Name: Isolamento di cellule con informazioni morfologiche e spaziali da campioni di fibrosi sottomucosa orale mediante microdissezione a cattura laser (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-08-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 42 s
Description: Scopri la microdissezione a cattura laser per isolare cellule da campioni di fibrosi sottomucosa orale con informazioni morfologiche e spaziali. Questo metodo consente analisi multi-omiche su tessuti inclusi in paraffina.

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Questo lavoro è stato supportato da sovvenzioni di ricerca della National Nature Science Foundation of China (81671006, 81300894), CAMS Innovation Fund for Medical Sciences (2019-I2M-5-038), National clinical key discipline construction project (PKUSSNKP-202102), Innovation Fund for Outstanding Doctoral Candidate of Peking University Health Science Center (BMU2022BSS001).

Questo studio è stato approvato dal comitato di revisione istituzionale della Scuola e dell'Ospedale dell'Università di Pechino. Il consenso informato è stato ottenuto dai pazienti. I campioni di tessuto utilizzati in questo studio sono stati resi anonimi. Lo schema di studio è illustrato nella Figura 1.
1. Preparazione del campione
<ol><li>Tagliare i tessuti di fibrosi sottomucosa orale fissati in formalina e inclusi in paraffina in sezioni continue di 3 μm e 10 μm di spessore su un microtomo.</li>
	<li>Aprire le sezioni in acqua e poi pescare sugli scivoli. Fissare le sezioni da 3 μM e 10 μm rispettivamente sui vetrini del microscopio ad adesione (vetrino A) e sui vetrini a membrana PEN (vetrino B).</li>
	<li>Mettere i vetrini su una piastra calda a 60 °C per 2 h.</li>
</ol>2. Colorazione ematossilina-eosina
<ol><li>Posizionare i vetrini A e B nello xilene (ATTENZIONE) per 10 minuti e ripetere questo passaggio tre volte.</li>
	<li>Idratare i vetrini A e B in soluzioni di etanolo graduate nell'ordine del 100%, 100%, 90%, 80% e 70% per 1 minuto in ciascuna concentrazione.</li>
	<li>Immergere i vetrini A e B in acqua distillata ultrapura per 30 s</li>
	<li>Posizionare i vetrini A e B nella soluzione di colorante ematossilina Harris per 90 s.</li>
	<li>Immergere i vetrini A e B in acqua distillata ultrapura per 30 secondi e ripetere questo passaggio tre volte.</li>
	<li>Mettere i vetrini A e B in una soluzione di div-ematossilina (ATTENZIONE) per 2 s.</li>
	<li>Immergere i vetrini A e B in acqua distillata ultrapura per 30 secondi e ripetere questo passaggio tre volte.</li>
	<li>Posizionare i vetrini in A e B in una soluzione riblu all'1% per 2 s.</li>
	<li>Immergere i vetrini A e B in acqua distillata ultrapura per 30 secondi e ripetere questo passaggio tre volte.</li>
	<li>Mettere i vetrini in soluzione di eosina per 2 s.</li>
	<li>Immergere i vetrini A e B in acqua distillata ultrapura per 30 secondi e ripetere questo passaggio tre volte.</li>
	<li>Disidratare i vetrini in soluzioni di etanolo graduate nell'ordine del 70%, 80%, 90%, 100% e 100% per 2 secondi in ciascuna concentrazione.</li>
	<li>Metti il vetrino A nello xilene per 3 minuti e ripeti questo passaggio due volte.</li>
	<li>Aggiungere una goccia di mezzo di montaggio (ATTENZIONE) per far scorrere A e coprirlo con un vetro di copertura.</li>
</ol>3. Osservazione della morfologia istologica e microdissezione a cattura laser
<ol><li>Avviare il sistema e il software di microdissezione laser (Figura 2).</li>
	<li>Posizionare il vetrino A sul tavolino e osservare la morfologia istologica per identificare l'area di interesse per la microdissezione laser.</li>
	<li>Rimuovere la diapositiva A e posizionare la diapositiva B in senso inversamente sul tavolino di scorrimento.</li>
	<li>Fare clic sul pulsante Scarica (Figura 2) per estrarre il dispositivo di raccolta. Inserire una provetta di reazione a catena della polimerasi (PCR) nel dispositivo di raccolta e assicurarsi che la provetta sia tenuta fissa. Fare clic sul pulsante OK (Figura 3).</li>
	<li>Selezionare un tappo facendo clic sul cerchio rosso corrispondente che contrassegna il dispositivo di raccolta: Tappi per tubi. Il cerchio selezionato diventerà verde.</li>
	<li>Fare clic sul pulsante Disegna e sul pulsante Disegna + Taglia e utilizzare il mouse per disegnare l'area di interesse.</li>
	<li>Fare clic sul pulsante Avvia taglio per acquisire l'area di interesse; il campione prelevato sarà raccolto dal tappo (Figura 4).</li>
	<li>Fare clic sul pulsante Inferiore per assicurarsi che il campione acquisito venga raccolto (Figura 5).</li>
	<li>Fare clic sul pulsante Campione per acquisire il campione successivo.</li>
	<li>Fare clic sul pulsante Scarica per scaricare la provetta PCR con il campione acquisito.</li>
</ol>

