fissare la punta del catetere all'interno della cavità addominale
<ol><li>Posizionare una sutura sciolta con una sutura assorbibile rotonda 4-0 attorno al muscolo della parete addominale inciso. Passare il feltro prossimale del catetere all'interno dell'incisione.</li>
	<li>Stringere la sutura del cordone della borsa preparata attorno al tubo mantenendo il secondo feltro al di fuori del cordone della borsa, sopra lo strato muscolare (Figura 3D) e chiudere la pelle con punti di sutura riassorbibili 3-0 (Figura 2).</li>
</ol>10. Monitorare gli animali postoperatoriamente e quotidianamente, somministrare analgesia e fluidi postoperatori e mantenere i registri postoperatori giornalieri per un minimo di 7 giorni e fino al completo recupero
<ol><li>Mantenere il catetere funzionante con un'iniezione giornaliera di 200 μL di soluzione salina normale attraverso il catetere.</li>
</ol>11. Iniezioni di liquidi
<ol><li>Confermare il processo post-procedurale senza incidenti ispezionando attentamente l'incisione cutanea.</li>
	<li>Preparare LPS 2 mg/kg di peso corporeo per iniezioni intraperitoneali (i.p.) diluendo 40 μg di LPS con soluzione salina tamponata fosfato sterile (PBS) alla concentrazione di lavoro di 0,2 μg/μL (in sostanza, 10 μL per 2 μg/g di peso corporeo e 200 μL di LPS per 20 g di topi).</li>
	<li>Iniziare le iniezioni nella seconda settimana successiva all'impianto del catetere.<ol><li>Tenere delicatamente l'animale con la mano non dominante e trattenere la porta di instillazione mentre si muovono l'indice e il pollice nella direzione del cefalo.</li>
		<li>Disinfettare la pelle sovrastante il serbatoio con alcool isopropilico al 70%. Usi la siringa attaccata all'ago Huber per iniettare l'LPS.<ol><li>Dopo essere entrati nella porta con l'ago Huber, iniettare 100 μL di soluzione salina normale nella porta per confermare il corso del brevetto.</li>
			<li>Iniettare i 200 μL di LPS preparati, seguiti dai 100 μL di soluzione salina normale per l'irrigazione del tubo, e assicurarsi che non vi sia resistenza.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
</ol>12. Anestetizzare i topi prima di raccogliere il peritoneo e raccogliere il liquido peritoneale
<ol><li>Dopo 7 giorni di iniezioni di LPS e 2 settimane di impianto del catetere, pianificare la biopsia peritoneale.</li>
	<li>Piano per l'anestesia generale.<ol><li>Anestetizzare il topo in una camera di isoflurano e iniettare l'analgesico per via sottocutanea.</li>
		<li>Tenere l'animale dalla base della coda e tenere l'animale sulla superficie dorsale della mano.</li>
		<li>Trasferire l'animale nella camera di induzione anestetica continua riempita con isoflurano al 3% -4%. Confermare un'adeguata anestesia generale dall'assenza del riflesso del pizzico degli arti posteriori destro e sinistro. Mantenere il mantenimento dell'anestesia generale con isoflurano 1% -3%.</li>
	</ol></li>
</ol>13. Biopsia peritoneale
<ol><li>Posizionare l'animale sulla coperta riscaldata in posizione supina. Fare un'incisione cutanea della linea mediana dal sub-xifoide alla vescica.</li>
	<li>Perfondere il piano sottofasciale con PBS freddo (Figura 3E).</li>
	<li>Assicurati che l'aereo sia completamente sezionato senza disturbare l'integrità del peritoneo. Inizia a sezionare il peritoneo dalla riflessione peritoneale laterale nel quadrante inferiore sinistro, a partire dall'ilo al fianco sinistro e dalla vescica nell'aspetto inferiore per mantenere i campioni coerenti tra gli animali (Figura 3F).</li>
	<li>Dopo la raccolta peritoneale, eutanasia l'animale per lussazione cervicale.</li>
</ol>

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</ol>

Gli autori non hanno conflitti di interesse da rivelare.

