Name: Un modello murino di disfunzione della mano correlata allaccesso allemodialisi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-05-31T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 39 s
Description: Scopri la creazione di una fistola arterovenosa iliaca comune murina per studiare l'ischemia della mano correlata all'emodialisi. Questo modello esamina l'interazione tra uremia e alterazioni neuromuscolari.

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Ringraziamo sinceramente il Dr. Guanyi Lu della Divisione di Chirurgia Vascolare e Terapia Endovascolare dell'Università della Florida per il supporto tecnico sullo sviluppo del modello AVF iliaco, nonché la formazione chirurgica, e Ravi Kumar del Dipartimento di Fisiologia Applicata e Kinesiologia dell'Università della Florida per il supporto tecnico nell'ottenere le immagini microchirurgiche dal vivo.
Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni del National Institutes of Health e del National Heart, Lung, and Blood, numeri di Istituto R01-HL148697 (a S.T.S.), nonché dal numero di sovvenzione dell'American Heart Association POST903198 (a K.K.).

Tutte le procedure sono state approvate dall'Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) dell'Università della Florida e dal Malcom Randall Veterans Affairs Medical Center.
NOTA: I topi maschi C57BL / 6J giovani adulti (8-10 settimane) sono stati acquistati dal Jackson Laboratory e ospitati in una struttura per animali controllata con luce (12 ore di luce: ciclo di buio di 12 ore), temperatura (22 ° C ± 1 ° C) e umidità (50% ± 10%). Cinque topi sono stati autorizzati a dimorare per gabbia (L: 18 cm x L: 29 cm x A: 12,5 cm) con materiali di nidificazione, cibo e acqua resi disponibili ad libitum. Dopo 7 giorni di acclimatazione dell'habitat con chow standard, i topi sono stati cambiati in una dieta a base di caseina per 7 giorni come fase di transizione della dieta. Successivamente, i topi sono stati alimentati con il chow a base di caseina con un'integrazione di adenina allo 0,2% -0,15% per 2-3 settimane per indurre disfunzione renale (CKD) prima dell'intervento chirurgico AVF come precedentemente descritto22,23,24. I topi di controllo hanno ricevuto una dieta a base di caseina senza supplementazione di adenina (controllo). Le diete di controllo e CKD sono state mantenute per tutto il periodo di recupero postoperatorio (POD).
1. Misurazioni preoperatorie
<ol><li>Valutare le misurazioni degli esiti basali / preoperatori, i diametri dei vasi aortoiliaci e i parametri di flusso emodinamico utilizzando l'ecografia duplex e la perfusione degli arti posteriori tramite laser Doppler come descritto in precedenza25.</li>
	<li>Determinare la forza unilaterale dell'aderenza degli arti posteriori e la valutazione dell'andatura del tapis roulant per stabilire la funzione basale degli arti posteriori come descritto in precedenza25,26.</li>
	<li>Valutare la funzionalità renale misurando la velocità di filtrazione glomerulare (GFR) tramite clearance dell'inulina FITC e/o il livello di azoto ureico nel sangue sierico (BUN) come descritto in precedenza22,24,27.</li>
</ol>2. Preparazione chirurgica
<ol><li>Preparare i seguenti strumenti chirurgici e forniture (tabella dei materiali): uno sterilizzatore a perline calde, un lubrificante per gli occhi, un tagliapenne, preparazioni di alcool, salviette alla clorexidina, pinze Graefe extrafini, soluzione salina sterilizzata allo 0,9%, siringhe ad aghi da 29 G e 31 G, 2 spugne non tessute, tondi medi a un estremità singola (SC-9) e piccoli tamponi di cotone duri, affilati, appuntiti (SC-4), cauterizzazione a bassa temperatura, pinza Dumont dritta, pinza Dumont angolata a 45°, forbici a molla Vannas dritte, forbici a molla Vannas curve, portaaghi con manico rotondo, suture multiple (seta 4-0, 5-0 PGA, seta 6-0 e suture in nylon 10-0), eparina, spugna di gelatina assorbibile, un portaaghi dritto e buprenorfina. NOTA: Gli elastici di fissaggio delle estremità e i divaricatori per l'addome e le gambe sono stati fatti a mano.</li>
	<li>Sterilizzare le preps chirurgiche utilizzando l'autoclave con sterilizzazione a vapore a 120-125 °C per 30 minuti seguita da asciugatura per 30 minuti prima dell'intervento. Utilizzare una pulizia con etanolo al 70% seguita da sterilizzazione con perline calde (240-270 ° C per 3 minuti) tra ogni intervento chirurgico sugli animali.</li>
	<li>Preparare soluzione salina normale sterilizzata allo 0,9%, soluzione salina eparinizzata (100 UI / ml) e buprenorfina (0,01 mg / ml) utilizzando siringhe ad ago da 29-31 G.</li>
</ol>3. Anestesia e posizionamento
<ol><li>Iniziare l'anestesia del topo nella camera di induzione (0,8 ml/min, isoflurano al 2,5%). Una volta che il topo è adeguatamente anestetizzato, posizionare il topo in posizione supina sulla postazione chirurgica coperta da un drappeggio sterile. Ridurre la concentrazione di isoflurano fino a ~ 1,2% durante le fasi di rasatura e posizionamento.</li>
	<li>Applicare il lubrificante oculare per proteggere gli occhi dall'asciugatura durante l'intervento.</li>
	<li>Utilizzando un trimmer a penna, radersi i peli addominali per l'operazione e i peli delle gambe per le misurazioni della perfusione postoperatoria. Eliminare i capelli dal campo chirurgico.</li>
	<li>Fissare gli arti superiori e inferiori con elastici e chiodi, controllare la profondità dell'anestesia monitorando il riflesso del pizzicamento della punta e titolare l'anestesia se necessario. Eseguire la valutazione del modello respiratorio ogni 3-5 minuti durante la procedura chirurgica per calibrare il livello di anestesia.</li>
</ol>4. Esplorazione dell'area bersaglio chirurgico
<ol><li>Pulire più volte l'area della pelle rasata, alternando la preparazione dell'alcool e le salviette alla clorexidina in uno schema circolare per disinfettare il campo chirurgico.</li>
	<li>Fare una laparotomia della linea mediana dal bordo inferiore del margine sternale alla sinfisi pubica. Sezionare il cuscinetto adiposo pubico per ottenere un campo operatorio più ampio.</li>
	<li>Aprire la celiotomia per accedere al contenuto peritoneale con divaricatori ed eviscerare l'intestino tenue e crasso utilizzando tamponi di cotone rotondi medi a punta singola. Coprire le viscere con una spugna non tessuta imbevuta di soluzione salina.</li>
	<li>Una volta ottenuta un'adeguata esposizione della vascolarizzazione retroperitoneale, coprire l'intestino, i reni e gli ureteri rimanenti con piccole spugne non tessute imbevute di soluzione salina. Evacuare una vescica distesa schiacciando delicatamente la cupola della vescica con tamponi di cotone rotondi medi a terminazione singola, se necessario.</li>
	<li>Sezionare attentamente la fascia perivascolare e il tessuto adiposo da circa 1 cm prossimale alla biforcazione aortica che si estende fino al livello della biforcazione iliaca sinistra usando una pinza di Dumont dritta e piccoli tamponi di cotone duri, affilati e appuntiti a doppia estremità. NOTA: L'arteria iliaca sinistra e la vena sono lasciate aderenti l'una all'altra mentre isolano le strutture artero-venose in massa. Questo passaggio fornirà una mobilitazione sufficiente dei vasi per facilitare la creazione di AVF.</li>
	<li>Se si incontrano piccoli rami venosi originati o convergenti con la vena iliaca comune sinistra, ligarali usando cauterizzazione a bassa temperatura con o senza sutura di seta 6-0 secondo necessità.</li>
