Name: Le iniezioni intrafemorali semplificate con topi vivi consentono unanalisi continua del midollo osseo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-11-10T13:50:00.000+00:00
Duration: 6 min 28 s
Description: Impara la tecnica di iniezione intrafemorale semplificata per il trapianto di cellule staminali ematopoietiche nei modelli murini. Questo metodo consente l'innesto sicuro e l'analisi seriale del midollo osseo con campioni di pazienti.

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<meta charset="utf8"></head><body>Iniezione intrafemorale per lo studio del midollo osseo in topi vivi

<ol><li>Majeti, R., Park, C. Y., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+hierarchy+of+multipotent+hematopoietic+progenitors+in+human+cord+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Identification of a hierarchy of multipotent hematopoietic progenitors in human cord blood.</a> Cell Stem Cell. 1 (6), 635-645 (2007).</li>
<li>Wilkinson, A. C., Igarashi, K. J., Nakauchi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haematopoietic+stem+cell+self-renewal+in+vivo+and+ex+vivo.+Nature+reviews%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Haematopoietic stem cell self-renewal in vivo and ex vivo. Nature reviews.</a> Genetics. 132, 1-14 (2020).</li>
<li>Pinho, S., Frenette, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haematopoietic+stem+cell+activity+and+interactions+with+the+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Molecular+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Haematopoietic stem cell activity and interactions with the niche.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 20 (5), 303-320 (2019).</li>
<li>Méndez-Ferrer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow+niches+in+haematological+malignancies%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Bone marrow niches in haematological malignancies.</a> Nature Reviews. Cancer. 20 (5), 285-298 (2020).</li>
<li>Frassoni, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+intrabone+transplant+of+unrelated+cord-blood+cells+in+acute+leukaemia%3A+a+phase+I%2FII+study%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet.+Oncology%22%5BJournal%5D)">Direct intrabone transplant of unrelated cord-blood cells in acute leukaemia: a phase I/II study.</a> The Lancet. Oncology. 9 (9), 831-839 (2008).</li>
<li>Mazurier, F., Doedens, M., Gan, O. I., Dick, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+myeloerythroid+repopulation+after+intrafemoral+transplantation+of+NOD-SCID+mice+reveals+a+new+class+of+human+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Rapid myeloerythroid repopulation after intrafemoral transplantation of NOD-SCID mice reveals a new class of human stem cells.</a> Nature Medicine. 9 (7), 959-963 (2003).</li>
<li>McKenzie, J. L., Gan, O. I., Doedens, M., Dick, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+short-term+repopulating+stem+cells+are+efficiently+detected+following+intrafemoral+transplantation+into+NOD%2FSCID+recipients+depleted+of+CD122%2B+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Human short-term repopulating stem cells are efficiently detected following intrafemoral transplantation into NOD/SCID recipients depleted of CD122+ cells.</a> Blood. 106 (4), 1259-1261 (2005).</li>
<li>Futrega, K., Lott, W. B., Doran, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+bone+marrow+HSC+transplantation+enhances+local+engraftment+at+the+expense+of+systemic+engraftment+in+NSG+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Direct bone marrow HSC transplantation enhances local engraftment at the expense of systemic engraftment in NSG mice.</a> Scientific Reports. 6 (1), 23886(2016).</li>
<li>Chung, Y. R., Kim, E., Abdel-Wahab, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Femoral+bone+marrow+aspiration+in+live+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Femoral bone marrow aspiration in live mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (89), e51660(2014).</li>