Sono descritti tre modelli murini di PD. Ciò include una puntura cieca della superficie peritoneale, un sistema aperto-permanente e un sistema chiuso10. La puntura cieca della superficie peritoneale comporta un accesso peritoneale diretto simile alle iniezioni intraperitoneali ma non consente il drenaggio del dializzato. Essendo una procedura in cieco, questo metodo può danneggiare gli organi viscerali addominali. Il modello di sistema aperto-permanente mantiene il catetere di dialisi e la porta d...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/63689">A Retrograde Implantation Approach for Peritoneal Dialysis Catheter Placement in Mice</a>. The Authors section was updated from:
Saran Lotfollahzadeh1 
Mengwei Zhang1 
Marc Arthur Napoleon1 
Wenqing Yin1 
Josephine Orrick1 
Nagla Elzind1 
Austin Morrissey1 
Isaac E. Sellinger1 
Lauren D. Stern1 
Mostafa Belghasem2 
Jean M. Francis1 
Vipul C. Chitalia1,3,4 
1Renal Section, Department of Medicine, Boston University School of Medicine 
2Department of Biomedical Science, Kaiser Permanente Bernard J. Tyson School of Medicine 
3Veterans Affairs Boston Healthcare System 
4Institute of Medical Engineering and Sciences, Massachusetts Institute of Technology
to:
Saran Lotfollahzadeh1 
Mengwei Zhang1 
Marc Arthur Napoleon1 
Wenqing Yin1 
Josephine Orrick1 
Nagla Elzind1 
Austin Morrissey1 
Isaac E. Sellinger1 
Lauren D. Stern1 
Mostafa Belghasem2 
Jean M. Francis1 
Vipul C. Chitalia1,3,4 
1Renal Section, Department of Medicine, Boston University Aram V. Chobanian &#38; Edward Avedisian School of Medicine 
2Department of Biomedical Science, Kaiser Permanente Bernard J. Tyson School of Medicine 
3Veterans Affairs Boston Healthcare System 
4Institute of Medical Engineering and Sciences, Massachusetts Institute of Technology

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/63689">A Retrograde Implantation Approach for Peritoneal Dialysis Catheter Placement in Mice</a>. The Authors section was updated.

Erratum: A Retrograde Implantation Approach for Peritoneal Dialysis Catheter Placement in Mice