Acquisizione di campioni di tessuto orale di fibrosi sottomucosa per l'analisi spazio-omica

<ol><li>Cai, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+submucous+fibrosis%3A+A+clinicopathological+study+of+674+cases+in+China%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oral+Pathology+%26+Medicine%22%5BJournal%5D)">Oral submucous fibrosis: A clinicopathological study of 674 cases in China.</a> Journal of Oral Pathology & Medicine. 48 (4), 321-325 (2019).</li>
<li>Cai, X., Huang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinicopathological+factors+associated+with+progression+of+oral+submucous+fibrosis%3A+A+population-based+retrospective+study%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Oncology%22%5BJournal%5D)">Clinicopathological factors associated with progression of oral submucous fibrosis: A population-based retrospective study.</a> Oral Oncology. 130, 105949(2022).</li>
<li>Ray, J. G., Chatterjee, R., Chaudhuri, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+submucous+fibrosis%3A+A+global+challenge.+Rising+incidence%2C+risk+factors%2C+management%2C+and+research+priorities%5BTitle%5D)+AND+%22Periodontology+2000%22%5BJournal%5D)">Oral submucous fibrosis: A global challenge. Rising incidence, risk factors, management, and research priorities.</a> Periodontology 2000. 80 (1), 200-212 (2019).</li>
<li>Shih, Y. H., Wang, T. H., Shieh, T. M., Tseng, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+submucous+fibrosis%3A+A+Review+on+etiopathogenesis%2C+diagnosis%2C+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Oral submucous fibrosis: A Review on etiopathogenesis, diagnosis, and therapy.</a> International Journal of Molecular Sciences. 20 (12), 2940(2019).</li>
<li>Cai, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+preliminary+exploration+of+immune+microenvironment+in+oral+leukoplakia+concomitant+with+oral+submucosal+fibrosis%3A+A+comparative+immunohistochemical+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oral+Pathology+%26+Medicine%22%5BJournal%5D)">The preliminary exploration of immune microenvironment in oral leukoplakia concomitant with oral submucosal fibrosis: A comparative immunohistochemical study.</a> Journal of Oral Pathology & Medicine. , (2023).</li>
<li>Warnakulasuriya, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+potentially+malignant+disorders%3A+A+consensus+report+from+an+international+seminar+on+nomenclature+and+classification%2C+convened+by+the+WHO+Collaborating+Centre+for+Oral+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Diseases%22%5BJournal%5D)">Oral potentially malignant disorders: A consensus report from an international seminar on nomenclature and classification, convened by the WHO Collaborating Centre for Oral Cancer.</a> Oral Diseases. 27 (8), 1862-1880 (2021).</li>
<li>Cai, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+validation+of+a+nomogram+prediction+model+for+malignant+transformation+of+oral+potentially+malignant+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Oncology%22%5BJournal%5D)">Development and validation of a nomogram prediction model for malignant transformation of oral potentially malignant disorders.</a> Oral Oncology. 123, 105619(2021).</li>
<li>Murthy, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malignant+transformation+rate+of+oral+submucous+fibrosis%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Medicine%22%5BJournal%5D)">Malignant transformation rate of oral submucous fibrosis: A systematic review and meta-analysis.</a> Journal of Clinical Medicine. 11 (7), 1793(2022).</li>
<li>Kujan, O., Mello, F. W., Warnakulasuriya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malignant+transformation+of+oral+submucous+fibrosis%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Diseases%22%5BJournal%5D)">Malignant transformation of oral submucous fibrosis: A systematic review and meta-analysis.</a> Oral Diseases. 27 (8), 1936-1946 (2020).</li>