<li>Iwano, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+bioluminescence+imaging+of+deep+tissue+in+freely+moving+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Single-cell bioluminescence imaging of deep tissue in freely moving animals.</a> Science. 359 (6378), 935-939 (2018).</li>
<li>Sundberg, R. D., Hodgson, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aspiration+of+bone+marrow+in+laboratory+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Aspiration of bone marrow in laboratory animals.</a> Blood. 4 (5), 557-561 (1949).</li>
<li>Schmitz, M., Bourquin, J. -P., Bornhauser, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+technique+for+intrafemoral+injection+and+bone+marrow+sampling+in+mouse+transplant+models%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia+%26+lymphoma%22%5BJournal%5D)">Alternative technique for intrafemoral injection and bone marrow sampling in mouse transplant models.</a> Leukemia & lymphoma. 52 (9), 1806-1808 (2011).</li>
<li>Nakauchi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cell+type-specific+5hmC+landscape+and+dynamics+of+healthy+human+hematopoiesis+and+TET2-mutant+preleukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Cancer+Discovery%22%5BJournal%5D)">The cell type-specific 5hmC landscape and dynamics of healthy human hematopoiesis and TET2-mutant preleukemia.</a> Blood Cancer Discovery. 3 (4), 346-367 (2022).</li>
<li>Chan, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isocitrate+dehydrogenase+1+and+2+mutations+induce+BCL-2+dependence+in+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Isocitrate dehydrogenase 1 and 2 mutations induce BCL-2 dependence in acute myeloid leukemia.</a> Nature Medicine. 21 (2), 178-184 (2015).</li>
<li>Zhang, T. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-6+blockade+reverses+bone+marrow+failure+induced+by+human+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">IL-6 blockade reverses bone marrow failure induced by human acute myeloid leukemia.</a> Science Translational Medicine. 12 (538), (2020).</li>
<li>Bak, R. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+genetic+engineering+of+human+hematopoietic+stem+and+progenitor+cells+using+CRISPR%2FCas9+and+AAV6%5BTitle%5D)+AND+%22eLIFE%22%5BJournal%5D)">Multiplexed genetic engineering of human hematopoietic stem and progenitor cells using CRISPR/Cas9 and AAV6.</a> eLIFE. 6, 27873(2017).</li>
<li>Nishimura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sufficiency+for+inducible+Caspase-9+safety+switch+in+human+pluripotent+stem+cells+and+disease+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Sufficiency for inducible Caspase-9 safety switch in human pluripotent stem cells and disease cells.</a> Gene Therapy. 27 (10-11), 525-534 (2019).</li>
<li>Chao, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+AML-iPSCs+reacquire+leukemic+properties+after+differentiation+and+model+clonal+variation+of+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Human AML-iPSCs reacquire leukemic properties after differentiation and model clonal variation of disease.</a> Cell Stem Cell. 20 (3), 329-344 (2017).</li>
<li>Okada, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+prospective+multicenter+phase+II+study+of+intrabone+marrow+transplantation+of+unwashed+cord+blood+using+reduced-intensity+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Haematology%22%5BJournal%5D)">A prospective multicenter phase II study of intrabone marrow transplantation of unwashed cord blood using reduced-intensity conditioning.</a> European Journal of Haematology. 100 (4), 335-343 (2018).</li>
