Name: Fonte e via di contaminazione da alcaloidi pirrolizidinici nei campioni di tè (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-09-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 4 s
Description: Scopri un metodo di estrazione per rilevare alcaloidi pirrolizidinici nel tè, nel suolo e nelle erbe infestanti. La tecnica con adsorbente offre maggiore efficienza e recuperi migliori rispetto all'estrazione in fase solida per analisi di sicurezza alimentare.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Questo lavoro è stato sostenuto dalla National Natural Scientific Foundation of China (32102244), dal National Agricultural Products Quality and Safety and Risk Assessment Project (GJFP2021001), dalla Natural Scientific Foundation of Anhui Province (19252002) e dall'USDA (HAW05020H).

Per il presente studio sono state raccolte le seguenti specie di piante infestanti: Ludwigia prostrata Roxb., Murdannia triquetra (Wall. ex C. B. Clarke) Bruckn., Ageratum conyzoides L., Chenopodium ambrosioides, Trachelospermum jasminoide (L.) Lem., Ageratum conyzoides L., Emilia sonchifolia (L.) DC, Ageratum conyzoides L. e Crassocephalum crepidioides (Benth.) S. Moore. Le foglie di tè fresco sono state raccolte dalla varietà di alberi di tè Longjing 43 # e i campioni di tè essiccato erano tè disponibili in commercio elaborati secondo il processo di produzione del tè verde (vedi Tabella dei materiali).
1. Raccolta dei campioni
<ol><li>Raccogli 40 campioni reali.<ol><li>Raccogli 10 erbacce, 10 terreni e 10 foglie di tè fresco in modo casuale da più giardini di tè. NOTA: Per il presente studio, il terreno è stato campionato ad una profondità di 20 cm con una quantità di campione di 200 g.</li>
		<li>Raccogli casualmente 10 prodotti a base di tè essiccati (250 g) da un supermercato.</li>
	</ol></li>
	<li>Raccogli campioni di erbe infestanti, terra e foglie di tè fresco per studiare la fonte di contaminazione delle PA nel tè.<ol><li>Impostare cinque punti di campionamento nella stessa piantagione di tè, con tre repliche in ogni punto.</li>
		<li>Raccogliere campioni di erba Ageratum conyzoides L. con il più alto contenuto di PA che si trova comunemente nei giardini del tè. NOTA: La quantità del campione era di 250 g per il presente studio.</li>
		<li>Raccogli i campioni di terreno. NOTA: I campioni di terreno erano terreno rizosferico di A. conyzoides ad una profondità di 20 cm con una quantità di campione di 200 g.</li>
		<li>Raccogli le foglie di tè fresche da diverse parti delle piante del tè, tra cui una gemma con due foglie, una gemma con tre foglie, una gemma con quattro foglie e foglie mature. NOTA: La quantità del campione era di 250 g.</li>
	</ol></li>
</ol>2. Trattamento del campione
<ol><li>Pretrattare i campioni seguendo i passaggi seguenti.<ol><li>Macinare il tè essiccato e i campioni di terreno con un macinino, passare i campioni polverizzati attraverso un setaccio a 200 maglie e conservarli a -20 °C. NOTA: Il tè essiccato era un prodotto di tè disponibile in commercio (vedi Tabella dei materiali), quindi è stato direttamente frantumato e setacciato per la conservazione. I campioni di terreno (200 g) sono stati posti in un luogo ventilato al buio per asciugare all'aria per circa una settimana.</li>
		<li>Omogeneizzare l'erba e le foglie di tè fresco con un omogeneizzatore e conservarle a -20 °C.</li>
	</ol></li>
	<li>Eseguire il trattamento a campione dei prodotti a base di tè essiccati, foglie di tè fresco ed erbe infestanti.<ol><li>Pesare 1,00 g di ciascun campione (prodotti a base di tè essiccati, foglie di tè fresco ed erbe infestanti) e metterlo in una provette da centrifuga da 50 ml.</li>
		<li>Aggiungere 10 mL di soluzione di acido solforico 0,1 mol/L e vortice per 2 minuti per l'estrazione in fase solida (utilizzando cartuccia SPE, vedere Tabella dei materiali) e 1 min per la purificazione adsorbente. Eseguire l'estrazione ad ultrasuoni23 per 15 minuti, quindi centrifugare per 10 minuti ad una velocità di 9.390 x g a temperatura ambiente. NOTA: la potenza dell'oscillatore ad ultrasuoni era di 290 W, la frequenza di oscillazione era di 35 kHz e la temperatura era impostata su 30 °C.</li>
		<li>Trasferire il surnatante in una provetta da centrifuga da 50 ml con un contagocce in plastica.</li>
		<li>Seguire i passaggi precedenti per ripetere l'estrazione una volta. Combinare i due surnatanti<ol><li>Attivare le cartucce SPE con 5 mL di metanolo e 5 mL di acqua deionizzata. Aggiungere 10 mL di surnatante alla cartuccia preattivata ed eseguire la pulizia del campione.</li>
			<li>Dopo che il livello della soluzione del campione ha raggiunto lo strato superiore delle cartucce, eluire gli analiti con 5 ml di soluzione di acido formico all'1% e quindi 5 ml di metanolo. Scartare l'eluato.</li>
			<li>Eluire con 5 mL di metanolo (contenente lo 0,5% di acqua ammoniaca), filtrare l'eluato attraverso un filtro a membrana da 0,22 μm e analizzare mediante UPLC-MS/MS (vedere Tabella dei materiali).</li>
		</ol></li>
		<li>Eseguire la pulizia del campione utilizzando adsorbenti.<ol><li>Prelevare 2 mL di surnatante (fase 2.2.4) in una provetta da centrifuga da 10 mL riempita con gli adsorbenti di GCB:PSA:C18 (10 mg:20 mg:15 mg; vedere Tabella dei materiali), vortice per 1 minuto e centrifugare a 9.390 x g per 8 minuti a temperatura ambiente.</li>
			<li>Far passare 1 mL di surnatante attraverso un filtro a membrana da 0,22 μm prima dell'analisi mediante UPLC-MS/MS.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
	<li>Eseguire il trattamento dei campioni di terreno.<ol><li>Pesare un campione di terreno di 1,00 g. Metterlo in una provetta da centrifuga da 50 mL e aggiungere 0,1 mL di soluzione di citrato trisodico 0,1 mol/L (vedere Tabella dei materiali) per regolare il valore del pH del terreno a 6,0.</li>
		<li>Lasciare riposare per 2 minuti, quindi aggiungere 10 ml di soluzione di metanolo acido solforico 0,1 mol / L, vortice per 2 minuti e agitare per 30 minuti, quindi eseguire l'estrazione ad ultrasuoni per 30 minuti.</li>
		<li>Centrifugare a 9.390 x g per 10 minuti e trasferire il surnatante in una provetta da centrifuga da 50 ml con un contagocce di plastica.</li>
		<li>Seguire i passaggi precedenti per ripetere l'estrazione e combinare il surnatante due volte. NOTA: il metodo di purificazione era lo stesso dei punti 2.2.5.1 e 2.2.5.2.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Analisi strumentale
<ol><li>Rilevare i 15 PA in campioni di tè essiccato, foglie di tè fresco, erba e terreno (campioni della fase 2) utilizzando un sistema UPLC-MS/MS disponibile in commercio (2,1 mm x 100 mm, 1,8 μm) (vedere Tabella dei materiali).</li>
	<li>Impostare la temperatura della colonna a 40 °C, la portata a 0,250 ml/min e il volume di iniezione a 3 μL.</li>
	<li>Impostare la fase mobile A: metanolo (contenente 0,1% di acido formico + 1 mmol/L di formiato di ammonio) e la fase mobile B: acqua (contenente 0,1% di acido formico + 1 mmol/L di formiato di ammonio).</li>
	<li>Impostare una procedura di eluizione del gradiente: 10% A da 0,0 min a 0,25 min, 10%-30% A da 0,25 min a 6,0 min, 30%-40% A da 6,0 min a 9,0 min, 40%-98% A da 9,0 min a 9,01 min che si è tenuto per 1,9 min, e 98%-100% A da 11,0 min a 11,1 min che si è tenuto per 2,9 min.</li>
	<li>Impostare i parametri dello spettrometro di massa: modalità di ionizzazione, sorgente ionica positiva elettrospray (ESI+); pressione atomizzatore, 7,0 bar; tensione capillare, 4,0 kV; flusso di controsoffiaggio del foro di cono, 150 L/h; flusso gas solvente, 800 L/h; temperatura di dissolvenza, 400 °C; flusso di gas d'impatto, 0,25 ml/min.</li>
</ol>

