Fonte e via di contaminazione da alcaloidi pirrolizidinici nei campioni di tè

Lo sviluppo di un metodo di rilevamento di 15 alcaloidi pirrolizidinici in erbe infestanti, suolo, foglie di tè fresco e campioni di tè secco può fornire supporto tecnico per esplorare la fonte di contaminazione da alcaloidi pirrolizidinici nel tè. Rispetto all'estrazione in fase solida, il metodo adsorbente per il campione di terreno può far risparmiare tempo, costi inferiori e migliori recuperi per l'analisi degli alcaloidi pirrolizidinici. Per iniziare l'estrazione sui prodotti di tè essiccati preriscaldati, foglie di tè fresco o erbe infestanti, pesare un grammo di un campione in una provetta da centrifuga da 50 millilitri e aggiungere 10 millilitri di soluzione di acido solforico da 0,1 moli per litro nel tubo.

Successivamente, vortice il campione per due minuti se deve essere analizzato utilizzando l'estrazione in fase solida, mentre per un minuto se lo stesso deve essere analizzato utilizzando la pulizia adsorbente. Quindi sottoporre il campione all'estrazione ad ultrasuoni per 15 minuti, seguita da centrifugazione a 9.390 G per 10 minuti a temperatura ambiente. Quindi, utilizzando un contagocce con punta in plastica, trasferire la soluzione di surnatante in una provetta da centrifuga da 50 millilitri.

Dopo aver eseguito l'estrazione due volte, combinare i surnatanti nel tubo. Per iniziare l'estrazione sul terreno preparato, pesare un grammo di un campione in una provetta da centrifuga da 50 millilitri. Aggiungere 0,1 millilitri di 0,1 moli per litro di soluzione di citrato trisodico per regolare il pH del terreno a 6,0 e lasciare riposare il campione per due minuti.

Quindi aggiungere 10 millilitri di 0,1 moli per litro di soluzione di metanolo acido solforico nel tubo e vortice il campione per due minuti, seguito da agitazione per 30 minuti. Quindi, eseguire l'estrazione ad ultrasuoni per 30 minuti come dimostrato in precedenza. Quindi centrifugare il campione a 9.390 G per 10 minuti.

E usando un contagocce con punta in plastica, trasferire il surnatante in un tubo da centrifuga da 50 millilitri. Dopo aver eseguito l'estrazione due volte, combinare i surnatanti . Attivare l'estrazione in fase solida o cartuccia SPE con cinque millilitri di metanolo seguiti da cinque millilitri di acqua deionizzata.

Dopo l'attivazione, aggiungere 10 millilitri di surnatante dall'estrazione del campione alla cartuccia pre-attivata. Dopo che il livello della soluzione del campione ha raggiunto lo strato superiore delle cartucce, eluire la matrice del campione con cinque millilitri di soluzione di acido formico all'1%, seguita da cinque millilitri di metanolo, ed eliminare gli eluenti. Quindi, eluire gli analiti con cinque millilitri di metanolo contenente lo 0,5% di acqua ammoniaca.

Filtrare l'eluente attraverso un filtro a membrana da 0,22 micron per analizzarlo mediante UPLC-MS/MS. Per eseguire la pulizia del campione utilizzando adsorbente, preparare una provetta da centrifuga da 10 millilitri con l'adsorbente che compromette GCB, PSA e C18 in rapporto da 10 a 20 a 15 milligrammi. Quindi aggiungere due millilitri del surnatante ottenuto dopo il trattamento del campione.

Quindi, vortice il campione e la miscela adsorbente per un minuto e centrifugare a 9, 390 G per otto minuti a temperatura ambiente. Filtrare un millilitro del surnatante risultante attraverso un filtro a membrana da 0,22 micron in un flaconcino campione prima di analizzarlo con UPLC-MS/MS. Nello studio, è stata ottenuta una percentuale più elevata di recupero di 15 alcaloidi pirrolizidinici da foglie di tè fresco, campioni di tè essiccati ed erba utilizzando la tecnica di purificazione adsorbente rispetto al metodo della cartuccia SPE.

I recuperi degli alcaloidi nel suolo utilizzando la purificazione adsorbente sono stati dal 79 al 111% Nelle foglie di tè fresco raccolte dai cinque siti di campionamento, è stato rilevato un contenuto più elevato di ossido di N intermedio rispetto alla senecionina. Senecionine non è stata rilevata nelle foglie mature provenienti dai siti di campionamento uno e due. Tra gli 11 alcaloidi pirrolizidinici, solo l'N-ossido intermedio è stato rilevato nel terreno, mentre la senecionina e l'N-ossido intermedio sono stati rilevati in diverse parti delle piante di tè.

Inoltre, il contenuto di N-ossido intermedio in una gemma con due foglie è risultato essere il più alto. Mentre si tenta di farlo prima, la cosa più importante è aggiungere 0,1 millilitri di 0,1 moli per litro di soluzione di citrato trisodico per regolare il pH del terreno a 6,0. Questo metodo può essere applicato all'analisi degli alcaloidi in altre piante commestibili e fornisce anche una tecnica naturale per esplorare la fonte di alcaloidi in essi.