Carico di malattia renale allo stadio terminale La malattia renale cronica (CKD) è un problema di salute mondiale1. Le stime attuali suggeriscono che più di 850 milioni di persone in tutto il mondo hanno malattie renali. La prevalenza delle malattie renali quasi raddoppia il numero di persone con diabete (422 milioni) ed è più di 20 volte la prevalenza di cancro (42 milioni) o HIV / AIDS (36,7 milioni) pazienti in tutto il mondo2. Circa uno su sette americani hanno CKD e due su 1.000 americani hanno ESKD che richiedono un trapianto di rene o supporto per dialisi3. Considerando il crescente onere dell'ESKD in tutto il mondo, l'ottimizzazione della tecnologia di dialisi è fondamentale3.
Dialisi peritoneale Il PD è una modalità significativamente sottoutilizzata per il trattamento della ESKD negli Stati Uniti. Secondo lo United States Renal Data System (USRDS), la percentuale di pazienti PD prevalenti era solo dell'11% nel 2020 4,5. Il PD conferisce diversi vantaggi rispetto all'emodialisi in centro (HD), tra cui una migliore qualità della vita, meno visite cliniche e una diminuzione delle spese Medicare 6,7. Inoltre, il PD è una terapia domiciliare ed è associato a un rischio molto più basso di infezioni gravi come batteriemia ed endocardite che sono spesso correlate ai cateteri per emodialisi. Inoltre, la malattia di Parkinson può essere iniziata rapidamente con un protocollo di avvio urgente, riducendo la necessità di iniziare la dialisi con cateteri vascolari permanenti8. Il PD è considerato il metodo preferito di dialisi nella popolazione pediatrica ESKD9.
Compromissione peritoneale indotta dalla dialisi peritoneale Il PD comporta l'introduzione di liquido PD (dializzato) nel peritoneo, che provoca infiammazione e rimodellamento della membrana peritoneale nel tempo. L'infiammazione peritoneale innesca la fibrosi, culminando nella potenziale perdita di capacità di ultrafiltrazione della membrana nel tempo. La conservazione della membrana peritoneale è una sfida significativa nel PD e ulteriori ricerche sono di fondamentale importanza per garantire che le migliori pratiche cliniche siano disponibili per i professionisti. Esistono modelli murini ben consolidati per aiutare ulteriormente la comprensione dei meccanismi fisiopatologici di infezione e infiammazione peritoneale, soluto, cinetica di trasporto dell'acqua e insufficienza di membrana; Tuttavia, i problemi tecnici con il catetere spesso limitano questi modelli10.
Analisi dei cambiamenti della membrana peritoneale Nei pazienti con ESKD, il dializzato viene tradizionalmente introdotto nella cavità peritoneale attraverso un catetere Tenkhoff con bracciale profondo e superficiale. I pazienti possono potenzialmente manifestare complicanze correlate al catetere, tra cui migrazione del catetere, dolore da infusione e scarso drenaggio del dializzato11,12,13. Sono stati introdotti due tipi principali di cateteri peritoneali per l'uomo, arrotolati o dritti, per ridurre al minimo queste complicanze12. Diverse modifiche, tra cui un bracciale extra ai cateteri convenzionali a due cuffi, sono state aggiunte ai cateteri originali per prolungare la sopravvivenza del catetere PD11. La tecnica di inserimento varia in base a diversi fattori impedendo la migrazione del catetere da aggiungere dopo la sopravvivenza, compresa la disponibilità delle risorse e il livello di competenza14.
Al contrario, i modelli murini di dialisi peritoneale hanno differenze fondamentali nelle tecniche e nello scopo rispetto ai cateteri peritoneali umani. Ad esempio, i cateteri peritoneali nei modelli murini sono utilizzati principalmente per studiare le alterazioni della membrana e sono meno destinati alle funzioni di drenaggio bidirezionale. La tecnica attuale soffre di potenziale spostamento del porto e migrazione del catetere a causa della manipolazione degli animali. Nei modelli murini convenzionali, le porte di accesso non erano fissate alla pelle. Questo aspetto creava una porta di accesso instabile, che negli animali svegli poteva essere spostata, con conseguente migrazione del catetere. Data l'importanza dei modelli murini nella ricerca sulla membrana peritoneale, è imperativo creare tecniche chirurgiche efficaci per generare modelli affidabili. Pertanto, abbiamo deciso di ottimizzare il modello convenzionale di posizionamento del catetere PD. È importante notare che il catetere stesso provoca alterazioni istopatologiche nella membrana peritoneale e, quindi, qualsiasi conclusione riguardante l'effetto delle soluzioni PD negli studi sugli animali deve essere interpretata nel contesto del catetere PD come un corpo estraneo15,16,17.
Istopatologia della membrana peritoneale Il fallimento della malattia di Parkinson è principalmente correlato alla fibrosi e all'eccesso di angiogenesi con conseguente perdita di un gradiente di concentrazione osmolare. Inoltre, la capacità di filtrazione della membrana peritoneale potrebbe essere influenzata dalla peritonite. Inoltre, la peritonite infettiva è una causa ben consolidata di cambiamento nella modalità di dialisi dalla dialisi peritoneale all'emodialisi. 18.

<table><tbody><tr><td>10% eparina&nbsp;</td><td>Canada Inc., Boucherville, QC, Canada)</td><td>Prodotto</td><td></td> farmaceutico</tr><tr><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Buprenorfina 0,3 mg/mL</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; PAR Farmaceutico</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; NDC 42023-179-05</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J topi</td><td>The Jackson Lab</td><td>IMSR_JAX:000664</td><td></td></tr><tr><td>CD31</td><td>Abcam</td><td>Ab9498</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Morsetto</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Strumenti di Fine Science</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 13002-10</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Pinze</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Strumenti di Fine Science</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 11002-12</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5SF Forcipe</td><td>Strumenti per la scienza fine</td><td>11252-00</td><td></td></tr><tr><td>Pinze per incannulamento dei vasi Dumont</td><td>Strumenti per la scienza fine</td><td>11282-11</td><td></td></tr><tr><td>Forbici fini - Anelli grandi Strumenti per la</td><td>scienza</td><td>14040-10</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand&nbsp; Animal Ear-Punch</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-812-201</td><td></td></tr><tr><td>Hill Hemostat</td><td>Fine Science Tools</td><td>13111-12</td><td></td></tr><tr><td>Ago a punta Huber</td><td>&nbsp; Accesso&nbsp; tecnologie&nbsp;</td><td>PG25-500</td><td>Ago per iniezioni</td></tr><tr><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Isoflurano, USP</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Covetrus</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; NDC 11695-6777-2</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Lipopolisaccaride da E.coli</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; SIGMA</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; L4391</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio</td><td>Nikon Eclipse Microscopio invertito</td><td>TE2000</td><td></td></tr><tr><td>Minute Mouse Port 4French con perline di ritenzione e fori trasversali</td><td> &nbsp; &nbsp; Accesso&nbsp; tecnologie&nbsp;</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; MMP-4S-061108A</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Aghi a punta Posi-Grip Huber 25 G x 1/2&acute; e acuto;</td><td>&nbsp; &nbsp; Accesso&nbsp; tecnologie</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; PG25-500</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Forbici</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Strumenti di Fine Science</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 14079-10</td><td></td></tr><tr><td>Sutura Vicryl</td><td>AD-Chirurgica</td><td>#L-G330R24</td><td></td></tr></tbody></table>