<ol><li>Schramm, S., Kohler, N., Rozhon, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pyrrolizidine+alkaloids%3A+Biosynthesis%2C+biological+activities+and+occurrence+in+crop+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Pyrrolizidine alkaloids: Biosynthesis, biological activities and occurrence in crop plants.</a> Molecules. 24 (3), 498(2019).</li>
<li>EFSA Panel on Contaminants in the Food Chain (CONTAM). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scientific+opinion+on+pyrrolizidine+alkaloids+in+food+and+feed%5BTitle%5D)+AND+%22EFSA+Journal%22%5BJournal%5D)">Scientific opinion on pyrrolizidine alkaloids in food and feed.</a> EFSA Journal. 9 (11), 134(2011).</li>
<li>Ma, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+and+regulation+of+hepatotoxic+pyrrolizidine+alkaloids+in+food%3A+A+critical+review+of+recent+research%5BTitle%5D)+AND+%22Food+and+Chemical+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Determination and regulation of hepatotoxic pyrrolizidine alkaloids in food: A critical review of recent research.</a> Food and Chemical Toxicology. 119, 50-60 (2018).</li>
<li>Keuth, O., Humpf, H. U., Fürst, P. Pyrrolizidine Alkaloids: Analytical Challenges. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKeuth%2C+O+%22Encyclopedia+of+Food+Chemistry%22">Encyclopedia of Food Chemistry</a>. Melton, L., Shahidi, F., Varelis, P. 1, Elsevier. 348-355 (2019).</li>
<li>Huang, D. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pyrrolizidine+alkaloids+and+its+source+analysis+in+tea%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Food+Safety+%26+Quality%22%5BJournal%5D)">Pyrrolizidine alkaloids and its source analysis in tea.</a> Journal of Food Safety & Quality. 9 (2), 229-236 (2018).</li>
<li>Liang, A. H., Ye, Z. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((General+situation+of+the+toxicity+researches+on+Senecio%5BTitle%5D)+AND+%22China+Journal+of+Chinese+Materia+Medica%22%5BJournal%5D)">General situation of the toxicity researches on Senecio.</a> China Journal of Chinese Materia Medica. 31 (2), 93-97 (2006).</li>
<li>Li, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+study+of+pyrrolizidine+alkaloid-induced+hepatic+sinusoidal+obstruction+syndrome+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Research+in+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Proteomic study of pyrrolizidine alkaloid-induced hepatic sinusoidal obstruction syndrome in rats.</a> Chemical Research in Toxicology. 28 (9), 1715-1727 (2015).</li>
<li>Jia, Z. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Catalytic+enantioselective+synthesis+of+a+pyrrolizidine-alkaloid-inspired+compound+collection+with+antiplasmodial+activity%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Organic+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Catalytic enantioselective synthesis of a pyrrolizidine-alkaloid-inspired compound collection with antiplasmodial activity.</a> The Journal of Organic Chemistry. 83, 7033-7041 (2018).</li>
<li>Yang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+evidence+of+pyrrolizidine+alkaloid+N-oxide-induced+hepatic+sinusoidal+obstruction+syndrome+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Toxicology%22%5BJournal%5D)">First evidence of pyrrolizidine alkaloid N-oxide-induced hepatic sinusoidal obstruction syndrome in humans.</a> Archives of Toxicology. 91 (12), 3913-3925 (2017).</li>
<li>Chen, Z., Huo, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+veno-occlusive+disease+associated+with+toxicity+of+pyrrolizidine+alkaloids+in+herbal+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22Netherlands+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Hepatic veno-occlusive disease associated with toxicity of pyrrolizidine alkaloids in herbal preparations.</a> Netherlands Journal of Medicine. 68 (6), 252-260 (2010).</li>
<li>Mattocks, A. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMattocks%2C+AR+%22Chemistry+and+Toxicology+of+Pyrrolizidine+Alkaloid%22">Chemistry and Toxicology of Pyrrolizidine Alkaloid</a>. , Academic Press. London, UK. (1986).</li>
<li>Picron, J. F., Herman, M., Van Hoeck, E., Goscinny, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analytical+strategies+for+the+determination+of+pyrrolizidine+alkaloids+in+plant+based+food+and+examination+of+the+transfer+rate+during+the+infusion+process%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Analytical strategies for the determination of pyrrolizidine alkaloids in plant based food and examination of the transfer rate during the infusion process.</a> Food Chemistry. 266, 514-523 (2018).</li>
<li>Kowalczyk, E., Kwiatek, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+the+sum+parameter+method+for+the+determination+of+pyrrolizidine+alkaloids+in+teas%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Additives+%26+Contaminants%3A+Part+A%22%5BJournal%5D)">Application of the sum parameter method for the determination of pyrrolizidine alkaloids in teas.</a> Food Additives & Contaminants: Part A. 37 (4), 622-633 (2020).</li>
<li>EFSA Panel on Contaminants in the Food Chain (CONTAM). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risks+for+human+health+related+to+the+presence+of+pyrrolizidine+alkaloids+in+honey%2C+tea%2C+herbal+infusions+and+food+supplements%5BTitle%5D)+AND+%22EFSA+Journal%22%5BJournal%5D)">Risks for human health related to the presence of pyrrolizidine alkaloids in honey, tea, herbal infusions and food supplements.</a> EFSA Journal. 15 (7), 04908(2017).</li>