	<li>Passare la punta della pinza angolata sotto il fascio vascolare iliaco comune sinistro e distribuire delicatamente più volte per mobilizzare i vasi dalla muscolatura retroperitoneale sottostante (Figura 1A).</li>
</ol>5. Creazione di una comune anastomosi della fistola arteriosa iliaca
<ol><li>Posizionare due suture di seta 4-0 attorno al fascio arterioso iliaco comune isolato e usarli come legature (ad esempio, morsetti incrociati) al fascio vascolare. Crea un singolo nodo con ogni cravatta di seta 4-0 e applicali in sequenza da prossimale a distale.</li>
	<li>Assicurarsi che i morsetti incrociati della cravatta di seta siano posizionati sufficientemente distanti per isolare ~ 2 mm di lunghezza del vaso e l'applicazione sequenziale delle legature di sutura precipiterà l'ingorgo della vena iliaca sinistra.</li>
	<li>Utilizzando le corde di sutura di seta 4-0 come maniglie, ruotare il fascio vascolare arterioso iliaco sinistro in senso orario e mettere a punto la posizione per localizzare temporaneamente la vena anteriore all'arteria (Figura 1B).</li>
	<li>Effettuare una venotomia longitudinale (~1 mm) con forbici a molla Vannas dritte e lavare delicatamente il sangue residuo dal lume venoso con soluzione salina allo 0,9% (Figura 1C). Prestare attenzione durante questa fase, poiché un lavaggio salino ad alta pressione può causare interruzioni venose. NOTA: la regione di colore rosso che rimane nell'arteria iliaca dopo il rossore venoso fornisce una finestra visiva per il passaggio successivo.</li>
	<li>Posizionare una sutura di nylon 10-0 imbricante attraverso la parete posteriore della vena. NOTA: Questa porzione della vena iliaca dovrebbe essere in apposizione immediata alla parete anteriore dell'arteria iliaca e le pareti sono naturalmente aderenti. La sutura dovrebbe passare attraverso entrambe le pareti e legare la sutura verso il basso con un singolo nodo (Figura 1D). Si noti che una piccola quantità di sanguinamento, che ha origine dal sangue stagnante nell'arteria iliaca, apparirà una volta che l'ago passa attraverso entrambe le pareti. Se il sanguinamento intra-luminale continua durante questa fase, i morsetti incrociati della sutura di seta potrebbero essere troppo allentati e devono essere ulteriormente serrati.</li>
	<li>Afferrare le estremità di sutura imbricate e metterle sotto una leggera tensione per spostare la parete anteriore dalla parete posteriore dell'arteria iliaca. Fai un'incisione ellittica ~ 1,0 mm x 0,3 mm usando le forbici a molla Vannas curve, rimuovendo le pareti aderenti sia dell'arteria iliaca che della vena. NOTA: La fistola artero-venosa viene così creata una volta stabilito questo canale comune. È possibile ferire le pareti laterali della vena durante questa fase poiché l'incisione della parete della vena iliaca posteriore / arteria iliaca anteriore viene eseguita attraverso l'esposizione alla venotomia. Si deve prestare attenzione per evitare questa complicanza in quanto ciò può ridurre considerevolmente il diametro della fistola e portare allo sviluppo di trombi.</li>
	<li>Lavare delicatamente il sangue residuo del lume arterioso esposto con soluzione salina allo 0,9% ed eparinizzata (100 UI / ml)28 (Figura 1E).</li>
	<li>Dopo la creazione dell'AVF, riparare la venotomia iniziale della parete anteriore utilizzando due o tre suture di nylon 10-0 in modo interrotto (Figura 1F).</li>
	<li>Ripristinare il fascio vascolare al suo orientamento anatomico originale e posizionare un piccolo pezzo di spugna di gelatina assorbibile imbevuta di soluzione salina adiacente alla venotomia riparata per facilitare l'emostasi.</li>
	<li>Allenta le legature a nodo singolo 4-0 in sequenza da distale a prossimale. Monitorare attentamente il sito di venotomia per un eccessivo sanguinamento mentre si allenta ogni sutura.</li>
	<li>Se la riparazione non è adeguatamente emostatica, riapplicare i morsetti trasversali e posizionare un'altra sutura di nylon 10-0 nel sito di sanguinamento. Se l'emostasi è assicurata, rimuovere i punti di sutura e quindi la spugna di gelatina assorbibile.</li>
	<li>Strofinare delicatamente il fascio vascolare con piccoli tamponi di cotone duri, affilati e appuntiti a doppia estremità, che facilitano ulteriormente il ripristino del flusso sanguigno. Confermare il successo tecnico dell'operazione utilizzando la visualizzazione del sangue ossigenato rosso vivo pulsante che entra nella vena iliaca e si mescola con il sangue venoso scuro che ritorna dall'arto posteriore.</li>
	<li>Iniettare soluzione salina eparinizzata (0,2 UI / g) 15 nell'IVC per l'anticoagulazione sistemica per migliorare i risultati della pervietà AVF. NOTA: Sebbene questa fase si verifichi dopo la ricostruzione vascolare (al contrario dell'analogo umano in cui l'eparinizzazione si verifica prima del cross-clampaggio dei vasi), una riduzione del sanguinamento intraoperatorio e una migliore pervietà AVF sono state osservate quando eseguite in questa fase della procedura. L'iniezione in un sito coperto da fascia e / o grasso è preferibile per prevenire il sanguinamento dal sito di puntura.</li>
	<li>Ispezionare nuovamente il sito chirurgico per l'emostasi dopo l'iniezione di soluzione salina eparinizzata. Se non ci sono problemi di sanguinamento, chiudere la fascia mediana e quindi l'incisione cutanea con suture PGA 5-0 assorbibili in modo corrente.</li>
	<li>Per le operazioni fittizie, seguire tutti i passaggi chiave della procedura ad eccezione della formazione AVF. Applicare un singolo nodo della legatura della seta 4-0 all'estremità prossimale del fascio artero-venoso iliaco sinistro e abbinare i tempi di morsetto agli interventi chirurgici AVF (ad esempio, ~ 20 minuti, a seconda della competenza del microchirurgo).</li>
</ol>6. Cura e misurazione postoperatoria
<ol><li>Dopo la chiusura della laparotomia, misurare la perfusione sanguigna dei muscoli tibiali bilaterali anteriori e delle zampe ventrali utilizzando l'imaging laser Doppler. NOTA: I deficit unilaterali di perfusione confermeranno la diversione della fistola del flusso arterioso ("steal").</li>
	<li>Somministrare 0,1 mg/kg di buprenorfina per via sottocutanea e riportare il topo in una gabbia di topo preriscaldata con lettiera morbida altamente assorbibile con nido.</li>
	<li>Lasciare che il topo si riprenda nella gabbia del topo preriscaldata fino a quando l'anestesia svanisce, il che sarà evidente quando il mouse è ambulatoriale e interattivo (~ 2 h). Durante il recupero, dare al mouse un facile accesso a una dieta idratata e morbida.</li>
	<li>Somministrare buprenorfina e/o idratazione salina sottocutanea ogni 12 h fino a 48 h ed eseguire il monitoraggio giornaliero per 5 giorni post-operatori. Eutanasia degli animali con una condizione di deterioramento o eccessiva necrosi tissutale, classificati come punteggio di ischemia modificata ≥ 229.</li>
	<li>Utilizzare valutazioni ecografiche duplex seriali per valutare la pervietà della fistola post-operatoria; i topi con trombosi della fistola sono esclusi dalle analisi successive, a meno che lo scopo degli esperimenti non sia quello di caratterizzare il fallimento della maturazione dell'AVF.</li>
	<li>Determinare altre misurazioni degli esiti postoperatori come l'emodinamica locale, la forza di presa e le prestazioni dell'andatura durante il periodo di recupero. Raccogliere fistola e tessuti muscolari per valutare l'istomorfologia al termine dell'esperimento durante il sacrificio25,27.</li>
</ol>

