Name: Valutazione ecografica non invasiva della progressione del cancro dellendometrio nella delezione diretta da Pax8 dei soppressori tumorali Arid1a e Pten nei topi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-02-17T13:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 44 s
Description: Impara a monitorare la progressione del cancro dell'endometrio nei topi mediante ecografia manuale non invasiva. Questo metodo consente studi longitudinali riducendo il numero di animali necessari per la ricerca.

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Siamo grati per il finanziamento del programma NCI Ovarian Cancer SPORE P50CA228991, del programma di formazione post-dottorato 5T32OD011089 e del Richard W. TeLinde Endowment, Johns Hopkins University. Il progetto è stato anche in parte finanziato dai sussidi per le spese correnti agli istituti privati di istruzione superiore della Promotion and Mutual Aid Corporation for Private Schools of Japan.

Tutte le procedure e gli esperimenti che coinvolgono i topi sono stati eseguiti secondo i protocolli approvati dal Johns Hopkins Animal Care and Use Committee. Per tutte le procedure, sono stati indossati DPI appropriati, compresi guanti e camici isolanti monouso. Sono state prese precauzioni durante la manipolazione di oggetti taglienti, che sono stati smaltiti correttamente in contenitori di taglienti a scatola rossa immediatamente dopo l'uso. Vedere la tabella dei materiali per i dettagli su tutti i materiali e le attrezzature utilizzati in questo protocollo.
1. Induzione del cancro dell'endometrio in topi iPAD ( Pten inducibile, doppia delezione Arid1a ) con doxiciclina
<ol><li>Mantenere 10 topi transgenici a doppia delezione (iPAD) Pax8-Cre-Arid1a-Pten (Figura 1) su un background genetico misto (129S, BALB/C, C57BL/6), come descritto in precedenza14.</li>
	<li>Raccogliere immagini ecografiche di base (2D) delle ovaie, dell'ovidotto e dell'utero di ciascun topo prima del trattamento con doxiciclina.</li>
	<li>Fornire esclusivamente diete di topo contenenti doxiciclina (doxiciclina iclato a 625 mg/kg di mangime) ai topi femmina iPAD per un minimo di 2 settimane a partire da 7-8 settimane di età per indurre la delezione genica.</li>
</ol>2. Configurazione dell'attrezzatura
<ol><li>Accendere il termoforo e coprire con un tampone assorbente pulito (temperatura target: 38 °C).</li>
	<li>Verificare che il vaporizzatore isoflurano e il serbatoio O2 siano adeguatamente riempiti. Riempire e sostituire se il contenuto è basso.</li>
	<li>Collegare la camera di induzione, il cono del naso e il sistema di scavenging al vaporizzatore.</li>
	<li>Configurare la macchina ad ultrasuoni.<ol><li>Selezionare un trasduttore (sonda) con un intervallo di 32-56 MHz o fino a 70 MHz per l'imaging dell'utero o dell'ovaio, rispettivamente.</li>
		<li>Collegare la sonda e accendere la macchina.</li>
		<li>Dopo l'avvio del sistema, utilizzare il pannello di controllo per accedere con le credenziali utente e accedere alla schermata iniziale.</li>
		<li>Dalla schermata iniziale, vai alla scheda Applicazioni e seleziona Modalità addome (piccolo) del mouse.</li>
		<li>Fare clic su Scansione per tornare alla schermata iniziale e attendere che venga visualizzata un'immagine dal vivo.</li>
		<li>Seleziona B-Mode dalle opzioni sulla barra degli strumenti a sinistra.</li>
		<li>Fare clic su Altri controlli per visualizzare strumenti aggiuntivi per il perfezionamento dell'immagine, come il guadagno e la profondità dell'immagine, o per regolare le impostazioni di acquisizione della clip, ad esempio il numero di fotogrammi al secondo.</li>
		<li>Una volta selezionate le impostazioni dell'immagine, tornare alla schermata iniziale facendo clic su Scansione.</li>
	</ol></li>
	<li>Accendere il serbatoio O2 , dirigere il flusso verso la camera di induzione e impostare la portata su 1 L/min.</li>
</ol>3. Preparazione di topi per lo screening ecografico, compresa la depilazione