<li>Han, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pyrrolizidine+alkaloids+in+tea%3A+A+review+of+analytical+methods%2C+contamination+levels+and+health+risk%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Science%22%5BJournal%5D)">Pyrrolizidine alkaloids in tea: A review of analytical methods, contamination levels and health risk.</a> Food Science. 42 (17), 255-266 (2021).</li>
<li>Nowak, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interspecific+transfer+of+pyrrolizidine+alkaloids%3A+An+unconsidered+source+of+contaminations+of+phytopharmaceuticals+and+plant+derived+commodities%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Interspecific transfer of pyrrolizidine alkaloids: An unconsidered source of contaminations of phytopharmaceuticals and plant derived commodities.</a> Food Chemistry. 213, 163-168 (2016).</li>
<li>Selmar, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transfer+of+pyrrolizidine+alkaloids+between+living+plants%3A+A+disregarded+source+of+contaminations%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Pollution%22%5BJournal%5D)">Transfer of pyrrolizidine alkaloids between living plants: A disregarded source of contaminations.</a> Environmental Pollution. 248, 456-461 (2019).</li>
<li>Izcara, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Miniaturized+and+modified+QuEChERS+method+with+mesostructured+silica+as+clean-up+sorbent+for+pyrrolizidine+alkaloids+determination+in+aromatic+herbs%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Miniaturized and modified QuEChERS method with mesostructured silica as clean-up sorbent for pyrrolizidine alkaloids determination in aromatic herbs.</a> Food Chemistry. 380, 132189(2022).</li>
<li>Izcara, S., Casado, N., Morante-Zarcero, S., Sierra, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+miniaturized+QuEChERS+method+combined+with+ultrahigh+liquid+chromatography+coupled+to+tandem+mass+spectrometry+for+the+analysis+of+pyrrolizidine+alkaloids+in+oregano+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Foods%22%5BJournal%5D)">A miniaturized QuEChERS method combined with ultrahigh liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry for the analysis of pyrrolizidine alkaloids in oregano samples.</a> Foods. 9 (9), 1319(2020).</li>
<li>Van Wyk, B. E., Stander, M. A., Long, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senecio+angustifolius+as+the+major+source+of+pyrrolizidine+alkaloid+contamination+of+rooibos+tea+%28Aspalathus+linearis%29%5BTitle%5D)+AND+%22South+African+Journal+of+Botany%22%5BJournal%5D)">Senecio angustifolius as the major source of pyrrolizidine alkaloid contamination of rooibos tea (Aspalathus linearis).</a> South African Journal of Botany. 110, 124-131 (2017).</li>
<li>Johnson, A. E., Molyneux, R. J., Merrill, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemistry+of+toxic+range+plants.+Variation+in+pyrrolizidine+alkaloid+content+of+Senecio%2C+Amsinckia%2C+and+Crotalaria+species%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Chemistry of toxic range plants. Variation in pyrrolizidine alkaloid content of Senecio, Amsinckia, and Crotalaria species.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 33 (1), 50-55 (1985).</li>
<li>Vrieling, K., de Vos, H., van Wijk, C. A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+analysis+of+the+concentrations+of+pyrrolizidine+alkaloids+in+Senecio+jacobaea%5BTitle%5D)+AND+%22Phytochemistry%22%5BJournal%5D)">Genetic analysis of the concentrations of pyrrolizidine alkaloids in Senecio jacobaea.</a> Phytochemistry. 32 (5), 1141-1144 (1993).</li>
<li>Han, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development%2C+optimization%2C+validation+and+application+of+ultra+high+performance+liquid+chromatography+tandem+mass+spectrometry+for+the+analysis+of+pyrrolizidine+alkaloids+and+pyrrolizidine+alkaloid+N-oxides+in+teas+and+weeds%5BTitle%5D)+AND+%22Food+control%22%5BJournal%5D)">Development, optimization, validation and application of ultra high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry for the analysis of pyrrolizidine alkaloids and pyrrolizidine alkaloid N-oxides in teas and weeds.</a> Food control. 132, 108518(2022).</li>
<li>Bodi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+pyrrolizidine+alkaloids+in+tea%2C+herbal+drugs+and+honey%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Additives+%26+Contaminants%3A+Part+A%22%5BJournal%5D)">Determination of pyrrolizidine alkaloids in tea, herbal drugs and honey.</a> Food Additives & Contaminants: Part A. 31 (11), 1886-1895 (2014).</li>
<li>European Union Commission. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Commission+Regulation+%28EU%29+2020%2F2040+of+11+December+2020+amending+Regulation+%28EC%29+No+1881%2F2006+as+regards+maximum+levels+of+pyrrolizidine+alkaloids+in+certain+foodstuffs%5BTitle%5D)+AND+%22Official+Journal+of+the+European+Union%22%5BJournal%5D)">Commission Regulation (EU) 2020/2040 of 11 December 2020 amending Regulation (EC) No 1881/2006 as regards maximum levels of pyrrolizidine alkaloids in certain foodstuffs.</a> Official Journal of the European Union. 14 (12), 1-4 (2020).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Il presente lavoro è stato progettato per sviluppare un metodo efficace e sensibile per esplorare le vie di contaminazione e le fonti di PA nei campioni di tè, nonché la distribuzione di PA in diverse parti delle piante di tè. Tuttavia, in questo studio, solo 15 PA sono stati separati con successo sulla colonna cromatografica, che è un numero molto piccolo rispetto al gran numero di alcaloidi nelle specie vegetali 3,4. Ciò non era solo correlato alle proprietà di...