<ol><li>Gameiro, J., Ibeas, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+affecting+arteriovenous+fistula+dysfunction%3A+a+narrative+review%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Vascular+Access%22%5BJournal%5D)">Factors affecting arteriovenous fistula dysfunction: a narrative review.</a> The Journal of Vascular Access. 21 (2), 134-147 (2020).</li>
<li>Culleton, B. F., Asola, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+short+daily+and+nocturnal+hemodialysis+on+quality+of+life%2C+cardiovascular+risk+and+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">The impact of short daily and nocturnal hemodialysis on quality of life, cardiovascular risk and survival.</a> Journal of Nephrology. 24 (4), 405(2011).</li>
<li>Huber, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Access-related+hand+ischemia+and+the+hemodialysis+fistula+maturation+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Access-related hand ischemia and the hemodialysis fistula maturation study.</a> Journal of Vascular Surgery. 64 (4), 1050-1058 (2016).</li>
<li>Rehfuss, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+spectrum+of+hand+dysfunction+after+hemodialysis+fistula+placement%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International+Reports%22%5BJournal%5D)">The spectrum of hand dysfunction after hemodialysis fistula placement.</a> Kidney International Reports. 2 (3), 332-341 (2017).</li>
<li>Caplice, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neoangiogenesis+and+the+presence+of+progenitor+cells+in+the+venous+limb+of+an+arteriovenous+fistula+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Neoangiogenesis and the presence of progenitor cells in the venous limb of an arteriovenous fistula in the rat.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 293 (2), 470-475 (2007).</li>
<li>Castier, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+neointima+lesions+associated+with+arteriovenous+fistulas+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">Characterization of neointima lesions associated with arteriovenous fistulas in a mouse model.</a> Kidney International. 70 (2), 315-320 (2006).</li>
<li>Croatt, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+model+of+an+arteriovenous+fistula+in+the+rat%3A+the+effect+of+L-NAME%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Characterization of a model of an arteriovenous fistula in the rat: the effect of L-NAME.</a> The American Journal of Pathology. 176 (5), 2530-2541 (2010).</li>
<li>Guzman, R. J., Krystkowiak, A., Zarins, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+and+sustained+medial+cell+activation+after+aortocaval+fistula+creation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Early and sustained medial cell activation after aortocaval fistula creation in mice.</a> Journal of Surgical Research. 108 (1), 112-121 (2002).</li>
<li>Kojima, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relationship+between+venous+hypertension+and+expression+of+vascular+endothelial+growth+factor%3A+hemodynamic+and+immunohistochemical+examinations+in+a+rat+venous+hypertension+model%5BTitle%5D)+AND+%22Surgical+Neurology%22%5BJournal%5D)">The relationship between venous hypertension and expression of vascular endothelial growth factor: hemodynamic and immunohistochemical examinations in a rat venous hypertension model.</a> Surgical Neurology. 68 (3), 277-284 (2007).</li>
<li>Misra, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+rat+femoral+arteriovenous+fistula+model%3A+increased+expression+of+matrix+metalloproteinase-2+and+-9+at+the+venous+stenosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+and+Interventional+Radiology%22%5BJournal%5D)">The rat femoral arteriovenous fistula model: increased expression of matrix metalloproteinase-2 and -9 at the venous stenosis.</a> Journal of Vascular and Interventional Radiology. 19 (4), 587-594 (2008).</li>
<li>Nath, K. A., Kanakiriya, S. K., Grande, J. P., Croatt, A. J., Katusic, Z. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+venous+proinflammatory+gene+expression+and+intimal+hyperplasia+in+an+aorto-caval+fistula+model+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Increased venous proinflammatory gene expression and intimal hyperplasia in an aorto-caval fistula model in the rat.</a> The American Journal of Pathology. 162 (6), 2079-2090 (2003).</li>
<li>Nath, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+murine+dialysis+fistula+model+exhibits+a+senescence+phenotype%3A+pathobiological+mechanisms+and+therapeutic+potential%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">The murine dialysis fistula model exhibits a senescence phenotype: pathobiological mechanisms and therapeutic potential.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 315 (5), 1493-1499 (2018).</li>
<li>Yamamoto, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mouse+aortocaval+fistula+recapitulates+human+arteriovenous+fistula+maturation%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">The mouse aortocaval fistula recapitulates human arteriovenous fistula maturation.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 305 (12), 1718-1725 (2013).</li>
<li>Yang, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+mouse+venous+hypertension+model%3A+common+carotid+artery+to+external+jugular+vein+anastomosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Adult mouse venous hypertension model: common carotid artery to external jugular vein anastomosis.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (95), e50472(2015).</li>
<li>Wong, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+murine+model+of+arteriovenous+fistula+failure%3A+the+surgical+procedure+in+detail%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">A novel murine model of arteriovenous fistula failure: the surgical procedure in detail.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (108), e53294(2016).</li>
<li>Krishnamoorthy, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomic+configuration+affects+the+flow+rate+and+diameter+of+porcine+arteriovenous+fistulae%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">Anatomic configuration affects the flow rate and diameter of porcine arteriovenous fistulae.</a> Kidney International. 81 (8), 745-750 (2012).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Venous+stenosis+in+a+pig+arteriovenous+fistula+model-anatomy%2C+mechanisms+and+cellular+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology+Dialysis+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Venous stenosis in a pig arteriovenous fistula model-anatomy, mechanisms and cellular phenotypes.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 23 (2), 525-533 (2008).</li>
<li>Loveland-Jones, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+model+of+arteriovenous+fistula+to+study+hemodialysis+access+complications%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Vascular+Access%22%5BJournal%5D)">A new model of arteriovenous fistula to study hemodialysis access complications.</a> The Journal of Vascular Access. 15 (5), 351-357 (2014).</li>
<li>Nugent, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perivascular+endothelial+implants+inhibit+intimal+hyperplasia+in+a+model+of+arteriovenous+fistulae%3A+a+safety+and+efficacy+study+in+the+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Research%22%5BJournal%5D)">Perivascular endothelial implants inhibit intimal hyperplasia in a model of arteriovenous fistulae: a safety and efficacy study in the pig.</a> Journal of Vascular Research. 39 (6), 524-533 (2002).</li>
<li>Butterfield, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inverse+effect+of+chronically+elevated+blood+flow+on+atherogenesis+in+miniature+swine%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Inverse effect of chronically elevated blood flow on atherogenesis in miniature swine.</a> Atherosclerosis. 26 (2), 215-224 (1977).</li>
<li>Kwei, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+adaptive+responses+of+the+vascular+wall+during+venous+arterialization+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Early adaptive responses of the vascular wall during venous arterialization in mice.</a> The American Journal of Pathology. 164 (1), 81-89 (2004).</li>
<li>Berru, F. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+kidney+disease+exacerbates+ischemic+limb+myopathy+in+mice+via+altered+mitochondrial+energetics%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Chronic kidney disease exacerbates ischemic limb myopathy in mice via altered mitochondrial energetics.</a> Scientific Reports. 9 (1), 15547(2019).</li>