<li>Fink, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capacity+of+the+medullary+cavity+of+tibia+and+femur+for+intra-bone+marrow+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Capacity of the medullary cavity of tibia and femur for intra-bone marrow transplantation in mice.</a> PloS One. 14 (11), 0224576(2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Siringa da 1/2 mL, 27 g</td><td>BD</td><td>305620</td><td>https://www.bd.com/en-ca/offerings/capabilities/bd-luer-lok-syringe-with-attached-needle/305620</td></tr><tr><td>ACK Lysing Buffer</td><td>Qualoty Biological</td><td>118-156-101CS</td><td>https://www.qualitybiological.com/product/ack-lysing-buffer/</td></tr> <tr><td>Irradiatore biologico</td><td>Kimtron</td><td>IC-250</td><td>https://www.kimtron.com/ic-250</td></tr><tr><td>Clorexidina</td><td>Nolvasan</td><td>NDC 54771-8701-1</td><td>https://www.zoetisus.com/products/petcare/nolvasan-skin-and-wound-cleanser</td></tr><tr><td>Alcool etilico, proof 190</td><td>Gold Shield</td><td></td><td>https://goldsd.com/line-card/</td></tr> <tr><td>FACSCanto II&nbsp;</td><td>(Becton Dickinson and Company (BD), Franklin Lakes, NJ, USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale bovino (FBS)</td><td>Citometro</td><td>a flusso https://www.omegascientific.com/product/fetal-bovine-serum-usda-certified/</td> Omega Scientific <td>FB-01</td></tr><tr><td>, AriaII</td><td>Beckton Dickinson (BD)</td><td></td><td>selezione cellulare</td></tr><tr><td>IMDM</td><td>Gibco</td><td>12440053</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/12440053</td></tr><tr><td>Isoflurano, USP</td><td>Dechra</td><td>NDC 17033-094-25</td><td>https://www.dechra-us.com/our-products/us/companion-animal/dog/prescription/isoflurane-usp-inhalation-anesthetic</td></tr><tr><td>NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) topi&nbsp;</td><td>Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME, USA</td><<td>br/> Ceppo #:005557</td><td>Maschio o femmina da sei a dieci settimane&nbsp;</td></tr><tr><td>Unguento oftalmico, USP</td><td>Bausch Lomb</td><td>NDC 24208-780-55</td><td>https://www.bausch.com/contentassets/2914df881e4344a 7a202cc5a0673c977/neomycin-and-polymyxin-b-sulfates-gramicidin-ophthalmic-solution.pdf</td></tr><tr><td>OstiFen Injection (Caprofen)</td><td>VetOne</td><td>NDC 13985-748-20</td><td>http://vetone.net/Default/CatHeaderPage?id=9534ccca-eac5-4d68-8ad8-46436067587b</td></tr><tr><td>PBS, pH 7.4</td><td>fatto in casa</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Penicillina-Streptomicina</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/15140122</td></tr><tr><td>Povidone-iodio</td><td>Betadine</td><td>NDC 67618-155-16</td><td>https://www.betadine.com/veterinary-surgical-scrub-and-solution/</td></tr> <tr><td>TokeOni (negli Stati Uniti)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>808350-5MG</td><td>AkaLumine-HCl/Akaluc; https://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/aldrich/808350</td></tr><tr><td>UltraPure 0.5 M EDTA, pH 8.0</td><td>Invitrogen</td><td>15575020</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/15575020</td></tr><tr><td>Pannello anticorpale per attecchimento (in vivo, midollo osseo di topo)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Antigen</td><td></td><td></td><td><forte>Diluizione</forte></td></tr><tr><td><forte>Antigeni</forte>: Anti-umano CD45 <forte>Fluoroforo</forte>: V450 <forte>Clone</forte>: HI30</td><td>BD Biosciences</td><td>560367</td><td>1:25</td></tr><tr><td><forte>Antigeni</forte>: Anti-topo CD45.1 <forte>Fluoroforo</forte>: PE-Cy7 Clone: A20</td><td>eBioscience</td><td>25-0453-81</td><td>1:50</td></tr><tr><td>Antigen:Anti-mouse TER-119 Fluorophore: PE-Cy5 Clone: TER-119</td><td>eBioscience</td><td>15-5921-83</td><td>1:100</td></tr><tr><td>Antigen:Anti-umano CD3 Fluorophore: APC-Cy7 Clone: SK7</td><td>BD Biosciences</td><td>341090</td><td>1:12.5</td></tr><tr><td>Antigen:Anti-umano CD19 Fluorophore: APC Clone: HIB19</td><td>BD Biosciences</td><td>555415</td><td>1:25</td></tr><tr><td><forte>antigene</forte>:Anti-umano CD33 <forte>fluoroforo</forte>: PE <forte>Clone</forte>: WM53</td><td>BD Biosciences</td><td>555450</td><td>1:25</td></tr><tr><td><forte>Vivo/Colorazione morta</forte></td><td></td><td></td><td><forte>Conc.</forte></td></tr><tr><td>PI</td><td>Invitrogen</td><td></td><td>1 &mu; g/mL</td></tr><tr><td><forte>Perle di compensazione</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Controllo negativo</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td>Vedere le istruzioni per i dettagli</td></tr><tr><td>Ig anti-topo, &kappa;</td><td>BD Biosciences Vedere le</td><td></td><td>istruzioni per i dettagli</td></tr></tbody></table>