Come metaboliti secondari, gli alcaloidi pirrolizidinici (PA) proteggono le piante da erbivori, insetti e agenti patogeni 1,2. Fino ad ora, oltre 660 PA e ossidi di PA-N (PANO) con strutture diverse sono stati trovati in più di 6.000 specie di piante in tutto il mondo 3,4. Le piante produttrici di PA si trovano principalmente nelle famiglie Asteraceae, Boraginaceae, Fabaceae e Apocynaceae 5,6. I PA sono facilmente ossidati in alcaloidi deidropirrolizidinici instabili, che hanno una forte elettrofilicità e possono attaccare nucleofili come DNA e proteine, con conseguente necrosi delle cellule del fegato, occlusioni venose, cirrosi, ascite e altri sintomi 7,8. Il principale organo bersaglio della tossicità PA è il fegato. Le PA possono anche causare tossicità polmonare, renale e di altri organi e tossicità mutagena, cancerogena e dello sviluppo 9,10.
Casi di avvelenamento umano e animale sono stati segnalati in molti paesi dall'ingestione di erbe tradizionali, integratori o tè contenenti PA o dalla contaminazione indiretta di alimenti come latte, miele o carne (tossici dall'ingestione di pascoli contenenti PA)11,12,13. Le conclusioni dell'Autorità europea per la sicurezza alimentare (EFSA) indicano che sostanze come il tè (alle erbe) sono un'importante fonte di esposizione umana agli AP/PANO14. I campioni di tè non producono PA, mentre le piante produttrici di PA si trovano comunemente nei giardini del tè (ad esempio, Emilia sonchifolia, Senecio angulatus e Ageratum conyzoides)15. In precedenza si sospettava che il tè potesse essere contaminato da PA provenienti dai loro impianti di produzione durante la raccolta e la lavorazione. Tuttavia, i PA sono stati rilevati anche in alcune foglie di tè raccolte a mano (cioè nessun impianto che produce PA), suggerendo che ci devono essere altre vie o fonti di contaminazione16. È stato condotto un esperimento di co-coltivazione di erba (Senecio jacobaea) con melissa (Melissa officinalis), menta piperita (Mentha piperita), prezzemolo (Petroselinum crispum), camomilla (Matricaria recutita) e nasturzio (Tropaeolum majus) e i risultati hanno mostrato che le PA sono state rilevate in tutte queste piante17. È stato verificato che le PA sono effettivamente trasferite e scambiate tra piante viventi attraverso il suolo18,19. Van Wyk et al.20 hanno scoperto che il tè rooibos (Aspalathus linearis) era gravemente contaminato in siti ricchi di erba e conteneva PA dello stesso tipo e proporzione. Tuttavia, non sono stati rilevati PA nel tè rooibos in siti privi di erbacce.
Attualmente, la spettrometria di massa tandem per cromatografia liquida ad altissime prestazioni (UPLC-MS/MS) ad alta selettività e sensibilità è stata ampiamente utilizzata nell'analisi qualitativa e quantitativa delle PA nei prodotti agricoli e alimentari21,22. Il metodo di trattamento del campione è solitamente costituito dall'estrazione in fase solida (SPE) o dalla pulizia QuEChERS (Quick Easy Cheap Effective Rugged Safe) di estratti di matrici alimentari complesse, che possono ottenere la massima sensibilità possibile12,19. Tuttavia, mancano ancora solidi metodi analitici che consentano il rilevamento e la quantificazione di PA in matrici complesse come suolo, erbe infestanti e foglie di tè fresco.
Questo studio ha analizzato 15 PA in campioni di tè essiccato, foglie di tè fresco, erbe infestanti e campioni di terreno rizosferico con UPLC-MS / MS combinato con un metodo di purificazione adsorbente. Inoltre, 15 campioni di terreno rizosferico accoppiati di erba e 60 campioni di foglie di tè fresco sono stati raccolti da cinque siti di campionamento nel giardino del tè Jinzhai nella provincia di Anhui, in Cina, e sono stati analizzati per 15 PA. Questi risultati possono fornire un metodo di indagine e alcune informazioni sulla fonte e il percorso dei PA (contaminazione) nei campioni di tè per garantire la qualità e la sicurezza del tè.