un approccio di impianto retrogrado per il posizionamento del catetere di dialisi peritoneale nei topi

A Retrograde Implantation Approach for Peritoneal Dialysis Catheter Placement in Mice

I modelli murini sono impiegati per sondare vari aspetti della dialisi peritoneale (PD), come l'infiammazione peritoneale e la fibrosi. Questi eventi guidano l'insufficienza della membrana peritoneale negli esseri umani, che rimane un'area di intensa indagine a causa delle sue profonde implicazioni cliniche nella gestione dei pazienti con malattia renale allo stadio terminale (ESKD). Nonostante l'importanza clinica del PD e delle sue complicanze correlate, gli attuali modelli murini sperimentali soffrono di sfide tecniche chiave che compromettono le prestazioni dei modelli. Questi includono la migrazione e l'attorcigliamento del catetere PD e di solito giustificano la rimozione anticipata del catetere. Queste limitazioni determinano anche la necessità di un numero maggiore di animali per completare uno studio. Affrontando questi inconvenienti, questo studio introduce miglioramenti tecnici e sfumature chirurgiche per prevenire le complicanze comunemente osservate del catetere PD in un modello murino. Inoltre, questo modello modificato è convalidato inducendo infiammazione peritoneale e fibrosi utilizzando iniezioni di lipopolisaccaridi. In sostanza, questo articolo descrive un metodo migliorato per creare un modello sperimentale di PD.

Tutti i cateteri impiantati sono stati funzionanti fino alla fine dello studio e lo spostamento o l'attorcigliamento del catetere non hanno complicato nessuno dei cateteri impiantati. L'attuale tecnica modificata è stata ulteriormente convalidata con un modello indotto dalla peritonite utilizzando LPS. I topi di controllo hanno ricevuto 200 μL di iniezioni saline normali giornaliere, mentre i topi sperimentali sono stati iniettati con 200 μL di LPS, come discusso nella fase 11 del protocollo, per un totale di 7 giorni do...

Questo articolo descrive le modifiche di una procedura per impiantare un catetere per dialisi peritoneale in un modello murino per evitare importanti problemi tecnici osservati con le tecniche convenzionali.

Un approccio di impianto retrogrado per il posizionamento del catetere di dialisi peritoneale nei topi

Murine models are employed to probe various aspects of peritoneal dialysis (PD), such as peritoneal inflammation and fibrosis. These events drive ...