le iniezioni intrafemorali semplificate con topi vivi consentono un'analisi continua del midollo osseo

Simplified Intrafemoral Injections Using Live Mice Allow for Continuous Bone Marrow Analysis

Seguendo questi protocolli 1,14,15,16,17,18,19,20, ogni campione è stato trapiantato ed è stato stabilito il modello murino di xenotrapianto. Lo scopo degli esperimenti qui era quello di mostrare l'iniezione di IF con diversi tipi di cellule umane e dopo l'...

Le iniezioni intrafemorali semplificate con topi vivi consentono un'analisi continua del midollo osseo

Despite the complexity of hematopoietic cell transplantation in humans, researchers commonly perform intravenous or intrafemoral (IF) injections in mice. ...

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Il trapianto di midollo osseo fornisce un modo per modificare il genotipo delle cellule del midollo osseo derivate. Se il gene di interesse viene espresso in cellule di midollo osseo sia derivati ​​e non le cellule del midollo osseo derivate, trapianto di midollo osseo può modificare le cellule del midollo osseo derivate da un genotipo diverso senza cambiare la non-genotipo delle cellule del midollo osseo derivate.

Differenziare i ruoli funzionali di espressione genica di cellule immunitarie e non immunitarie in Colite mouse da trapianto di midollo osseo

Un romanzo ad alta risoluzione<em&gt; In vivo</em&gt; Tecnica di imaging per studiare la risposta dinamica di strutture intracraniche alla crescita del tumore e Terapeutica

Questo protocollo descrive una procedura per il campionamento seriale del midollo osseo femorale (BM) senza richiedere il sacrificio di topi. Questa procedura facilita gli studi longitudinali della composizione del midollo osseo dei topi nel tempo e fornisce un accesso seriale alle cellule all'interno del midollo osseo per studi ex vivo e di trapianto.

Femorale aspirazione del midollo osseo in Live Mice

La natura delle interazioni tra staminali e progenitrici di cellule ematopoietiche (HSPCs) e nicchie di midollo osseo è poco conosciuta. Modifiche hardware personalizzato e un protocollo di acquisizione multi-step consentono l'utilizzo di due fotoni e microscopia confocale per immagine ex vivo HSPCs etichettati homed all'interno delle aree del midollo osseo, interazioni monitoraggio e movimento.

In Vivo inseguimento 4-dimensionale di emopoietiche staminali e progenitrici celle di topo adulto cranica di Midollo Osseo

Qui presentiamo un protocollo per la dissezione delle ossa lunghe degli arti posteriori (femori e tibie) dal topo di laboratorio. Descriviamo inoltre una tecnica rapida per l'isolamento del midollo osseo da queste ossa che utilizza la centrifugazione per la rimozione del midollo osseo dallo spazio del midollo osseo.

Murino arto posteriore osso lungo dissezione e isolamento di midollo osseo

Questo manoscritto fornisce la procedura dettagliata dell'iniezione intra-iliaca dell'arteria (IIA), una tecnica per fornire cellule tumorali specificamente ai tessuti degli arti posteriori, comprese le ossa, per stabilire metastasi ossee sperimentali. Sebbene inizialmente stabilito con modelli di tumore al seno, questo protocollo può essere facilmente esteso ad altri tipi di cancro.

Intra-iliaca iniezione per un efficiente e selettivo Modellazione di microscopico metastasi ossee

Il protocollo descrive un nuovo modello di camera a finestra del femore murino che può essere utilizzato per tracciare il movimento delle cellule nel midollo osseo femorale in vivo. La microscopia a fluorescenza multifotone intravitale viene utilizzata per visualizzare tre componenti del midollo osseo femorale (vascolarizzazione, matrice di collagene e neutrofili) nel tempo.

Femore finestra del modello Camera per<em&gt; In Vivo</em&gt; Monitoraggio delle cellule nel midollo osseo murino

Microscopia di fluorescenza intravital (IVFM) del calvarium è applicata in combinazione con i modelli genetici animali per studiare l'homing e l'attecchimento di cellule ematopoietiche in nicchie del midollo osseo (BM).

La combinazione di microscopia di fluorescenza Intravital (IVFM) con modelli genetici per studiare la dinamica di attecchimento delle cellule ematopoietiche per nicchie di midollo osseo

Le iniezioni intrafemorali consentono l'attecchimento di un piccolo numero di cellule staminali e progenitrici ematopoietiche (HSPC), posizionando le cellule direttamente nella cavità del midollo osseo. Qui descriviamo un protocollo sperimentale di iniezione intrafemorale di HSPC umane in topi immunodeficienti.

Iniezione intrafemorale di cellule staminali e progenitrici ematopoietiche umane in topi immunocompromessi 

Qui, viene descritto un metodo basato sulla citometria a fosfoflusso per analizzare la segnalazione a valle delle vie mTORC1, JAK/STAT5 e MAPK in cellule di leucemia mieloide umana acuta xenotrapiantate in topi e ottenute da aspirati di midollo osseo. I livelli di p-STAT5, p-4EBP1, p-RPS6 e p-ERK1/2 vengono misurati simultaneamente utilizzando un citometro a flusso spettrale di nuova generazione ad alta sensibilità.

Citometria intracellulare a fosfoflusso di pazienti con leucemia mieloide acuta Xenotrapianti derivati da pazienti

Impara la tecnica di iniezione intrafemorale semplificata per il trapianto di cellule staminali ematopoietiche nei modelli murini. Questo metodo consente l'innesto sicuro e l'analisi seriale del midollo osseo con campioni di pazienti.

Le iniezioni intrafemorali semplificate con topi vivi consentono un'analisi continua del midollo osseo

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