<li>Khattri, R. B., Thome, T., Ryan, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-specific+1H-NMR+metabolomic+profiling+in+mice+with+adenine-induced+chronic+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Metabolites%22%5BJournal%5D)">Tissue-specific 1H-NMR metabolomic profiling in mice with adenine-induced chronic kidney disease.</a> Metabolites. 11 (1), 45(2021).</li>
<li>Thome, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+muscle+mitochondrial+energetics+is+associated+with+uremic+metabolite+accumulation+in+chronic+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation+Insight%22%5BJournal%5D)">Impaired muscle mitochondrial energetics is associated with uremic metabolite accumulation in chronic kidney disease.</a> Journal of Clinical Investigation Insight. 6 (1), 139826(2021).</li>
<li>Kim, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+murine+iliac+arteriovenous+fistula+model+for+examination+of+hemodialysis+access-related+limb+pathophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery-Vascular+Science%22%5BJournal%5D)">Development of a murine iliac arteriovenous fistula model for examination of hemodialysis access-related limb pathophysiology.</a> Journal of Vascular Surgery-Vascular Science. 2, 247-259 (2021).</li>
<li>Castro, B., Kuang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+muscle+performance+in+mice+by+treadmill+exhaustion+test+and+whole-limb+grip+strength+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Bio-protocol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of muscle performance in mice by treadmill exhaustion test and whole-limb grip strength assay.</a> Bio-protocol. 7 (8), 2237(2017).</li>
<li>Kim, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skeletal+myopathy+in+CKD%3A+a+comparison+of+adenine-induced+nephropathy+and+5%2F6+nephrectomy+models+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Skeletal myopathy in CKD: a comparison of adenine-induced nephropathy and 5/6 nephrectomy models in mice.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 321 (1), 106-119 (2021).</li>
<li>Yang, B., Shergill, U., Fu, A. A., Knudsen, B., Misra, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mouse+arteriovenous+fistula+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+and+Interventional+Radiology%22%5BJournal%5D)">The mouse arteriovenous fistula model.</a> Journal of Vascular and Interventional Radiology. 20 (7), 946-950 (2009).</li>
<li>Brenes, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+a+mouse+model+of+hind+limb+ischemia+to+test+therapeutic+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Toward a mouse model of hind limb ischemia to test therapeutic angiogenesis.</a> Journal of Vascular Surgery. 56 (6), 1669-1679 (2012).</li>
<li>Bello, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+global+kidney+health+care+status%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Medical+Association%22%5BJournal%5D)">Assessment of global kidney health care status.</a> Journal of the American Medical Association. 317 (18), 1864-1881 (2017).</li>
<li>Levin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+kidney+health+2017+and+beyond%3A+a+roadmap+for+closing+gaps+in+care%2C+research%2C+and+policy%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Global kidney health 2017 and beyond: a roadmap for closing gaps in care, research, and policy.</a> The Lancet. 390 (10105), 1888-1917 (2017).</li>
<li>Hassabi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparing+strength+and+range+of+motion+of+the+upper+limb+with+AV+fistula+access+with+the+contralateral+upper+limb+among+patients+treated+with+hemodialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Researcher+Bulletin+of+Medical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Comparing strength and range of motion of the upper limb with AV fistula access with the contralateral upper limb among patients treated with hemodialysis.</a> Researcher Bulletin of Medical Sciences. 22 (1), 1(2017).</li>
<li>Capitanini, A., Galligani, C., Lange, S., Cupisti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Upper+limb+disability+in+hemodialysis+patients%3A+evaluation+of+contributing+factors+aside+from+amyloidosis%5BTitle%5D)+AND+%22Therapeutic+Apheresis+and+Dialysis%22%5BJournal%5D)">Upper limb disability in hemodialysis patients: evaluation of contributing factors aside from amyloidosis.</a> Therapeutic Apheresis and Dialysis. 16 (3), 242-247 (2012).</li>
<li>Altintepe, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+disability%2C+psychological+status%2C+and+health-related+quality+of+life+in+older+hemodialysis+patients+and+age-matched+controls%5BTitle%5D)+AND+%22Hemodialysis+International%22%5BJournal%5D)">Physical disability, psychological status, and health-related quality of life in older hemodialysis patients and age-matched controls.</a> Hemodialysis International. 10 (3), 260-266 (2006).</li>
<li>Castaneda, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resistance+training+to+reduce+the+malnutrition-inflammation+complex+syndrome+of+chronic+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Kidney+Diseases%22%5BJournal%5D)">Resistance training to reduce the malnutrition-inflammation complex syndrome of chronic kidney disease.</a> American Journal of Kidney Diseases. 43 (4), 607-616 (2004).</li>
<li>Hurton, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Upper+extremity+complications+in+patients+with+chronic+renal+failure+receiving+haemodialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Renal+Care%22%5BJournal%5D)">Upper extremity complications in patients with chronic renal failure receiving haemodialysis.</a> Journal of Renal Care. 36 (4), 203-211 (2010).</li>
<li>Mazumder, M. K., Giri, A., Kumar, S., Borah, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+highly+reproducible+mice+model+of+chronic+kidney+disease%3A+Evidences+of+behavioural+abnormalities+and+blood-brain+barrier+disruption%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">A highly reproducible mice model of chronic kidney disease: Evidences of behavioural abnormalities and blood-brain barrier disruption.</a> Life Sciences. 161, 27-36 (2016).</li>
<li>Jia, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+model+of+adenine-induced+tubulointerstitial+nephropathy+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Central+Nephrology%22%5BJournal%5D)">A novel model of adenine-induced tubulointerstitial nephropathy in mice.</a> BioMed Central Nephrology. 14, 116(2013).</li>
<li>Kieswich, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+model+of+reno-cardiac+syndrome+in+the+C57BL%2F+6+mouse+strain%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Central+Nephrology%22%5BJournal%5D)">A novel model of reno-cardiac syndrome in the C57BL/ 6 mouse strain.</a> BioMed Central Nephrology. 19 (1), 346(2018).</li>
<li>Abassi, Z., Goltsman, I., Karram, T., Winaver, J., Hoffman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aortocaval+fistula+in+rat%3A+a+unique+model+of+volume-overload+congestive+heart+failure+and+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedicine+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Aortocaval fistula in rat: a unique model of volume-overload congestive heart failure and cardiac hypertrophy.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2011, 729497(2011).</li>
<li>Brower, G. L., Levick, S. P., Janicki, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+matrix+metalloproteinase+activity+by+ACE+inhibitors+prevents+left+ventricular+remodeling+in+a+rat+model+of+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Inhibition of matrix metalloproteinase activity by ACE inhibitors prevents left ventricular remodeling in a rat model of heart failure.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 292 (6), 3057-3064 (2007).</li>
<li>Francis, B. N., Abassi, Z., Heyman, S., Winaver, J., Hoffman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+regulation+of+ET+%28A%29+and+ET+%28B%29+in+the+renal+tissue+of+rats+with+compensated+and+decompensated+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiovascular+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Differential regulation of ET (A) and ET (B) in the renal tissue of rats with compensated and decompensated heart failure.</a> Journal of Cardiovascular Pharmacology. 44, 362-365 (2004).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