<li>Qin, X., Ning, Y., Zhou, L., Zhu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+submucous+fibrosis%3A+Etiological+mechanism%2C+malignant+transformation%2C+therapeutic+approaches+and+targets%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Oral submucous fibrosis: Etiological mechanism, malignant transformation, therapeutic approaches and targets.</a> International Journal of Molecular Sciences. 24 (5), 4992(2023).</li>
<li>Sun, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+and+spatial+dissection+of+precancerous+lesions+underlying+the+initiation+process+of+oral+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Discovery%22%5BJournal%5D)">Single-cell and spatial dissection of precancerous lesions underlying the initiation process of oral squamous cell carcinoma.</a> Cell Discovery. 9 (1), 28(2023).</li>
<li>Zhu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delineating+the+dynamic+evolution+from+preneoplasia+to+invasive+lung+adenocarcinoma+by+integrating+single-cell+RNA+sequencing+and+spatial+transcriptomics%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+%26+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Delineating the dynamic evolution from preneoplasia to invasive lung adenocarcinoma by integrating single-cell RNA sequencing and spatial transcriptomics.</a> Experimental & Molecular Medicine. 54 (11), 2060-2076 (2022).</li>
<li>Ji, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multimodal+analysis+of+composition+and+spatial+architecture+in+human+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Multimodal analysis of composition and spatial architecture in human squamous cell carcinoma.</a> Cell. 182 (2), 497-514 (2020).</li>
<li>Van den Bossche, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microenvironment-driven+intratumoral+heterogeneity+in+head+and+neck+cancers%3A+clinical+challenges+and+opportunities+for+precision+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Resistance+Updates%22%5BJournal%5D)">Microenvironment-driven intratumoral heterogeneity in head and neck cancers: clinical challenges and opportunities for precision medicine.</a> Drug Resistance Updates. 60, 100806(2022).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improvement+in+the+risk+assessment+of+oral+leukoplakia+through+morphology-related+copy+number+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Science+China.+Life+sciences%22%5BJournal%5D)">Improvement in the risk assessment of oral leukoplakia through morphology-related copy number analysis.</a> Science China. Life sciences. 64 (9), 1379-1391 (2021).</li>
<li>Watkins, T. B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pervasive+chromosomal+instability+and+karyotype+order+in+tumour+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Pervasive chromosomal instability and karyotype order in tumour evolution.</a> Nature. 587 (7832), 126-132 (2020).</li>
<li>Odell, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aneuploidy+and+loss+of+heterozygosity+as+risk+markers+for+malignant+transformation+in+oral+mucosa%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Diseases%22%5BJournal%5D)">Aneuploidy and loss of heterozygosity as risk markers for malignant transformation in oral mucosa.</a> Oral Diseases. 27 (8), 1993-2007 (2021).</li>
<li>Wood, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genomic+road+to+invasion-examining+the+similarities+and+differences+in+the+genomes+of+associated+oral+pre-cancer+and+cancer+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Medicine%22%5BJournal%5D)">The genomic road to invasion-examining the similarities and differences in the genomes of associated oral pre-cancer and cancer samples.</a> Genome Medicine. 9 (1), 53(2017).</li>