<table><tbody><tr><td>Acetonitrile (99,9%)</td><td>Tedia Company, Inc.</td><td>21115197</td><td>CAS No: 75-05-8</td></tr><tr><td>Ammoniaca (25%-28%)</td><td>Wuxi Zhanwang Chemical Reagent Co., Ltd.</td><td>181210</td><td>CAS No: 1336-21-6</td></tr><tr><td>Formiato di ammonio (97,0%)</td> <td>Anpel Laboratory Technoiogies (shanghai)</td><td>G0860050</td><td>CAS No: 540-69-2</td></tr><tr><td>Carbon-GCB</td><td>CNW</td><td>B7760030</td><td>120-400 MESH, 10g. per scatola</td></tr><tr><td>Centrifuga Z 36 HK</td><td>HERMLE</td><td>Z36HK</td><td>30000&nbsp; giri/min (min:10 giri/min), Dimensioni (L x A x P):&nbsp; 71,5 cm&volte; 42 cm & tempi; 51 cm</td></tr><tr><td>Prodotto da tè disponibile in commercio</td><td>Lvming, Qingshan, Luyuchun, Changling, Huixing, Wuyunjian, Heshengchun</td><td>tè sfuso</td><td>Tè verde</td></tr><tr><td>Europine N-oxid (EuNO) (98,0%)</td><td>BioCrick</td><td>323256</td><td>Numero CAS:65582-53-8</td></tr><tr><td>Europine (Eu) (98,0%)</td><td>BioCrick</td><td>98222</td><td>Numero CAS:570-19-4</td></tr><tr><td>Formiato (98,0%)</td><td>Aladdin</td><td>E2022005</td><td>Numero CAS:64-18-6</td></tr><tr><td>HC-C18</td><td>CNW</td><td>D2110060</td><td>40-63 &mu; m,100g.per scatola</td></tr><tr><td>Eliotrino (He) (98,0%)</td><td>BioCrick</td><td>906426</td><td>CAS No: 303-33-3</td></tr><tr><td>Eliotrine-N-ossido (HeNO) (98,0%)</td><td>BioCrick</td><td>22581</td><td>CAS No: 6209-65-0</td></tr><tr><td>Centrifuga ad alta velocità TG16-WS</td><td>cence</td><td>203158000</td><td>Max: 16000 giri/min, 330 &volte; 390 &volte; 300 mm (L &volte; W &volte; H), Capacità: 6 &volte; 50 mL</td></tr><tr><td>di colonna HSS T3</td><td>Waters</td><td>186004976</td><td>ACQUITY UPLC HSS T3 (2,1 &volte; 100 mm 1,8 &mu; m)</td></tr><tr><td>Intermedino (Im) (98,0%)</td><td>BioCrick</td><td>114843</td><td>N. CAS: 10285-06-0</td></tr><tr><td>Intermedino-N-ossido (ImNO) (98,0%)</td><td>BioCrick</td><td>340066</td><td>N. CAS: 95462-14-9</td></tr><tr><td>Giacobina (Jb) (98,0%)</td><td>BioCrick</td><td>132282048</td><td>N. CAS: 6870-67-3</td></tr><tr><td>Giacobina-N-ossido (JbNO) (98,0%)</td><td>ChemFaces</td><td>CFN00461</td><td>N. CAS: 38710-25-7</td></tr><tr><td>Alcool metilico (99,9%)</td><td>Azienda Tedia, Inc.</td><td>21115100</td><td>CAS No: 67-56-1</td></tr><tr><td>PSA</td><td>Agela</td><td>P19-00833</td><td>40-60 &mu; m, 60 & Aring; 100g.per scatola</td></tr><tr><td>Retrorsina (Re) (98.0%)</td><td>BioCrick</td><td>5281743</td><td>Numero CAS:480-54-6</td></tr><tr><td>Retrorsina-N-ossido (ReNO) (98.0%)</td><td>BioCrick</td><td>5281734</td><td>Numero CAS:15503-86-3</td></tr><tr><td>Senecionina (Sc) (98.0%)</td><td>BioCrick</td><td>5280906</td><td>Numero CAS:130-01-8</td></tr><tr><td>Senecionine-N-ossido (ScNO) (98.0%)</td><td>BioCrick</td><td>5380876</td><td>Numero CAS:13268-67-2</td></tr><tr><td>Senecifillina N-ossidato (SpNO) (98,0%)</td><td>BioCrick</td><td>6442619</td><td>N. CAS:38710-26-8</td></tr><tr><td>Senecifillina (Sp) (98,0%)</td><td>BioCrick</td><td>5281750</td><td>N. CAS:480-81-9</td></tr><tr><td>Senkirkine (Sk) (98,0%)</td><td>BioCrick</td><td>5281752</td><td>N. CAS:2318-18-5</td></tr><tr><td>SPE PCX</td><td>Agilent Technologies</td><td>12108206</td><td>Cation Mixed Mode, 6 mL</td></tr><tr><td>di acido solforico (97%)</td><td>Wuxi Zhanwang Chemical Reagent Co., Ltd. </td><td>1003019</td><td>CAS No: 7664-93-9</td></tr><tr><td>Citrato trisodico</td><td>Sinpharm Chemical Reagent Co., Ltd.</td><td>20121009</td><td>CAS No: 6132-04-3</td></tr><tr><td>Pulitore ad ultrasuoni</td><td>Supmile</td><td>KQ-600B</td><td>Dimensione della fessura interna: 500 & volte; 300 & volte; 150 mm; Capacità: 22,5 L</td></tr><tr><td>UPLC-xevoTQMS</td><td>Waters</td><td>ZPLYY-003</td><td>Analizzatore di massa ad asta a tre stadi, Waters Alliance 2695/Waters ACQUITY UPLC Liquid Phase System</td></tr><tr><td>Oscillatore termostato a bagno d'acqua Strumento</td><td>Guoyu</td><td>SHY-2AHS</td><td>Tempi di oscillazione: 60-300 volte/min, Intervallo di temperatura costante: temperatura ambiente fino a 100 gradi; E</td></tr></tbody></table>