La prevalenza dei pazienti in emodialisi con ARHD dopo la creazione di AVF ha continuato ad aumentare30,31. Infatti, le complicanze sintomatiche irrisolte 4,32,33 come dolore, debolezza, parestesia e/o ridotta gamma di movimento possono avere un impatto negativo sul benessere del paziente 4,32,33,34,35,36 e minacciare la loro capacità di ricevere un trattamento di emodialisi ripetitiva di alta qualità.<su...

La creazione e la conservazione dell'accesso vascolare funzionale rimangono un importante obiettivo primario per i pazienti con malattia renale allo stadio terminale (ESRD) che ricevono una terapia sostitutiva renale tramite emodialisi1. Ripetuti trattamenti di emodialisi sono necessari per rimuovere i prodotti di scarto, normalizzare gli elettroliti e mantenere l'equilibrio dei liquidi una volta che la funzione renale diventa inadeguata, e quindi sono necessari per la sopravvivenza a lungo termine2. Pertanto, l'accesso vascolare rappresenta un'ancora di salvezza per i pazienti con ESRD e il posizionamento della fistola artero-venosa autogena (AVF) rimane un'opzione di accesso alla dialisi preferita tra questa coorte3. Tuttavia, circa il 30% -60% dei pazienti in emodialisi sperimenta uno spettro di disabilità della mano, clinicamente definito come disfunzione della mano correlata all'accesso (ARHD). I sintomi dell'ARHD possono variare da debolezza e discoordinazione alla monoplegia e alla cancrena digitale, che possono verificarsi precocemente dopo la creazione di AVF o svilupparsi gradualmente con la maturazione della fistola. Inoltre, l'ARHD complica il programma di trattamento ESRD, che è associato a scarsa qualità della vita, alto rischio di malattie cardiovascolari e aumento della mortalità 2,3,4.
Diversi modelli animali sono stati sviluppati per studiare il rimodellamento vascolare indotto da alterazioni emodinamiche dopo la creazione di AVF 5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15. I modelli animali di grandi dimensioni con AVF iliaca o femorale 16,17,18,19,20 e modelli di roditori che utilizzano anastomosi della vena carotide-giugulare o formazione di fistola infrarenale della vena cava inferiore dell'aorta sono ben consolidati per esaminare i suddetti aspetti della maturazione e della pervietà AVF 21 . Ad esempio, l'ipertensione venosa, il maggior diametro luminale e l'aumento dello spessore della parete venosa sono segni di successo della maturazione dell'AVF, mentre la fibrosi sostanziale della media e l'iperplasia intimale o lo sviluppo di trombi senza cambiamenti nel flusso spesso caratterizzano i fallimenti dell'AVF 6,15. Tuttavia, i modelli animali di grandi dimensioni mancano della flessibilità sperimentale o delle capacità transgeniche dei modelli murini, mentre gli attuali modelli di roditori non facilitano prontamente lo studio dell'ARHD a causa della posizione anatomica e / o della mancanza di patologia degli arti associata. Infatti, a causa della mancanza di un modello animale preclinico stabilito che riassuma il fenotipo clinico rilevante, i progressi della ricerca per chiarire i meccanismi patobiologici e sviluppare nuove strategie terapeutiche sono rimasti stagnanti, nonostante un progressivo aumento del numero di pazienti con ARHD sintomatici. Pertanto, l'obiettivo principale di questo studio è quello di introdurre un modello murino unico di ARHD, fornendo fasi procedurali della microchirurgia AVF e caratterizzazione della fisiopatologia correlata all'AVF.

