Generazione di cellule dendritiche derivate da monociti con diversi fenotipi sialilati
October 20th, 2023
Viene presentato un protocollo unico e completo per generare cellule dendritiche (mo-DC) derivate da monociti umani desialilati da cellule mononucleate isolate del sangue periferico (PBMC) utilizzando un trattamento con sialidasi. Inoltre, vengono descritti metodi per valutare la caratterizzazione fenotipica e funzionale delle mo-DC e valutare come il trattamento con sialidasi migliora il livello di maturazione delle mo-DC.
Lo scopo della ricerca del gruppo di glicoimmunologia è studiare il ruolo dell'immunologia dei glicani nella salute e nelle malattie umane. Questa ricerca mira a districare i meccanismi biologici modulati dalle glicosilazioni e a scoprire nuove terapie a base di glicani per il cancro e le malattie congenite della glicosilazione. La nostra attenzione si è concentrata sui glicani sialilati che influenzano la funzione delle molecole rilevanti, in particolare durante la risposta.
Abbiamo sviluppato tecnologie per alterare il contenuto di acido sialico e una piattaforma multimodale per la dissoluzione ad alto rendimento di proteine leganti i glicani con potenziali applicazioni cliniche. Per far progredire la ricerca nel campo, utilizziamo diverse tecnologie come la profilazione dei glicani, la selezione o la colorazione degli anticorpi, la spettrometria di massa e l'immunoistochimica, i saggi in vitro con linee cellulari come modelli di malattia, le manipolazioni del contenuto di acido sialico attraverso l'ingegneria enzimatica e metabolica. Le attuali sfide sperimentali riguardano la comprensione delle complesse interazioni tra glicani sialilati e lectine.
Ci sono meccanismi e conseguenze funzionali in diverse risposte immunitarie. L'acido sialico modula la potenza delle cellule dendritiche e il turnover MHC1. Questa scoperta ha individuato nuovi meccanismi biologici e patologici e ha sviluppato terapie innovative.
Ha inoltre identificato nuovi percorsi immunitari e approcci per la loro modulazione terapeutica. Uno dei problemi nella produzione ex vivo di cellule dendritiche derivate da monociti umani per usi terapeutici è la loro incapacità di maturare completamente. Questo protocollo mostra che la maturazione delle DC può essere ottenuta trattando enzimaticamente la superficie cellulare con sialidasi mantenendo la vitalità cellulare.
Questo metodo è conveniente e consente di risparmiare tempo. Rispetto agli inibitori metabolici dell'acido sialico, il trattamento con sialidasi offre un metodo rapido ed efficace per rimuovere gli acidi sialici della superficie cellulare mantenendo la vitalità cellulare. La comprensione del ruolo del contenuto di acido sialico nei glicani genera una certa consapevolezza dell'importanza di questo glicano nel cancro e favorirà l'identificazione di nuovi meccanismi di malattia e strategie neuropatiche.
Panoramica
Questo articolo presenta un protocollo completo per generare cellule dendritiche derivate da monociti umani desialilate (mo-DC) da cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC) utilizzando il trattamento con sialidasi. Descrive inoltre metodi per valutare le caratteristiche fenotipiche e funzionali delle mo-DC e valuta l'impatto del trattamento con sialidasi sulla loro maturazione.
Componenti chiave dello studio
Area di scienza
- Glicoimmunologia
- Immunologia
- Biologia cellulare
Sfondo
- La ricerca si concentra sul ruolo dei glicani nella salute e nella malattia umana.
- Comprendere i meccanismi di glicosilazione può portare a nuove terapie.
- I glicani sialillati influenzano le funzioni delle cellule immunitarie.
- Le sfide attuali includono la maturazione delle cellule dendritiche per applicazioni terapeutiche.
Obiettivo dello studio
- Sviluppare un metodo economico per produrre mo-DC mature.
- Esplorare gli effetti del trattamento con sialidasi sulla maturazione delle cellule dendritiche.
- Migliorare la comprensione del ruolo dell'acido sialico nelle risposte immunitarie.
Metodi utilizzati
- Isolamento di PBMC dal buffy coat umano.
- Separazione mediante gradiente di densità per ottenere una sospensione leucocitaria.
- Separazione magnetica attivata per l'isolamento di monociti CD14+.
- Trattamento enzimatico con sialidasi per promuovere la maturazione cellulare.
Principali risultati
- Il trattamento con sialidasi migliora efficacemente la maturazione delle mo-DC.
- Il protocollo mantiene la vitalità cellulare rimuovendo gli acidi sialilati.
- Migliore comprensione del ruolo dell'acido sialico nella modulazione immunitaria.
- Potenziale per lo sviluppo di nuove strategie terapeutiche mirate alla glicosilazione.
Conclusioni
- Il protocollo presentato offre un metodo affidabile per generare mo-DC mature.
- Il trattamento con sialidasi è un approccio promettente per migliorare la funzione delle cellule dendritiche.
- È necessaria ulteriore ricerca per esplorare le applicazioni terapeutiche delle mo-DC modificate.
Domande frequenti
Chapters in this video
0:00
Introduction
3:09
Monocyte Isolation and Monocyte Differentiation into Monocyte‐Derived Dendritic Cells
9:24
Treatment of the Monocyte‐Derived Dendritic Cells (mo‐DC) with Sialidase
12:16
Maturation Profiling of Human Monocyte‐Derived Dendritic Cells (Mo‐DCs)