fonte e via di contaminazione da alcaloidi pirrolizidinici nei campioni di tè

Source and Route of Pyrrolizidine Alkaloid Contamination in Tea Samples

Gli alcaloidi pirrolizidinici tossici (PA) si trovano nei campioni di tè, che rappresentano una minaccia per la salute umana. Tuttavia, la fonte e la via della contaminazione da PA nei campioni di tè sono rimaste poco chiare. In questo lavoro, è stato sviluppato un metodo adsorbente combinato con UPLC-MS / MS per determinare 15 PA nell'erba Ageratum conyzoides L., nel terreno rizosferico di A. conyzoides , foglie di tè fresco e campioni di tè essiccato . I recuperi medi variavano dal 78% al 111%, con deviazioni standard relative dello 0,33% -14,8%. Quindici coppie di campioni di terreno rizosferico di A. conyzoides e A. conyzoides e 60 campioni di foglie di tè fresco sono stati raccolti dal giardino del tè Jinzhai nella provincia di Anhui, in Cina, e analizzati per i 15 PA. Non tutti i 15 PA sono stati rilevati nelle foglie di tè fresco, ad eccezione dell'intermedio-N-ossido (ImNO) e della senecionina (Sn). Il contenuto di ImNO (34,7 μg/kg) era superiore a quello di Sn (9,69 μg/kg). Inoltre, sia ImNO che Sn erano concentrati nelle foglie giovani della pianta del tè, mentre il loro contenuto era inferiore nelle foglie vecchie. I risultati hanno indicato che i PA nel tè sono stati trasferiti attraverso il percorso delle erbacce che producono PA-terra-foglie di tè fresche nei giardini del tè.

Il metodo di purificazione e analisi adsorbente ottimizzato di 15 PA in campioni di tè essiccato, foglie di tè fresco, erbe infestanti e terreno è stato stabilito e confrontato con il metodo di purificazione comunemente usato utilizzando la cartuccia SPE. I risultati hanno mostrato che i recuperi dei 15 PA in campioni di tè essiccato, erba e foglie di tè fresco utilizzando la cartuccia SPE erano del 72% -120%, mentre quello che utilizzava la purificazione adsorbente era del 78% -98% (Figura 1</strong...