<li>Venugopal, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+proteomics+based+on+2D+gel+electrophoresis+and+mass+spectrometry+with+validations%3A+Identification+of+a+biomarker+compendium+for+oral+submucous+fibrosis-An+indian+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Personalized+Medicine%22%5BJournal%5D)">Integrated proteomics based on 2D gel electrophoresis and mass spectrometry with validations: Identification of a biomarker compendium for oral submucous fibrosis-An indian study.</a> Journal of Personalized Medicine. 12 (2), 208(2022).</li>
<li>Kundu, P., Pant, I., Jain, R., Rao, S. G., Kondaiah, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+DNA+methylation+changes+in+oral+submucous+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Diseases%22%5BJournal%5D)">Genome-wide DNA methylation changes in oral submucous fibrosis.</a> Oral Diseases. 28 (4), 1094-1103 (2022).</li>
<li>Cai, X., Zhang, H., Li, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-target+pharmacological+mechanisms+of+Salvia+miltiorrhiza+against+oral+submucous+fibrosis%3A+A+network+pharmacology+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Oral+Biology%22%5BJournal%5D)">Multi-target pharmacological mechanisms of Salvia miltiorrhiza against oral submucous fibrosis: A network pharmacology approach.</a> Archives of Oral Biology. 126, 105131(2021).</li>
<li>Xiao, X., Hu, Y., Li, C., Shi, L., Liu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+content+abnormality+in+oral+submucous+fibrosis+concomitant+leukoplakia%3A+A+preliminary+evaluation+of+the+diagnostic+and+clinical+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Diagnostic+Cytopathology%22%5BJournal%5D)">DNA content abnormality in oral submucous fibrosis concomitant leukoplakia: A preliminary evaluation of the diagnostic and clinical implications.</a> Diagnostic Cytopathology. 48 (11), 1111-1114 (2020).</li>
<li>Zhou, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+non-coding+RNA+expression+profile+associated+with+malignant+progression+of+oral+submucous+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oncology%22%5BJournal%5D)">Long non-coding RNA expression profile associated with malignant progression of oral submucous fibrosis.</a> Journal of Oncology. 2019, 6835176(2019).</li>
<li>Lunde, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profiling+of+chromosomal+changes+in+potentially+malignant+and+malignant+oral+mucosal+lesions+from+South+and+Southeast+Asia+using+array-comparative+genomic+hybridization%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Genomics+%26+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Profiling of chromosomal changes in potentially malignant and malignant oral mucosal lesions from South and Southeast Asia using array-comparative genomic hybridization.</a> Cancer Genomics & Proteomics. 11 (3), 127-140 (2014).</li>
<li>Sun, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatially+resolved+metabolomics+to+discover+tumor-associated+metabolic+alterations%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Spatially resolved metabolomics to discover tumor-associated metabolic alterations.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 116 (1), 52-57 (2019).</li>
<li>Ma, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Copy+number+alteration+profiling+facilitates+differential+diagnosis+between+ossifying+fibroma+and+fibrous+dysplasia+of+the+jaws%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Oral+Science%22%5BJournal%5D)">Copy number alteration profiling facilitates differential diagnosis between ossifying fibroma and fibrous dysplasia of the jaws.</a> International Journal of Oral Science. 13 (1), 21(2021).</li>
</ol>