<table><tbody><tr><td>0,15% Dieta adenina</td><td>ENVIGO</td><td>TD.130899</td><td>20% caseina, 0,15% adenina, 0,9% P</td></tr><tr><td>0,2% Dieta adenina</td><td>ENVIGO</td><td>TD.130900</td><td>20% caseina, 0,2% adenina, 0,9% P</td></tr><tr><td>10-0 Sutura in nylon</td><td>AD chirurgica</td><td>XXS-N1005T4</td><td></td></tr><tr><td>Siringhe ad ago da 29 G Exel</td><td>International</td><td>14-841-32</td><td></td></tr><tr><td>Siringhe ad ago da 31 G</td><td>Advocate</td><td>U-100 siringa</td><td></td>da insulina</tr><tr><td>4-0 sutura di seta</td><td>AD chirurgica</td><td>S-S41813</td><td></td></tr><tr><td>pinza dumont angolata a 45 gradi</td><td>Fine Science Tools</td><td>11253-25</td><td></td></tr><tr><td>5-0 sutura PGA</td><td>AD chirurgica</td><td>PSGU-518R13</td><td></td></tr><tr><td>6-0 sutura di seta</td><td>AD chirurgica</td><td>S-S618R13</td><td></td></tr><tr><td>Spugna di gelatina assorbibile</td><td>ETHICON</td><td>1975</td><td></td></tr><tr><td>Preparazioni alcoliche</td><td>Covidien</td><td>5110-cs4000</td><td>70% alcol isopropilico</td></tr><tr><td>Buprenorfina</td><td>NA</td><td>NA</td><td>0,01 g/mL</td></tr><tr><td>C57BL6/J topi</td><td>Jaxon Laboratory</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Caseina dieta</td><td>ENVIGO</td><td>TD.130898</td><td>20% caseina, 0,9% P</td></tr><tr><td>Cotton fioc</td><td>CONSTIX</td><td>SC-9</td><td>Cotton fioc rotondo medio a un'estremità</td></tr><tr><td>Cotton fioc</td><td>CONSTIX</td><td>SC-4</td><td>Piccolo batuffolo di cotone duro, affilato e appuntito a doppia estremità</td></tr><tr><td>Spugne in tessuto non tessuto Curity (2x2)</td><td>Covidien</td><td>9022</td><td></td></tr><tr><td>Forbici a molla Vannas curve</td><td>Fine Science Tools</td><td>15001-08</td><td></td></tr><tr><td>Ecografia Doppler</td><td>VisualSonics</td><td>Vevo 2100</td><td></td></tr><tr><td>Pinze graefe extra fini</td><td>Fine Science Tools</td><td>11150-10</td><td>2 paia</td></tr><tr><td>Occhio lubrificante</td><td>CLCMEDICA</td><td>Optixcare lubrificante</td><td></td>oculare</tr><tr><td>Eparina (5000 U/mL)</td><td>Elenco nazionale dei codici dei farmaci</td><td>63739-953-25</td><td>100 IU/mL</td></tr><tr><td>Sterilizzatore a cordone caldo</td><td>Fine Science Tools</td><td>18000-50</td><td></td></tr><tr><td>Cautere a bassa temperatura</td><td>Bovie</td><td>AA04</td><td></td></tr><tr><td>Rifinitore a penna</td><td>Wahl</td><td>5640-600</td><td></td></tr><tr><td>Guanti</td> <td>chirurgici senza polvereAnsell</td><td>7824PF</td><td></td></tr><tr><td>Portaaghi con manico rotondo</td><td>Fine Science Tools</td><td>12076-12</td><td></td></tr><tr><td>Telo per asciugamani sterile</td><td>Dynarex</td><td>DY440-MI</td><td></td></tr><tr><td>Sterilizzato 0,9% soluzione salina</td><td>Elenco dei codici nazionali dei farmaci</td><td>46066-807-25</td><td></td></tr><tr><td>Pinze dumont diritte</td><td>Strumenti per scienze fini</td><td>11253-20</td><td></td></tr><tr><td>Porta aghi diritti</td><td>Scienze fini Strumenti</td><td>FST 12001-13</td><td></td></tr><tr><td>Forbici a molla Vannas dritte</td><td>Strumenti per scienze fini</td><td>25001-08</td><td></td></tr><tr><td>TrizChLOR4</td><td>Elenco dei codici nazionali dei farmaci</td><td>17033-279-50</td><td></td></tr></tbody></table>