I precedenti protocolli per i modelli murini di dialisi peritoneale soffrono di limitazioni che ne precludono l'uso a lungo termine. Queste limitazioni, come l'avvolgimento e lo spostamento del catetere, sono affrontate in questo studio. Questa tecnica previene il malfunzionamento del catetere PD per motivi meccanici, consentendo il loro utilizzo per un tempo più lungo per studiare patologie, come la fibrosi peritoneale.Questa tecnica fornirà un modello murino migliore per sondare la patogenesi molecolare e nuove terapie della fibrosi peritoneale. Una limitazione chiave del PD negli esseri umani. Il PD è il cardine della terapia sostitutiva renale nei pazienti pediatrici con ESKD.Questo modello ottimizzato fornirà un banco di prova migliore per indagare su tutti i problemi con PD negli esseri umani. La generazione di un modello animale ha una curva di apprendimento. Questo video passo-passo aiuterà un individuo a implementare questa tecnica per generare un modello duraturo per la dialisi peritoneale con successo.Per cominciare, posizionare il topo C57 nero/6J completamente anestetizzato di età compresa tra otto e 12 settimane in posizione laterale sinistra. Dopo aver rasato il mouse come specificato nel manoscritto, disinfettare l'area chirurgica esponendo il fianco destro del mouse alla coperta riscaldante. Quindi posizionare il drappo chirurgico sterile sul mouse.Assegnare la tasca della porta di accesso un centimetro sopra la coda del mouse. Tenere il segmento di installazione con l'indice non dominante e il dito del pollice sull'area assegnata vicino alla coda. Posizionare il catetere sopra la pelle e stimare il luogo per l'inserimento del tubo del catetere all'interno della cavità addominale.Quindi segnare il punto assegnato per l'inserimento del tubo, rispettando la flessione minima del tubo vicino alla linea mediana anteriore. Perforare un foro laterale sul telaio della sezione del serbatoio con il pigger del mouse. Fai un'incisione cutanea orizzontale larga un centimetro sopra la coda.Quindi sezionare bruscamente il piano sottocutaneo dallo strato muscolare sottostante per creare una sacca per il posizionamento del catetere per garantire che la porta di installazione risieda liberamente nella tasca ideale della porta. Superato il 3-0 dalla foratura laterale personalizzata. Fissare la porta di accesso al letto muscolare stringendo la sutura passata, mantenendo il tubo cefala.Fai un'incisione di un centimetro sull'area formalmente contrassegnata vicino alla linea mediana. Posizionare una sutura di corda della borsa sciolta con sutura assorbibile 4-0 intorno al muscolo della parete addominale inciso. Fare un'incisione di un centimetro sullo strato muscolare vicino alla linea mediana destra e passare il feltro prossimale del catetere all'interno dell'incisione.Passare il tubo del catetere attraverso il tratto preparato. Stringere la sutura della corda della borsa preparata attorno al tubo, mantenendo il secondo feltro al di fuori del cordone della borsa sopra lo strato muscolare e chiudere la pelle con punti di sutura assorbibili 3-0. Assicurarsi che il catetere inserito sia funzionante.Controllare la funzione con una siringa da un millilitro collegata all'ago Huber specifico per la porta. Iniettare soluzione salina normale nella porta di installazione. Dopo aver confermato un flusso regolare con una tolleranza zero per la resistenza, chiudere le incisioni cutanee attorno al serbatoio del porto con punti di sutura riassorbibili 3-0.Entrare nella porta con l'ago Huber e iniettare 100 microlitri di soluzione salina normale nella porta per confermare il corso del brevetto. Quindi iniettare 200 microlitri di lipopolisaccaride, seguiti da 100 microlitri di soluzione salina per l'irrigazione a tubo e assicurarsi che non ci sia resistenza. Dopo sette giorni di iniezioni di LPS e due settimane di impianto del catetere, pianificare la biopsia peritoneale.Dopo aver confermato il successo dell'anestesia, eseguire un'incisione cutanea della linea mediana dalla vescica al sub xifoide. Quindi perfondere il piano subfasciale con PBS freddo. Assicurati che l'aereo sia completamente sezionato senza disturbare l'integrità del peritoneo.L'analisi delle sezioni colorate con ematossilina ed eosina ha mostrato un sostanziale aumento della matrice extracellulare, o ECM, nello spazio subperitoneale. L'ECM media nello spazio sub peritoneale dei topi di controllo era la metà di quella nei topi esposti all'LPS. La colorazione tricromica di Masson rileva la fibrosi, misurata come densità di intensità normalizzata all'area superficiale.La vascolarizzazione alterata e l'allargamento dello spazio subperitoneale sono stati analizzati utilizzando il marcatore cellulare endoteliale CD31 e misurati come densità integrata in immagini di campo ad alta potenza selezionate casualmente. Rispetto al controllo, i topi indotti da LPS hanno mostrato un aumento di tre volte della fibrosi subperitoneale, un aumento di circa otto-nove volte della vascolarizzazione e un doppio aumento dello spazio subperitoneale, contrassegnato come SP, sono stati osservati. Posizionare il catetere sopra la pelle e contrassegnare il punto per l'inserimento del catetere, evitando la flessione del tubo.L'inserimento dovrebbe essere vicino alla linea mediana interna. Fornire il metodo di posizionamento del catetere PD murino più duraturo consentirà ai ricercatori di progettare ed eseguire esperimenti a lungo termine per sondare e indirizzare il fallimento della membrana peritoneale.

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