Gli autori dichiarano di non avere alcun conflitto di interessi.

Questo protocollo ha riportato una pipeline per catturare campioni di tessuto OSF con informazioni morfologiche e spaziali per ulteriori analisi spazio-omiche attraverso la microdissezione laser. Dai risultati rappresentativi, abbiamo identificato diversi modelli CNA tra vari campioni correlati alla morfologia.
L'OSF, un tipo di OPMD, è una condizione precancerosa comune del carcinoma orale a cellule squamose6. È stato riportato che l'instabilità genomica è associata al...

La fibrosi sottomucosa orale (OSF) è una malattia cronica e insidiosa che si sviluppa principalmente nella mucosa vestibolare e provoca una limitazione dell'apertura della bocca1. Mentre l'OSF è una malattia multifattoriale, la masticazione della noce di areca o della noce di betel è la causa principale dell'OSF 2,3. A causa di questa abitudine geograficamente specifica, l'OSF è prevalentemente concentrata nelle popolazioni del sud-est e del sud dell'Asia3. Le caratteristiche istologiche comuni dell'OSF includono la deposizione anomala di collagene nel tessuto connettivo sotto l'epitelio della mucosa orale, la stenosi vascolare e l'occlusione1. Il tessuto epiteliale OSF può presentarsi con manifestazioni di atrofia o iperplasia e persino displasia se concomitante con leucoplachia orale 4,5.
L'OSF è definita dall'Organizzazione Mondiale della Sanità come una comune malattia orale potenzialmente maligna (OPMD) che presenta il potenziale per progredire verso il carcinoma orale a cellule squamose con un tasso di trasformazione maligna del 4%-6%6,7,8,9. Il meccanismo alla base della trasformazione maligna di OSF è complesso10. La crescita anormale dell'epitelio, inclusa la displasia e l'atrofia, aumenta il potenziale di cancerogenesi e i fibroblasti senescenti nello stroma possono essere coinvolti nella progressione maligna dell'OSF inducendo la transizione epiteliale-mesenchimale (EMT) attraverso le specie reattive dell'ossigeno (ROS) e altre molecole10.
Le tecnologie per le analisi spazio-omiche hanno generato dati multi-omici con informazioni morfologiche e spaziali che hanno fornito approfondimenti sui meccanismi del cancro11,12,13. Qui, presentiamo un protocollo per catturare popolazioni cellulari correlate alla morfologia da tessuti OSF inclusi in paraffina fissati in formalina mediante microdissezione laser. Le analisi multi-omiche di questi campioni possono superare le sfide dell'eterogeneità intratissutale e aumentare la comprensione della patologia molecolare e dei meccanismi di trasformazione maligna in OSF14.

<table><tbody><tr><td>Vetrini per microscopio di adesione</td><td>CITOTEST</td><td>REF.188105</td><td></td></tr><tr><td>Div-ematossilina</td><td>YiLi</td><td>20230326</td><td></td></tr><tr><td>soluzione di eosina</td><td>BASO</td><td>BA4098</td><td></td></tr><tr><td>Etanolo</td><td>PEKING REAGENTE</td><td>No.32061</td><td></td></tr><tr><td>Harris hematoxylin soluzione colorante</td><td>YiLi</td><td>20230326</td><td></td></tr><tr><td>Piastra riscaldante</td><td>LEICA</td><td>HI1220</td><td></td></tr><tr><td>Sistema di microdissezione a cattura laser</td><td>LEICA</td><td>LMD7</td><td>Macchina</td></tr><tr><td>Microdissezione laser</td><td>LEICA</td><td>8.2.3.7603</td><td>Software</td></tr><tr><td>Mezzo di montaggio Micromount</td><td>LEICA</td><td>REF.3801731</td><td></td></tr><tr><td>Vetro di copertura del</td><td>microscopio CITOTEST</td><td>REF.10212450C</td><td></td></tr><tr><td>Microtomo</td><td>LEICA</td><td>RM2235</td><td></td></tr><tr><td>Provette per PCR</td><td>AXYGEN</td><td>16421959</td><td></td></tr><tr><td>PEN-vetrini LEICA</td><td></td><td>No.11505158</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione Re-blue</td><td>YiLi</td><td>20230326</td><td></td></tr><tr><td>Acqua distillata ultrapura</td><td>Invitrogen</td><td>REF.10977-015</td><td></td></tr><tr><td>REAGENTE PEKING</td><td>xilene</td><td>No.33535</td><td></td></tr></tbody></table>

isolamento di cellule con informazioni morfologiche e spaziali da campioni di fibrosi sottomucosa orale mediante microdissezione a cattura laser

Isolation of Cells with Morphological and Spatial Information from Oral Submucous Fibrosis Samples by Laser Capture Microdissection