<ol><li>Posizionare un mouse nella camera di induzione. Impostare il vaporizzatore isoflurano al 2%-3% vol/vol per l'induzione dell'anestesia.</li>
	<li>Determinare la profondità appropriata dell'anestesia da una mancanza di risposta al pizzicamento delle dita dei piedi e una frequenza respiratoria intorno a 1-2 respiri / s.</li>
	<li>Applicare lubrificante oftalmico sterile su ciascun occhio. Rimuovere la pelliccia dal dorso e dal ventrum tra l'ultima costola e il bacino con tosatrici di dimensioni appropriate.</li>
	<li>Applicare un sottile strato di crema depilatoria sulle regioni ventrale e dorsale da visualizzare (se necessario).</li>
	<li>Rimettere il mouse nella camera di induzione per circa 3-5 minuti per mantenere la profondità appropriata dell'anestesia mentre la crema depilatoria lavora per rimuovere i capelli. Dopo ≤4 minuti, pulire delicatamente la crema con un tovagliolo di carta umido pulito. NOTA: L'esposizione prolungata alla crema depilatoria è irritante e può causare lesioni cutanee.</li>
</ol>4. Iniezione intraperitoneale di liquido per aumentare il contrasto tra gli organi
<ol><li>Riscaldare a 35-40 °C una siringa da 3-10 mL riempita con una soluzione di liquido isotonico sterile (ad es. soluzione sterile di NaCl allo 0,9% o di suonerie lattate) posizionandola tra una piastra riscaldante e un tampone assorbente per diversi minuti. Posizionare una bottiglia di gel per ultrasuoni sulla piastra riscaldante se la macchina non ha uno scaldavivande.</li>
	<li>Per un topo da 20-25 g, iniettare 1-2 ml di soluzione nella cavità peritoneale.<ol><li>Fissare il mouse per la collottola in una mano, esponendo lo sventro.</li>
		<li>Tenere il mouse con un angolo di ~ 20 °, con il naso puntato verso il pavimento per dirigere gli organi cranialmente a causa della gravità.</li>
		<li>Utilizzando un ago di piccolo calibro (25 G, 5/8 di lunghezza, siringa di tubercolina), perforare la pelle e la parete addominale del quadrante caudale destro dell'addome.</li>
		<li>Prima dell'iniezione di liquidi, per evitare l'iniezione nel sistema vascolare o nel tratto gastrointestinale, tirare indietro con una pressione minima. Se sangue o altro materiale entra nella siringa, rimuovere l'ago. Usi un ago e una siringa nuovi e riprovi in una posizione leggermente diversa.</li>
	</ol></li>
	<li>Se il topo si sveglia durante le iniezioni, rimetterlo nella piccola camera di induzione per l'anestesia con isoflurano 2% -3% vol/vol.</li>
</ol>5. Imaging ecografico da un approccio dorsale
<ol><li>Posizionare il mouse in posizione ventrale sdraiata sul tampone assorbente sopra una piastra riscaldante (Figura 2A-C).</li>
	<li>Posizionare un cono del naso del roditore in modo sicuro sul naso e sul muso del topo. Mantenere la profondità dell'anestetico con isoflurano erogato attraverso il cono del naso a 1% -2% vol / vol in 100% O2. Applicare lubrificante oftalmico sterile, se necessario, su ciascun occhio.</li>
	<li>Monitorare il mouse per una frequenza respiratoria regolare (1-2 / s) e una mancanza di risposta al pizzicamento delle dita dei piedi per indicare se l'anestesia deve essere regolata.</li>
	<li>Posizionare una piccola quantità (~ 0,5-1 ml) di gel abassiale ad ultrasuoni preriscaldato (laterale) sulla colonna vertebrale su entrambi i lati del topo anestetizzato, tra l'ultima costola e il bacino.</li>
	<li>Metti una piccola quantità di gel sulla sonda ad ultrasuoni.</li>
	<li>Posizionare la sonda parallelamente alle vertebre con la parte anteriore della sonda sul lato cranico. Un segno indicatore è presente sulla testa della sonda per indicare il corretto orientamento della sonda. Registrare il giorno, l'ora, l'ID dell'animale, l'orientamento della sonda e il lato dell'animale (destro, sinistro, dorsale, ventrale) per ogni nuova serie di immagini raccolte.</li>