un modello murino di disfunzione della mano correlata all'accesso all'emodialisi

A Murine Model of Hemodialysis Access-Related Hand Dysfunction

La malattia renale cronica è un grave problema di salute pubblica e la prevalenza della malattia renale allo stadio terminale (ESRD) che richiede terapie sostitutive renali croniche come l'emodialisi continua ad aumentare. Il posizionamento della fistola artero-venosa autogena (AVF) rimane un'opzione di accesso vascolare primaria per i pazienti con ESRD. Sfortunatamente, circa la metà dei pazienti in emodialisi sperimenta una disfunzione della mano correlata alla dialisi (ARHD), che va dalla parestesia sottile alla cancrena digitale. In particolare, i driver biologici sottostanti responsabili dell'ARHD sono poco conosciuti e non esiste un modello animale adeguato per chiarire i meccanismi e / o sviluppare nuove terapie per la prevenzione / trattamento dell'ARHD. Qui, descriviamo un nuovo modello murino in cui viene creato un AVF tra l'arteria iliaca comune sinistra e la vena, facilitando così la valutazione della fisiopatologia degli arti. La microchirurgia comprende l'isolamento dei vasi, la venotomia longitudinale, la creazione di anastomosi artero-venosa e la ricostruzione venosa. Gli interventi chirurgici fittizi includono tutti i passaggi critici ad eccezione della creazione di AVF. Il posizionamento dell'AVF iliaca determina alterazioni clinicamente rilevanti nell'emodinamica centrale, ischemia periferica e compromissione delle prestazioni neuromotorie degli arti posteriori. Questo nuovo modello preclinico di AVF fornisce un'utile piattaforma che ricapitola le comuni perturbazioni neuromotorie riportate dai pazienti in emodialisi, consentendo ai ricercatori di studiare i meccanismi della fisiopatologia ARHD e testare potenziali terapie.

Gli animali esposti a una dieta adenina hanno ridotto i tassi di filtrazione glomerulare (controllo: 441,3 ± 54,2 μL/min vs. CKD: 165,1 ± 118,3 μL/min, p &lt; 0,05) e aumentato i livelli sierici di azoto ureico nel sangue (controllo: 20,39 ± 4,2 μL/min vs. CKD: 38,20 ± 10,65 μL/min, p &lt; 0,05) rispetto agli animali che hanno ricevuto chow a base di caseina, confermando la presenza di insufficienza renale prima dell'intervento chirurgico alla fistola artero-venosa.
...

Questo protocollo descrive in dettaglio le fasi chirurgiche della creazione della fistola artero-venosa iliaca comune murina. Abbiamo sviluppato questo modello per studiare la fisiopatologia degli arti correlata all'emodialisi.

Un modello murino di disfunzione della mano correlata all'accesso all'emodialisi

Chronic kidney disease is a major public health problem, and the prevalence of end-stage renal disease (ESRD) requiring chronic renal replacement ...