La fibrosi sottomucosa orale (OSF) è un tipo comune di disturbo potenzialmente maligno nella cavità orale. L'atrofia dell'epitelio e la fibrosi della lamina propria e della sottomucosa si riscontrano spesso sui vetrini istopatologici. È stato proposto che la displasia epiteliale, l'atrofia epiteliale e i fibroblasti senescenti siano associati alla trasformazione maligna della OSF. Tuttavia, a causa dell'eterogeneità delle malattie orali potenzialmente maligne e del carcinoma orale a cellule squamose, è difficile identificare i meccanismi molecolari specifici della trasformazione maligna nella OSF. Qui, presentiamo un metodo per ottenere un piccolo numero di cellule epiteliali o mesenchimali che trasportano dati morfologici e informazioni spaziali mediante microdissezione a cattura laser su vetrini di tessuto fissati in formalina e inclusi in paraffina. Utilizzando un microscopio, possiamo catturare con precisione il tessuto epiteliale displastico o atrofico su microscala (~500 cellule) e il tessuto subepiteliale fibrotico. Le cellule estratte possono essere valutate mediante sequenziamento del genoma o del trascrittoma per acquisire dati genomici e trascrittomici con informazioni morfologiche e spaziali. Questo approccio rimuove l'eterogeneità del sequenziamento di tessuti OSF e l'interferenza causata dalle cellule in aree non lesionate, consentendo un'analisi spazio-omica precisa del tessuto OSF.

Eseguendo la microdissezione laser dei tessuti OSF, abbiamo catturato campioni di epitelio displastico, stroma sotto l'epitelio displastico, epitelio atrofico e stroma sotto il tessuto epiteliale atrofico (Figura 1). Attraverso l'estrazione del DNA e il sequenziamento dell'intero genoma a bassa profondità, siamo stati in grado di analizzare le alterazioni del numero di copie (CNA) correlate alla morfologia15. La CNA è una forma comune di instabilità genomica associata...

La microdissezione a cattura laser dei tessuti di fibrosi sottomucosa orale consente l'estrazione precisa di cellule dalle regioni istologiche di interesse per l'analisi di dati multi-omici con informazioni morfologiche e spaziali.

Isolamento di cellule con informazioni morfologiche e spaziali da campioni di fibrosi sottomucosa orale mediante microdissezione a cattura laser

Oral submucous fibrosis (OSF) is a common type of potentially malignant disorder in the oral cavity. The atrophy of epithelium and fibrosis of the lamina ...

I nostri principali interessi di ricerca sono i meccanismi di trasformazione maligna nell'ambito dello sviluppo di modelli predittivi di disturbi orali, potenzialmente maligni come la leucoplachia orale e la fibrosi sottomucosa orale. L'analisi genomica trascrittomica, proteomica e altre analisi di sequenziamento multi-omico nell'ambito di modelli di intelligenza artificiale di deep learning vengono utilizzate per studiare la progressione da disturbi orali, potenzialmente maligni, al cancro orale. L'attuale sequenziamento e l'analisi multi-omica si basano principalmente su campioni congelati, ma i disturbi orali, potenzialmente maligni, sono per lo più formalmente fissati in tessuto incluso in paraffina, spesso mediante biopsia, e richiedono lo sviluppo di tecniche sperimentali basate su campioni di paraffina.I campioni di tessuto di paraffina provenienti da disturbi orali, potenzialmente maligni e dal carcinoma a cellule squamose sono disponibili in gran numero e da una varietà di fonti, il che li rende una risorsa molto preziosa per lo studio. Tutti i protocolli possono aiutare a utilizzare appieno queste risorse per comprendere meglio i meccanismi di sviluppo della malattia e di trasformazione maligna.

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Laser Microdissezione Cattura di tessuti di mammiferi

Il video descrive la dissezione laser del modello 3D di co-coltura organotipica con precisione a livello di micron. Nei modelli organotipici 3D, i costituenti stromali come i fibroblasti sono co-coltivati tridimensionalmente con cellule epiteliali tumorali. Il modello 3D funge da strumento sperimentale che consente di studiare l'invasione e le interazioni cancro-stroma in condizioni quasi fisiologiche.

Microdissezione laser: una tecnica per isolare le cellule tumorali del colon-retto invasive da un modello di coltura organotipica 3D

Profiling molecolare delle cellule laser microdissezione e da stroma, modelli di cancro colorettale tissutale sintesi rappresenta un approccio nuovo e manipolabile per caratterizzare e sezionare la biologia distintivo all'interfaccia tra cellule tumorali al fronte invasivo e cancro associato cellule stromali.