	<li>Con un topo in posizione reclinata ventrale (pelle dorsale che tocca la sonda), scansionare lentamente l'area per il punto di riferimento del rene (Figura 2B e Figura 3). Con il rene in vista, tirare la sonda caudale per trovare l'ovaio, una struttura ovale o rotonda leggermente iperecogena (Figura 4A, B) all'interno di un cuscinetto di grasso ovarico molto iperecogeno che è delimitato cranio-ventralmente dal rene e dorso-lateralmente dalla parete addominale dorsale. NOTA: La pressione caudale e laterale all'ovaio può dirigere l'ovaio più vicino alla parete addominale e lontano dalle anse dell'intestino. L'ovaio è anatomicamente posizionato contro la parete addominale dorsale, appena ventrale e laterale ai muscoli epaxiali e caudale al rene.</li>
	<li>Regola il guadagno del segnale utilizzando il cursore nella parte inferiore dello schermo di controllo per migliorare il contrasto dell'immagine.</li>
	<li>Per migliorare l'imaging del rene, applicare pressione con un dito sull'addome controlaterale. Variare la pressione e l'angolo da direttamente parallelo alla colonna vertebrale a ~ 20 ° ventrale.</li>
	<li>Una volta che l'organo di interesse è in vista, raccogli un video facendo clic su Salva clip o Avvia registrazione e quindi Interrompi registrazione al termine per conservare le immagini a un numero preimpostato di fotogrammi.</li>
	<li>Salva singoli fotogrammi da un'immagine live o da una registrazione con il pulsante Salva fotogramma .</li>
	<li>Per visualizzare l'utero, tirare la sonda caudalmente fino a quando l'ovaio è nell'aspetto più cranico del campo visivo. Variare la pressione e l'angolo della sonda fino a quando l'utero è in vista.</li>
	<li>Ripeti la raccolta di video e fotogrammi per ogni organo di interesse.</li>
	<li>Trova l'utero che corre longitudinale lungo la parete addominale dorsale con la muscolatura laterale della gamba anche in vista (Figura 4B). NOTA: La dimensione dell'utero e il diametro del lume possono variare con la fase di estro e lo stato di malattia.</li>
	<li>Monitorare il tessuto per il movimento peristaltico per differenziare le anse intestinali dalle corna stazionarie uterine.</li>
</ol>6. Raccogli immagini da un approccio ventrale
<ol><li>Posizionare il topo in posizione dorsale sdraiata e verificare che la lubrificazione oculare sia sufficiente e che il muso sia saldamente nel cono del naso (Figura 2A).</li>
	<li>Applicare una piccola quantità (~ 0,5-1 ml) di gel ecografico preriscaldato sull'addome ventrale e applicare la sonda sulla linea mediana appena craniale del pube per individuare la vescica come punto di riferimento ipoecogeno (Figura 5). NOTA: Se la vescica è troppo grande e oscura l'imaging dell'utero, è possibile esercitare una leggera pressione sull'addome inferiore per esprimere l'urina.</li>
	<li>Tirare la sonda lateralmente alla vescica per trovare le corna uterine. Applicare una leggera pressione digitale da uno o entrambi i lati del mouse per portare le trombe nel campo visivo. Tenere la sonda perpendicolare al mouse e scansionare entrambi i lati dell'addome per catturare viste trasversali (sezioni trasversali) di entrambe le corna. Ruotare la sonda per acquisire viste sagittali.</li>
	<li>Dopo l'ecografia, pulire il mouse dal gel con un tovagliolo di carta e riportarlo nella sua gabbia per recuperare. I topi sono completamente svegli in 2-5 minuti. Una volta che è completamente sveglio e deambulante, riporta il topo nella stanza degli animali. NOTA: Una piastra riscaldante a fuoco basso può essere posizionata sotto la gabbia per riscaldare la gabbia per il recupero.</li>
	<li>Al punto finale sperimentale o umano, eutanasia del topo. Idealmente, eutanasia il topo nella gabbia di casa per ridurre lo stress; In alternativa, posizionare il mouse in una camera pulita. Erogare CO2 pressurizzato a una velocità di spostamento del 10%-30% del volume della camera al minuto. Dopo circa 5 minuti di assenza di respirazione visibile, verificare la morte per lussazione cervicale. Procedere con l'autopsia addominale per la raccolta del tumore.</li>
</ol>