Il presente protocollo descrive la contaminazione degli alcaloidi pirrolizidinici (PA) nei campioni di tè provenienti da erbe infestanti produttrici di PA nei giardini del tè.

Fonte e via di contaminazione da alcaloidi pirrolizidinici nei campioni di tè

Toxic pyrrolizidine alkaloids (PAs) are found in tea samples, which pose a threat to human health. However, the source and route of PA contamination in ...

Lo sviluppo di un metodo di rilevamento di 15 alcaloidi pirrolizidinici in erbe infestanti, suolo, foglie di tè fresco e campioni di tè secco può fornire supporto tecnico per esplorare la fonte di contaminazione da alcaloidi pirrolizidinici nel tè. Rispetto all'estrazione in fase solida, il metodo adsorbente per il campione di terreno può far risparmiare tempo, costi inferiori e migliori recuperi per l'analisi degli alcaloidi pirrolizidinici. Per iniziare l'estrazione sui prodotti di tè essiccati preriscaldati, foglie di tè fresco o erbe infestanti, pesare un grammo di un campione in una provetta da centrifuga da 50 millilitri e aggiungere 10 millilitri di soluzione di acido solforico da 0,1 moli per litro nel tubo.Successivamente, vortice il campione per due minuti se deve essere analizzato utilizzando l'estrazione in fase solida, mentre per un minuto se lo stesso deve essere analizzato utilizzando la pulizia adsorbente. Quindi sottoporre il campione all'estrazione ad ultrasuoni per 15 minuti, seguita da centrifugazione a 9.390 G per 10 minuti a temperatura ambiente. Quindi, utilizzando un contagocce con punta in plastica, trasferire la soluzione di surnatante in una provetta da centrifuga da 50 millilitri.Dopo aver eseguito l'estrazione due volte, combinare i surnatanti nel tubo. Per iniziare l'estrazione sul terreno preparato, pesare un grammo di un campione in una provetta da centrifuga da 50 millilitri. Aggiungere 0,1 millilitri di 0,1 moli per litro di soluzione di citrato trisodico per regolare il pH del terreno a 6,0 e lasciare riposare il campione per due minuti.Quindi aggiungere 10 millilitri di 0,1 moli per litro di soluzione di metanolo acido solforico nel tubo e vortice il campione per due minuti, seguito da agitazione per 30 minuti. Quindi, eseguire l'estrazione ad ultrasuoni per 30 minuti come dimostrato in precedenza. Quindi centrifugare il campione a 9.390 G per 10 minuti.E usando un contagocce con punta in plastica, trasferire il surnatante in un tubo da centrifuga da 50 millilitri. Dopo aver eseguito l'estrazione due volte, combinare i surnatanti . Attivare l'estrazione in fase solida o cartuccia SPE con cinque millilitri di metanolo seguiti da cinque millilitri di acqua deionizzata.Dopo l'attivazione, aggiungere 10 millilitri di surnatante dall'estrazione del campione alla cartuccia pre-attivata. Dopo che il livello della soluzione del campione ha raggiunto lo strato superiore delle cartucce, eluire la matrice del campione con cinque millilitri di soluzione di acido formico all'1%, seguita da cinque millilitri di metanolo, ed eliminare gli eluenti. Quindi, eluire gli analiti con cinque millilitri di metanolo contenente lo 0,5% di acqua ammoniaca.Filtrare l'eluente attraverso un filtro a membrana da 0,22 micron per analizzarlo mediante UPLC-MS/MS. Per eseguire la pulizia del campione utilizzando adsorbente, preparare una provetta da centrifuga da 10 millilitri con l'adsorbente che compromette GCB, PSA e C18 in rapporto da 10 a 20 a 15 milligrammi. Quindi aggiungere due millilitri del surnatante ottenuto dopo il trattamento del campione.Quindi, vortice il campione e la miscela adsorbente per un minuto e centrifugare a 9, 390 G per otto minuti a temperatura ambiente. Filtrare un millilitro del surnatante risultante attraverso un filtro a membrana da 0,22 micron in un flaconcino campione prima di analizzarlo con UPLC-MS/MS. Nello studio, è stata ottenuta una percentuale più elevata di recupero di 15 alcaloidi pirrolizidinici da foglie di tè fresco, campioni di tè essiccati ed erba utilizzando la tecnica di purificazione adsorbente rispetto al metodo della cartuccia SPE.I recuperi degli alcaloidi nel suolo utilizzando la purificazione adsorbente sono stati dal 79 al 111% Nelle foglie di tè fresco raccolte dai cinque siti di campionamento, è stato rilevato un contenuto più elevato di ossido di N intermedio rispetto alla senecionina. Senecionine non è stata rilevata nelle foglie mature provenienti dai siti di campionamento uno e due. Tra gli 11 alcaloidi pirrolizidinici, solo l'N-ossido intermedio è stato rilevato nel terreno, mentre la senecionina e l'N-ossido intermedio sono stati rilevati in diverse parti delle piante di tè.Inoltre, il contenuto di N-ossido intermedio in una gemma con due foglie è risultato essere il più alto. Mentre si tenta di farlo prima, la cosa più importante è aggiungere 0,1 millilitri di 0,1 moli per litro di soluzione di citrato trisodico per regolare il pH del terreno a 6,0. Questo metodo può essere applicato all'analisi degli alcaloidi in altre piante commestibili e fornisce anche una tecnica naturale per esplorare la fonte di alcaloidi in essi.

source-route-pyrrolizidine-alkaloid-contamination-tea

Research

Ricerca

JoVE Journal

Environment

Ambiente

Vi presentiamo un protocollo per lo screening rapido di campioni ambientali per sideroforo potenziale che contribuiscono alla biodisponibilità di micronutrienti e fatturato nei sistemi terrestri.