Questo è l'unico modello animale disponibile per studiare i meccanismi responsabili dell'ischemia della mano correlata all'accesso alla dialisi. Il modello fornisce una solida piattaforma per esaminare la complessa interazione tra uremia e perturbazioni neuromuscolari che derivano dai cambiamenti emodinamici derivanti dalla chirurgia della fistola venosa arteriosa. La disfunzione della mano correlata all'accesso colpisce fino al 60% dei pazienti in emodialisi e può influire gravemente sulla qualità della vita dei pazienti.Questo modello ci aiuta a comprendere la disabilità e testare nuove terapie. A dimostrare la procedura sarà il Dr.Raymond Kim, un ricercatore post-dottorato del nostro laboratorio. Per iniziare, posizionare il topo anestetizzato in posizione supina su un lettino chirurgico coperto da un drappeggio sterile e applicare il lubrificante oculare per proteggere gli occhi dall'asciugatura durante l'intervento chirurgico.Utilizzando un trimmer a penna, radersi i peli addominali per l'operazione e i peli delle gambe per le misurazioni della perfusione postoperatoria, quindi eliminare i capelli dal campo chirurgico. Quindi, fissare gli arti superiori e inferiori con elastici e chiodi. Controllare la profondità dell'anestesia monitorando il riflesso del pizzico della punta e titolare l'anestesia secondo necessità.Eseguire la valutazione del modello respiratorio ogni tre-cinque minuti durante la procedura chirurgica per calibrare il livello di anestesia. Fare una laparotomia della linea mediana dal bordo inferiore del margine sternale alla sinfisi pubica e sezionare il cuscinetto di grasso pubico per ottenere un campo operatorio più ampio. Aprire la celiotomia per accedere al contenuto peritoneale e coprire le viscere con una spugna salina imbevuta di tessuto non tessuto.Successivamente, sezionare attentamente la fascia perivascolare e il tessuto adiposo da circa un centimetro prossimale alla biforcazione aortica, estendendosi fino al livello della biforcazione iliaca sinistra usando una pinza di Dumont dritta e piccoli tamponi di cotone a punta affilata a doppia estremità. Quindi passare la punta della pinza angolata sotto il fascio vascolare iliaco comune sinistro e distribuire delicatamente più volte per mobilizzare i vasi dalla muscolatura retroperitoneale sottostante. Posizionare due suture di seta 4-0 attorno al fascio venoso arterioso iliaco comune isolato e usarli come legature al fascio vascolare.Quindi crea un singolo nodo con ogni cravatta di seta 4-0 e applicali in sequenza, in prossimità e poi distale. Successivamente, utilizzando le corde di sutura di seta 4-0 come maniglie, ruotare il fascio vascolare venoso iliaco sinistro in senso orario e regolare la posizione per localizzare temporaneamente la vena anteriore all'arteria. Fare una venotomia longitudinale di circa un millimetro con una forbice a molla Vannas dritta e lavare delicatamente il sangue residuo dal lume venoso con lo 0,9% di soluzione salina.Quindi, posizionare una sutura di nylon 10-0 implicante attraverso la parete posteriore della vena. Successivamente, afferrare le estremità di sutura implicate e metterle sotto una leggera tensione per spostare la parete anteriore dalla parete posteriore dell'arteria iliaca. Quindi, eseguire un'incisione ellittica di una dimensione di circa 1,0 per 0,3 millimetri utilizzando forbici a molla Vannas curve, rimuovendo le pareti aderenti sia dell'arteria iliaca che della vena.Lavare delicatamente il sangue residuo del lume arterioso esposto con soluzione salina allo 0,9% ed eparinizzato. Dopo la creazione della fistola venosa arteriosa, riparare la venotomia iniziale della parete anteriore utilizzando da due a tre suture di nylon 10-0 in modo interrotto. Successivamente, ripristinare il fascio vascolare al suo orientamento anatomico originale e posizionare un piccolo pezzo di spugna di gelatina assorbibile imbevuta di soluzione salina adiacente alla venotomia riparata per facilitare l'emostasi.Quindi, allentare le legature del morsetto incrociato a nodo singolo 4-0 in sequenza da distale a prossimale, monitorando attentamente il sito di venotomia per un eccessivo sanguinamento. Strofinare delicatamente il fascio vascolare con piccoli tamponi di cotone a doppia estremità e affilati che facilitano ulteriormente il ripristino del flusso sanguigno. Successivamente, confermare il successo tecnico dell'operazione utilizzando la visualizzazione del sangue ossigenato rosso vivo pulsatile che entra nella vena iliaca e si mescola con il sangue venoso scuro che ritorna dall'arto posteriore.Iniettare soluzione salina eparinizzata nella vena cava inferiore per l'anticoagulazione sistemica per migliorare gli esiti della pervietà della fistola venosa arteriosa e ispezionare nuovamente il sito chirurgico per l'emostasi dopo l'iniezione di soluzione salina eparinizzata. Se non ci sono problemi di sanguinamento, chiudere la fascia mediana e quindi l'incisione cutanea con suture PGA 5-0 assorbibili in modo corrente. L'ecografia Doppler è stata utilizzata per convalidare la pervietà della fistola venosa arteriosa.Il Color Doppler ha rivelato un flusso turbolento nel sito della fistola e l'allargamento spettrale pulsatile è stato visualizzato sulla valutazione Doppler a onde pulsate. Se la fistola è pervio, l'aorta ha un picco elevato di velocità sistolica e diastolica finale, mentre la vena cava inferiore sviluppa pulsatilità con elevata velocità di picco. La dilatazione dei vasi sia nell'aorta che nella vena cava inferiore è evidente con misurazioni seriali pre e postoperatorie.Le misurazioni ecografiche Doppler in modalità B e onde di impulso dopo l'intervento chirurgico hanno rivelato la dilatazione dei vasi in entrata e in uscita e un aumento della velocità sistolica di picco rispetto agli animali fittizi. La valutazione laser doppler degli arti posteriori ha mostrato che i deficit di perfusione POD sinistra sono pari a circa il 20% dell'arto controlaterale dopo l'intervento chirurgico, con recupero graduale nel tempo. Il deficit di perfusione del muscolo tibiale anteriore è stato di circa il 60% dopo l'intervento chirurgico, con un recupero simile.La funzione neuromotoria degli arti posteriori è stata quantificata tramite test di forza di presa e analisi del modello di andatura del tapis roulant, che sono stati eseguiti in sequenza durante il periodo di recupero. La forza di presa unilaterale prevista è di circa il 50% dell'arto controlaterale nel quarto giorno postoperatorio con recupero graduale. Ogni fase della microchirurgia deve essere eseguita con particolare attenzione per evitare potenziali traumi nervosi o vascolari che possono causare cambiamenti sostanziali sia nell'emodinamica che nella patologia degli arti.Dopo la caratterizzazione del modello, è stato possibile esplorare una moltitudine di studi che esaminano i driver biologici della disfunzione neuromuscolare derivante dal posizionamento della fistola artero-venosa.

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La procedura chirurgica per l'induzione di ischemia degli arti posteriori unilaterale è dimostrato, con la conferma di ischemia da imaging laser Doppler perfusione.

Modello murino di ischemia degli arti posteriori

L'obiettivo è di produrre una fistola artero che è semplice e riproducibile. Questo metodo non fa uso di suture o adesivi colla. Pertanto i campioni possono essere utilizzati con la minor quantità di materiali estranei per l'analisi.

Aspetti tecnici della fistola aorto-cavale mouse

Qui presentiamo un modello murino di insufficienza della fistola arterovenosa (AVF) in cui è incorporata una configurazione anastomotica clinicamente rilevante. Questo modello può essere utilizzato per studiare la fisiopatologia e per testare possibili interventi terapeutici.

A Novel Modello murino di fistola artero-venosa Fallimento: la procedura chirurgica in dettaglio

Questo manoscritto fornisce una procedura chirurgica in due passaggi dettagliati per eseguire nefrectomia parzialeth da mouse 5/6 (PNx) con legatura di palo. Quattro settimane dopo la chirurgia, in confronto ai topi falsità-azionati, i topi di PNx sviluppato fibrosi cardiaca, insufficienza renale, l'anemia, ipertrofia cardiaca e ridotta funzione sistolica e diastolica del cuore.

Un Mouse 5/6th Nephrectomy modello che induce cardiomiopatia uremica sperimentale

Questo articolo viene illustrato il metodo per l'inserimento chirurgico in topi di un catetere intraperitoneale collegata a una porta di accesso che è posizionata nella parte posteriore dell'animale. Inoltre, spiega la procedura per 5/6 di nefrectomia assomigliare lo stato uremico di pazienti del Palladio.

Tecniche chirurgiche per la disposizione del catetere e 5/6 di nefrectomia nei modelli murini di dialisi peritoneale

Una fistola aortocaval è stata creata perforando l'aorta infra-renale murina attraverso entrambe le pareti nella vena cava inferiore ed è stata seguita dalla creazione di una stenosi nel suo deflusso attraverso la legatura parziale della vena cava inferiore. Questo modello riproducibile può essere utilizzato per studiare la stenosi venosa centrale.

Modello Murine della Stenosi Venoso Centrale utilizzando Aortocaval Fistula con una stenosi di flusso

Questo articolo descrive le modifiche di una procedura per impiantare un catetere per dialisi peritoneale in un modello murino per evitare importanti problemi tecnici osservati con le tecniche convenzionali.

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Questo protocollo presenta la creazione e la conferma di un modello postnatale di sovraccarico del volume ventricolare destro (VO) in topi con fistola arterovenosa addominale (AVF), che può essere applicato per studiare come il VO contribuisce allo sviluppo cardiaco postnatale.

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