<ol><li>Ajayi, A. F., Akhigbe, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staging+of+the+estrous+cycle+and+induction+of+estrus+in+experimental+rodents%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Fertility+Research+and+Practice%22%5BJournal%5D)">Staging of the estrous cycle and induction of estrus in experimental rodents: an update.</a> Fertility Research and Practice. 6, 5(2020).</li>
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<li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasonography+in+experimental+reproductive+investigations+on+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Ultrasonography in experimental reproductive investigations on rats.</a> Journal of Visualized Experiments. 130, e56038(2017).</li>
<li>Suryo Rahmanto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+of+Arid1a+in+the+endometrium+is+associated+with+endometrioid+tumorigenesis+through+transcriptional+reprogramming%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Inactivation of Arid1a in the endometrium is associated with endometrioid tumorigenesis through transcriptional reprogramming.</a> Nature Communications. 11, 2717(2020).</li>
<li>Pani, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pre-existing+thyroiditis+ameliorates+papillary+thyroid+cancer%3A+Insights+from+a+new+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Pre-existing thyroiditis ameliorates papillary thyroid cancer: Insights from a new mouse model.</a> Endocrinology. 162 (10), bqab144(2021).</li>
</ol>

Gli autori non hanno conflitti di interesse da rivelare.

Questo protocollo esamina l'utilità degli ultrasuoni per valutare i cambiamenti morfologici uterini nella progressione dell'adenocarcinoma nell'utero nei topi. In questo studio, seguendo l'induzione del cancro dell'endometrio nei topi longitudinalmente, i dettagli anatomici rilevati dagli ultrasuoni sono risultati essere indicatori di patologia grossolana e istologica. Questo apre la porta all'uso di studi longitudinali con un numero minore di topi monitorati mediante ultrasuoni in più punti temporali per seguire la prog...

I topi rimangono uno dei modelli animali più importanti per i disturbi riproduttivi 1,2,3. Esistono diversi modelli di roditori geneticamente modificati o indotti di tumori ovarici e uterini. Questi studi in genere si basano su più coorti eutanasiche in diversi punti temporali per catturare le tendenze longitudinali nei cambiamenti morfologici e patologici. Ciò impedisce la capacità di acquisire dati continui sullo sviluppo del cancro in un singolo topo. Inoltre, senza conoscere lo stato di progressione della malattia del singolo topo, gli studi di intervento si basano su punti temporali predeterminati e risultati medi di coorti precedenti piuttosto che soglie individuali per il rilevamento della progressione in un animale specifico 4,5. Pertanto, sono necessari approcci di imaging che consentano la valutazione longitudinale negli animali vivi per facilitare i modelli preclinici per testare nuovi farmaci o composti e accelerare la comprensione della patobiologia, aumentando al contempo il rigore e la riproducibilità6.
L'ecografia (US) è un metodo interessante per il monitoraggio longitudinale della progressione del cancro uterino del topo perché è relativamente facile e poco costoso rispetto ad altri metodi di imaging, è facile da eseguire e può avere una notevole risoluzione 6,7. Questa modalità non invasiva può catturare caratteristiche su scala micron in topi svegli o con topi sotto breve sedazione utilizzando un esame di 5-10 minuti. La microscopia ecografica è stata validata come metodo per misurare lo sviluppo del follicolo ovarico di topo 8 e la crescita di neoplasie impiantate o indotte 9,10,11. L'US ad alta frequenza è stata utilizzata anche per iniezioni intrauterine percutanee12 e per osservare il cambiamento uterino del ratto durante il ciclo di estro13. Gli US ad alta frequenza possono essere utilizzati con mouse tenuti su piattaforme fisse specializzate utilizzando un sistema di binari per tenere il trasduttore / sonda per catturare immagini ad alta risoluzione con posizione e pressione standardizzate; Tuttavia, questa apparecchiatura non è disponibile in tutte le istituzioni. I metodi di scansione dei trasduttori portatili possono essere adottati con apparecchiature meno dedicate e utilizzati sia per la diagnostica clinica che per le applicazioni di ricerca nei topi.
Rimane la domanda se l'imaging statunitense con sonde portatili ad alta frequenza possa essere utilizzato per monitorare lo sviluppo del cancro uterino per più settimane. Simile all'intestino, l'utero del roditore è una struttura sottile e sottile che è molto mobile all'interno dell'addome ed è contigua attraverso più profondità di tessuto, rendendo l'imaging più difficile rispetto a organi relativamente immobili come i reni. Questo studio ha cercato di stabilire la correlazione tra i tessuti osservati dagli ultrasuoni e dall'istopatologia, definire i punti di riferimento per localizzare l'utero del topo e determinare la fattibilità della valutazione longitudinale del cancro dell'endometrio. Questo studio presenta dati che mostrano una corrispondenza qualitativa tra l'aspetto dell'utero ripreso da US e l'istopatologia, nonché l'imaging seriale dei topi per diverse settimane. Questi risultati indicano che gli US portatili possono essere utilizzati per monitorare lo sviluppo del cancro dell'endometrio nei topi, creando così un'opportunità per raccogliere dati longitudinali sui singoli topi per studiare il cancro uterino senza la necessità di attrezzature dedicate.