Molecular Profiling del microambiente tumorale invasiva in un modello 3-Dimensional delle cellule del cancro colorettale e<em&gt; Ex vivo</em&gt; fibroblasti

Microdissezione è stato ampiamente impiegato per l'esame di DNA, RNA e proteine ​​nel tessuto. Microscopia laser capture (LCM) è il metodo più comunemente usato, ma una nuova tecnica di fresatura, mesodissection, è da poco disponibile. Dimostriamo estrazione di RNA da mesodissected in formalina paraffina fissati diapositive tessuti integrati di Mycobacterium tuberculosis granulomi.

Un nuovo approccio Microdissezione per recuperare<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em&gt; Trascrizioni specifici da formalina paraffina fisso incorporato Lung granulomi

L'isolamento dei singoli neuroni dopaminergici o l'area tegmentale ventrale con immunoistochimica diretta o indiretta è dimostrata tramite microdissezione laser. Parametri per isolamento di tessuto da un vetrino utilizzando un laser a infrarossi e da diapositive membrana utilizzando la combinazione di un laser infrarosso ed ultravioletto sono discussi.

Laser Capture Microdissezione - Una dimostrazione dell&#39;isolamento individuale dopamina neuroni e l&#39;intera area ventrale tegmentale

Analisi dell'espressione genica di un sottogruppo di cellule in un tessuto specifico rappresenta una grande sfida. In questo articolo si descrive come isolare RNA totale di alta qualità da una popolazione di cellule specifiche, combinando un metodo immunomarcatura rapida con microdissezione laser.

RNA isolamento da cellulari sottopopolazioni specifiche utilizzando laser-capture Microdissection combinazione con Rapid immunomarcatura

Qui presentiamo un protocollo per la microdissezione laser-assistita di specifici tipi di cellule vegetali per la profilazione trascrizionale. Sebbene il protocollo sia adatto a diverse specie e tipi di cellule, l'attenzione si concentra sulle cellule altamente inaccessibili della linea germinale femminile, importanti per la riproduzione sessuale e apomittica nel genere delle crocifere Boechera.

Laser-assistita Microdissection (LAM) come strumento per trascrizionale Profiling di tipi di cellule individuali

L'obiettivo del presente protocollo è quello di ottenere campioni di RNA ad alta integrità dai gangli enterici isolati dal tessuto intestinale umano non fissato, appena resecato mediante microdissezione laser (LCM). Questo protocollo prevede preparazione flash-congelati campioni di tessuto intestinale umano, cryosectioning, colorazione etanolica e disidratazione, LCM e l'estrazione di RNA.

Ottimizzazione di Laser Capture Microdissection per l'isolamento dei gangli enterici dal tessuto umano fresco congelato

La microdissezione laser (LMD) è una tecnica sensibile e altamente riproducibile che può essere utilizzata per scoprire percorsi che mediano l'eterogeneità e l'invasione del glioma. Qui, descriviamo un protocollo ottimizzato per isolare le aree discrete dal tessuto glioma utilizzando LMD laser seguito da analisi trascrittomica.

Microdissezione di cattura laser delle sottoregioni del Glioma per la caratterizzazione spaziale e molecolare dell'eterogeneità intratutuale, dell'Oncoflusso e dell'invasione

Questo protocollo descrive un flusso di lavoro ad alto rendimento per la segmentazione guidata dall'intelligenza artificiale delle regioni di interesse confermate dalla patologia da immagini di sezioni di tessuto sottile macchiate per l'arricchimento di popolazioni cellulari risolte in istologia utilizzando la microdissezione laser. Questa strategia include un nuovo algoritmo che consente il trasferimento di demarcazioni che denotano popolazioni cellulari di interesse direttamente ai microscopi...

Microdissezione laser industrializzata guidata dall'intelligenza artificiale per l'analisi proteomica microscalata del microambiente tumorale

Scopri la microdissezione a cattura laser per isolare cellule da campioni di fibrosi sottomucosa orale con informazioni morfologiche e spaziali. Questo metodo consente analisi multi-omiche su tessuti inclusi in paraffina.

Isolamento di cellule con informazioni morfologiche e spaziali da campioni di fibrosi sottomucosa orale mediante microdissezione a cattura laser (Video) | JoVE Journal

Isolamento di cellule con informazioni morfologiche e spaziali da campioni di fibrosi sottomucosa orale mediante microdissezione a cattura laser

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