Sideroforo high-throughput Screening da campioni ambientali: tessuti, Bulk terreni e suoli rizosfera della pianta

Questo lavoro presenta un protocollo per stabilire una coltura di sospensione cellulare derivata dal tè ( Foglie diCamellia sinensis L.) che possono essere utilizzati per studiare il metabolismo di composti esterni che possono essere assorbiti da tutta la pianta, come gli insetticidi.

Studio sul metabolismo di sei insetticidi sistemici in una nuova coltura di sospensione cellulare derivata dal tè (Camellia Sinensis L.) plurale di "leaf"

Qui, presentiamo un protocollo per stabilire la cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC), accoppiata con il riconoscimento multi-pattern delle impronte digitali chimiche, che fornisce una nuova strategia per identificare efficacemente le varietà autentiche di Clematidis Armandii Caulis e dei suoi adulteranti.

HPLC accoppiato con impronte digitali chimiche per il riconoscimento multi-pattern per identificare l'autenticità di Clematidis armandii caulis

Qui viene presentato un metodo per arricchire e analizzare i componenti volatili degli estratti di tè utilizzando l'evaporazione del sapore assistita da solvente e l'estrazione con solvente seguita da gascromatografia-spettrometria di massa, che può essere applicata a tutti i tipi di campioni di tè.

Analisi dell'aroma del tè basata sull'arricchimento dell'evaporazione del sapore assistito da solvente

Presentiamo un metodo per l'annotazione e la classificazione rapida basata sulla spettrometria di massa (MS) e sulla spettrometria di massa (MS) degli alcaloidi tropanici, utile sia per la dereplicazione preliminare di campioni contenenti tropani che per la scoperta di nuovi alcaloidi per l'isolamento.

Applicazioni della cromatografia liquida Spettrometria di massa tandem nella ricerca sui prodotti naturali: alcaloidi tropanici come caso di studio

Questo protocollo presenta un metodo convalidato di cromatografia liquida-spettrometria di massa a mobilità ionica ad alta risoluzione per determinare la presenza di alcaloidi dell'ergot negli alimenti in conformità con il Regolamento della Commissione (UE) 2023/915 recentemente pubblicato.

Rilevazione di alcaloidi regolati dell'ergot in matrici alimentari mediante cromatografia liquida-spettrometria di mobilità ionica intrappolata-spettrometria di massa a tempo di volo

Questo studio ha sviluppato una cromatografia liquida ad alte prestazioni abbinata al metodo della spettrometria di massa a tripla quadrupola (HPLC-QQQ-MS) per identificare e quantificare gli alcaloidi tropani (iociammina, anisodamina, scopolamina) in Anisodus tanguticus. Il metodo si rivelò rapido, accurato e affidabile per l'analisi ad alto rendimento delle piante medicinali.

Un metodo HPLC-QQQ-MS efficiente e rapido per la quantificazione degli alcaloidi tropani nelle piante medicinali

L'obiettivo generale di questo studio era di dimostrare il potenziale meccanismo di contaminazione incrociata di origine alimentare patogeni Listeria monocytogenes in un ambiente deli al dettaglio. Questo metodo può essere applicato ad una varietà di ambienti diversi per monitorare la contaminazione patogeno.

Monitoraggio contaminazione microbica in ambienti di vendita al dettaglio usando fluorescente Powder - Un dettaglio Delicatessen Ambiente Esempio

EPA Il metodo 1615 utilizza un filtro elettropositivo per concentrare enterovirus e norovirus nelle acque ambientali e potabili. Questo manoscritto descrive la procedura per la raccolta dei campioni per le analisi del Metodo 1615.

Metodo EPA 1615. Misura di Enterovirus e Norovirus Evento in acqua per la cultura e RT-qPCR. I. Raccolta di campioni di virus

Descriviamo un protocollo per la filtrazione di campioni d'acqua con una cartuccia filtrante e l'estrazione del DNA ambientale (eDNA) senza dover aprire l'alloggiamento per rimuovere il filtro. Questo protocollo è stato sviluppato per il metabarcoding dell'eDNA dei pesci, ma è applicabile anche all'eDNA di altri organismi.

L&#39;utilizzo di una cartuccia filtrante per filtrazione di acqua campioni ed estrazione di DNA ambientale

Scopri un metodo di estrazione per rilevare alcaloidi pirrolizidinici nel tè, nel suolo e nelle erbe infestanti. La tecnica con adsorbente offre maggiore efficienza e recuperi migliori rispetto all'estrazione in fase solida per analisi di sicurezza alimentare.

Fonte e via di contaminazione da alcaloidi pirrolizidinici nei campioni di tè

Esplora altri video