<table><tbody><tr><td>Reagenti e attrezzature utilizzate per la cura degli animali</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dieta per roditori (2018, 625 doxiciclina)</td><td>Envigio</td><td>TD.01306</td><td>Mangime per topi</td></tr><tr><td>Reagenti e apparecchiature utilizzate per l'imaging a ultrasuoni</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10 mL iniettabile 0,9% NaCl&nbsp;</td><td>Hospira, Inc</td><td>RL-7302</td> Tampone assorbente <td>per fluido isotonico</td></tr><tr><td>con supporto</td><td>in plastica Daigger</td><td>EF8313</td><td>Cuscinetti assorbenti</td></tr><tr><td>Camere di induzione per anestesia</td><td>Apparato Harvard</td><td>75-2029</td><td></td></tr><tr><td>Kit assorbitore per anestesia con contenitore assorbitore, supporto, tubo e adattatori</td><td>CWE, Inc</td><td>13-20000</td><td>Cono e tubo</td></tr><tr><td>Aquasonic Clear Gel per ultrasuoni (0,25 litri)</td><td>Parker Laboratoies</td><td>08-03</td><td>Gel per ultrasuoni</td></tr><tr><td>BD Plastipak Siringa da 3 ml</td><td>BD Biosciences</td><td>Siringa</td><td>per 309657</td></tr><tr><td>F/Air Scavenger Contenitore di carbone</td><td>OMNICON</td><td>80120</td><td>Sistema di evacuazione per anestesia</td></tr><tr><td>Isoflurano, USP</td><td>Vet One</td><td>502017</td><td>Agente per anestesia</td></tr><tr><td>M1050 Macchina per anestesia mobile non rerespirabile</td><td>Scivena Scientific</td><td>M1050</td><td>Vaporizzatore Anestetico</td></tr><tr><td>MX550S, Trasduttore 25-55 MHz, 15mm, Trasduttore Lineare</td><td>ad Ultrasuoni VisualSonics</td><td>MX550S</td><td>(Sonda)</td></tr><tr><td>Nair Hair Aloe & Lozione depilatoria alla lanolina - 9,0 once</td><td>Nair</td><td></td><td>Crema depilliante</td></tr><tr><td>Philips Norelco Multigroomer All-in-One Trimmer Series 7000</td><td>Philips North America</td><td>MG7750</td><td>Clippers</td></tr><tr><td>PrecisionGlide 25 G 1" Ago</td><td>BD Biosciences</td><td>305125</td><td>Ago</td></tr><tr><td>Puralube Unguento oftalmico</td><td>Dechra</td><td>17033-211-38</td><td>Collirio lubrificante</td></tr><tr><td>Vevo 3100 Imaging Sistema</td><td>VisualSonics</td><td>Vevo 3100</td><td>Ecografo</td></tr><tr><td>Vevo LAB 5.6.1</td><td>VisualSonics</td><td>Vevo LAB 5.6.1</td><td>Software di analisi degli ultrasuoni</td></tr><tr><td>Pad riscaldante in vinile con coperchio, 12 x 15"</td><td>Sunbeam</td><td>731-500-000R</td><td>Pad riscaldante</td></tr><tr><td>Wd Elements 2TB Archiviazione di base</td><td>Western Digital Elements</td><td>WDBU6Y0020BBK-WESN</td><td>Archiviazione dati</td></tr><tr><td>Reagenti e apparecchiature utilizzate per l'immunoistochimica</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10% p/v Formalina</td><td>Fischer Scientific</td><td>SF98-4</td><td>Tampone per la fissazione tissutale</td></tr><tr><td>Bloccante e diluente senza animali, R.T.U.</td><td>Laboratori vettoriali Inc.</td><td>&nbsp; SP5035</td><td>Antibody Blocker</td></tr><tr><td>Caricato Super Frost Plus Vetrini</td><td>VWR</td><td>4831-703</td><td>Vetrini per montaggio su tessuto Tampone</td></tr><tr><td>citrato</td><td>MilliporeSigma</td><td>&nbsp; C9999-1000ML</td><td>Epitope Retrival Buffer (pTEN)</td></tr><tr><td>Cytoseal &ndash; 60</td><td>Thermo Scientific</td><td>8310-4</td><td>Resina per sigillatura di vetrini</td></tr><tr><td>Coperchio con guarnizione in oro</td><td>Thermo Scientific</td><td>3322</td><td>Coverslide</td></tr><tr><td>Harris Modified Hematoxylin</td><td>MilliporeSigma</td><td>HHS32-1L</td><td>Counterstain</td></tr><tr><td>Buffer Hybridization Incubator (Dual Chamber)</td><td>Fischer Scientific</td><td>13-247-30Q</td><td>Forno per fondere</td></tr> il <tr><td>substrato di parraffina ImmPACT DAB, perossidasi (HRP)</td><td>Vector Laboratories Inc.</td><td>SK-4105</td><td>Substrato di sviluppo del segnale</td></tr><tr><td>Kit di rilevamento del polimero IgG anti-coniglio di capra ImmPRESS HRP, Perossidasi</td><td>Vector Laboratories Inc.</td><td>MP-7451</td><td>Anticorpo IHC secondario</td></tr><tr><td>Oster 5712 Vaporiera digitale per alimenti</td><td>Oster</td><td>5712</td><td>Vaporiera per verdure Epitope Retrival</td></tr><tr><td>rabbit mAB anti-ARID1a</td><td>abcam</td><td>ab182560</td><td>Anticorpo IHC primario (1:1.000)</td></tr><tr><td>mAB di coniglio anti-PTEN</td><td>Segnalazione cellulare</td><td>9559</td><td>Anticorpo IHC primario (1:100)</td></tr><tr><td>Sostituto dell'acqua di rubinetto Scotts</td><td>MilliporeSigma</td><td>S5134-100ML</td><td>Cassetta tampone "Blueing"</td></tr><tr><td>Tissue Path IV Fischer</td><td>Scientific</td><td>22272416</td><td>Cassetta per fissazione tissutale</td></tr><tr><td>Trilogy Buffer</td><td>Cell Marque</td><td>&nbsp; 920P-10</td><td>Epitope Retrival Buffer (ARID1a)</td></tr></tbody></table>

valutazione ecografica non invasiva della progressione del cancro dell'endometrio nella delezione diretta da pax8 dei soppressori tumorali arid1a e pten nei topi

Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

I tumori uterini possono essere studiati nei topi a causa della facilità di manipolazione e manipolazione genetica in questi modelli. Tuttavia, questi studi sono spesso limitati a valutare la patologia post-mortem negli animali sottoposti a eutanasia in più punti temporali in diverse coorti, il che aumenta il numero di topi necessari per uno studio. L'imaging dei topi negli studi longitudinali può monitorare la progressione della malattia nei singoli animali, riducendo il numero di topi necessari. I progressi nella tecnologia a ultrasuoni hanno permesso di rilevare cambiamenti a livello micrometrico nei tessuti. L'ecografia è stata utilizzata per studiare la maturazione del follicolo nelle ovaie e la crescita dello xenotrapianto, ma non è stata applicata ai cambiamenti morfologici nell'utero del topo. Questo protocollo esamina la giustapposizione della patologia con confronti di imaging in vivo in un modello murino di cancro dell'endometrio indotto. Le caratteristiche osservate dagli ultrasuoni erano coerenti con il grado di cambiamento osservato dalla patologia grossolana e dall'istologia. L'ecografia è risultata altamente predittiva della patologia osservata, supportando l'incorporazione dell'ecografia negli studi longitudinali delle malattie uterine come il cancro nei topi.

I topi transgenici a doppia delezione (iPAD) Pax8-Cre-Arid1a-Pten sono stati mantenuti su un background genetico misto (129S, BALB/C, C57BL/6), come descritto in precedenza14. I topi sono stati tutti alimentati con doxiciclina per 2 settimane per indurre Cre ricombinasi. In precedenti lavori del nostro gruppo, la doxiciclina è stata dosata con sonda gastrica14; Tuttavia, in questo studio, il metodo di induzione del mangime per doxiciclina ha funzionato in ...

Questo protocollo descrive un metodo per monitorare la progressione dei cambiamenti morfologici nel tempo nell'utero in un modello murino inducibile di cancro dell'endometrio utilizzando l'imaging ad ultrasuoni con correlazione ai cambiamenti grossolani e istologici.

Valutazione ecografica non invasiva della progressione del cancro dell'endometrio nella delezione diretta da Pax8 dei soppressori tumorali Arid1a e Pten nei topi

Uterine cancers can be studied in mice due to the ease of handling and genetic manipulation in these models. However, these studies are often limited to ...

Questo studio dimostra che l'ecografia guidata manuale è adatta per monitorare lo sviluppo della patologia uterina in un modello murino indotto di cancro dell'endometrio. L'imaging ad ultrasuoni non è invasivo e quindi consente studi longitudinali di singoli topi per giorni e settimane. Ciò consente la cattura delle variazioni individuali e, in definitiva, un minor numero di animali da utilizzare per lo studio.Questo metodo può essere facilmente applicato per monitorare i cambiamenti patologici e altri modelli di mirroring, compresi quelli per neoplasie e malattie croniche del tratto urinario e digestivo. Iniziare a configurare la macchina ad ultrasuoni per l'imaging dell'utero o dell'ovaio selezionando un trasduttore o una sonda con un intervallo da 32 a 56 megahertz. Vai alla scheda Applicazioni dalla schermata principale e seleziona Mouse Small Abdomen Mode.Quindi fare clic su Scansione per tornare alla schermata iniziale e attendere che venga visualizzata un'immagine live. Quindi, selezionare Modalità B dalle opzioni sulla barra degli strumenti di sinistra prima di fare clic sull'opzione Altri controlli per visualizzare strumenti aggiuntivi per il perfezionamento dell'immagine,

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Descriviamo una piattaforma di imaging animale non invasiva che consente il rilevamento, la quantificazione e il monitoraggio della crescita e della recidiva del cancro ovarico. Questo modello di xenotrapianto intraperitoneale imita il profilo clinico delle pazienti con carcinoma ovarico.

Modello murino per l&#39;imaging non invasivo per rilevare e monitorare Ovarian Cancer Ricorrenza

Le metastasi del cancro ovarico sono caratterizzate da numerose lesioni diffuse intra-peritoneali, tali da rendere difficile un'accurata quantificazione visiva del carico tumorale.  Qui descriviamo un metodo per la quantificazione in situ ed ex vivo del carico tumorale metastatico utilizzando cellule tumorali marcate con proteina fluorescente rossa (RFP) e imaging ottico.

La quantificazione di intra-peritoneale del cancro ovarico metastasi

Descriviamo un metodo per il rilevamento dello sviluppo del nodulo tumorale nei polmoni di un modello murino di adenocarcinoma utilizzando la micro-tomografia computerizzata e il suo utilizzo per monitorare i cambiamenti nelle dimensioni del nodulo nel tempo e in risposta al trattamento. L'accuratezza della valutazione è stata confermata con la quantificazione istologica end-point.

Utilizzando la tomografia micro-computerizzata per la valutazione di sviluppo del tumore e follow-up di risposta al trattamento in un modello murino di cancro ai polmoni

Topi sono ampiamente usati per studiare biologia gestazionale. Tuttavia, interruzione della gravidanza è richiesto per tali studi che preclude le indagini longitudinali e richiede l'uso di un gran numero di animali. Di conseguenza, descriviamo una tecnica non-invasiva dell'ecografia ad alta frequenza per la diagnosi precoce e il monitoraggio di eventi post-impianto nel topo incinta.

Un uso novello di tridimensionale ad alta frequenza l'ecografia per la caratterizzazione di gravidanza precoce nel topo

Questo articolo viene descritto l'utilizzo dell'ecografia ad alta risoluzione in topi geneticamente ingegnerizzati cancro del pancreas. L'obiettivo primario è quello di fornire istruzioni precise per il rilevamento e la valutazione dei tumori pancreatici endogeni.

Utilizzando ultrasuoni ad alta risoluzione per Monitor l'inizio del tumore e la crescita nei modelli geneticamente del cancro del pancreas

Qui, presentiamo un protocollo per l'imaging di vivere di frammenti endometriali umane fluorescente contrassegnati innestate nei topi. Il metodo permette di studiare gli effetti dei farmaci di scelta sulla dimensione della lesione endometriotic attraverso il monitoraggio e la quantificazione della fluorescenza emessa dal reporter fluorescente in tempo...

Monitoraggio non invasivo della dimensione della lesione in un modello murino eterologo di endometriosi

Questo protocollo descrive i passi adottati per indurre i tumori polmonari KRAS nei topi e la quantificazione dei tumori formati mediante l'imaging ad ultrasuoni. I piccoli tumori sono visualizzati nei primi tempi come linee B. In momenti successivi, le misurazioni relative del volume del tumore vengono ottenute dallo strumento di misurazione nel software a ultrasuoni.

Rilevamento della progressione del tumore del polmone nei topi mediante Ultrasound Imaging

Il melanoma è una malattia molto aggressiva che si diffonde rapidamente ad altri organi. Questo protocollo descrive l'applicazione dell'imaging ecografico ad altissima frequenza, abbinato al rendering 3D, per monitorare il volume dei linfonodi inguinali nel modello murino Braf/Pten del melanoma metastatico.

Analisi del volume dei linfonodi mediante imaging ecografico ad altissima frequenza nel modello murino geneticamente modificato braf/Pten del melanoma

Il presente protocollo descrive l'ecografia ad alta frequenza per visualizzare l'intera ghiandola tiroidea del topo e monitorare la crescita del carcinoma anaplastico della tiroide.

Ecografia ad alta risoluzione per l'analisi di tumori ATC ortotopici in un modello murino geneticamente modificato

Questo protocollo descrive un metodo efficiente e non chirurgico per l'impianto ortotopico di xenotrapianti derivati da pazienti con carcinoma mammario nei topi. La tecnica prevede la dissociazione enzimatica del tumore seguita da un'iniezione diretta nei cuscinetti adiposi mammari, consentendo un impianto ad alto rendimento. La convalida completa garantisce la fedeltà del modello, facilitando studi rigorosi su vari sottotipi di cancro al seno.

Dissociazione ad alto rendimento e impianto ortotopico di xenotrapianti derivati da pazienti con carcinoma mammario

Questo protocollo utilizza un letto a più camere per immagini a risonanza magnetica parallela (MRI) di fino a quattro animali al fine di rilevare tumori adenocarcinomi pancreatici in modelli murini geneticamente modificati. Questo protocollo di risonanza magnetica multi-animali è rapido ed economico per la rilevazione e la misurazione dei tumori, facilitando la selezione degli animali per studi preclinici e il monitoraggio longitudinale della crescita tumorale.

Imaging a risonanza magnetica multianimale per misurazioni tumorali in modelli topini di cancro al pancreas

Impara a monitorare la progressione del cancro dell'endometrio nei topi mediante ecografia manuale non invasiva. Questo metodo consente studi longitudinali riducendo il numero di animali necessari per la ricerca.

Valutazione ecografica non invasiva della progressione del cancro dellendometrio nella delezione diretta da Pax8 dei soppressori tumorali Arid1a e Pten nei topi (Video) | JoVE Journal

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