Name: Iniezione di spermatide rotondo di topo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-01-26T13:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 41 s
Description: Impara la tecnica di iniezione di spermatide rotondo (ROSI) nel topo per migliorare l'efficienza dello sviluppo embrionario. Questo metodo offre potenziali applicazioni cliniche per l'azoospermia non ostruttiva.

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<meta charset="utf8"></head><body>Procedura di iniezione di spermatidi rotondi murini per studiare lo sviluppo embrionale

<ol><li>Redgrove, K. A., McLaughlin, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+immune+response+in+Chlamydia+trachomatis+infection+of+the+male+genital+tract%3A+A+double-edged+sword%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">The role of the immune response in Chlamydia trachomatis infection of the male genital tract: A double-edged sword.</a> Front Immunol. 5, 534(2014).</li>
<li>Yanagimachi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracytoplasmic+injection+of+spermatozoa+and+spermatogenic+cells%3A+Its+biology+and+applications+in+humans+and+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Biomed+Online%22%5BJournal%5D)">Intracytoplasmic injection of spermatozoa and spermatogenic cells: Its biology and applications in humans and animals.</a> Reprod Biomed Online. 10 (2), 247-288 (2005).</li>
<li>Palermo, G., Joris, H., Devroey, P., Van Steirteghem, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pregnancies+after+intracytoplasmic+injection+of+single+spermatozoon+into+an+oocyte%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Pregnancies after intracytoplasmic injection of single spermatozoon into an oocyte.</a> Lancet. 340 (8810), 17-18 (1992).</li>
<li>Kimura, Y., Yanagimachi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+oocytes+injected+with+testicular+spermatozoa+or+round+spermatids+can+develop+into+normal+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Mouse oocytes injected with testicular spermatozoa or round spermatids can develop into normal offspring.</a> Development. 121 (8), 2397-2405 (1995).</li>
<li>Tesarik, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spermatid+injection+into+human+oocytes.+II.+Clinical+application+in+the+treatment+of+infertility+due+to+non-obstructive+azoospermia%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reprod%22%5BJournal%5D)">Spermatid injection into human oocytes. II. Clinical application in the treatment of infertility due to non-obstructive azoospermia.</a> Human Reprod. 11 (4), 780-783 (1996).</li>
<li>Tesarik, J., Mendoza, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spermatid+injection+into+human+oocytes.+I.+Laboratory+techniques+and+special+features+of+zygote+development%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reprod%22%5BJournal%5D)">Spermatid injection into human oocytes. I. Laboratory techniques and special features of zygote development.</a> Human Reprod. 11 (4), 772-779 (1996).</li>
<li>Hirabayashi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+regimens+for+full-term+development+of+rabbit+oocytes+injected+with+round+spermatids%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Reprod+Dev%22%5BJournal%5D)">Activation regimens for full-term development of rabbit oocytes injected with round spermatids.</a> Mol Reprod Dev. 76 (6), 573-579 (2009).</li>
<li>Ogonuki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Birth+of+a+marmoset+following+injection+of+elongated+spermatid+from+a+prepubertal+male%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Reprod+Dev%22%5BJournal%5D)">Birth of a marmoset following injection of elongated spermatid from a prepubertal male.</a> Mol Reprod Dev. 86 (8), 928-930 (2019).</li>
<li>Niederberger, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Forty+years+of+IVF%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil+Steril%22%5BJournal%5D)">Forty years of IVF.</a> Fertil Steril. 110 (2), 185(2018).</li>
<li>Gross, K. X., Hanson, B. M., Hotaling, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Round+spermatid+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Urol+Clin+North+Am%22%5BJournal%5D)">Round spermatid injection.</a> Urol Clin North Am. 47 (2), 175-183 (2020).</li>
<li>Hanson, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Round+spermatid+injection+into+human+oocytes%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Asian+J+Androl%22%5BJournal%5D)">Round spermatid injection into human oocytes: a systematic review and meta-analysis.</a> Asian J Androl. 23 (4), 363-369 (2021).</li>
<li>Tekayev, M., Vuruskan, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+values+and+advances+in+round+spermatid+injection+%28ROSI%29%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Biol%22%5BJournal%5D)">Clinical values and advances in round spermatid injection (ROSI).</a> Reprod Biol. 21 (3), 100530(2021).</li>
<li>Tanaka, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fourteen+babies+born+after+round+spermatid+injection+into+human+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Fourteen babies born after round spermatid injection into human oocytes.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 112 (47), 14629-14634 (2015).</li>
<li>Tanaka, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ninety+babies+born+after+round+spermatid+injection+into+oocytes%3A+survey+of+their+development+from+fertilization+to+2+years+of+age%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil+Steril%22%5BJournal%5D)">Ninety babies born after round spermatid injection into oocytes: survey of their development from fertilization to 2 years of age.</a> Fertil Steril. 110 (3), 443-451 (2018).</li>
<li>Yang, H., Shi, L., Chen, C. D., Li, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mice+generated+after+round+spermatid+injection+into+haploid+two-cell+blastomeres%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Mice generated after round spermatid injection into haploid two-cell blastomeres.</a> Cell Res. 21 (5), 854-858 (2011).</li>
<li>Moreira, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+mouse+offspring+generated+by+ROSI%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Dev%22%5BJournal%5D)">Transgenic mouse offspring generated by ROSI.</a> J Reprod Dev. 62 (1), 37-42 (2016).</li>
<li>Federici, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Round+spermatid+injection+rescues+female+lethality+of+a+paternally+inherited+Xist+deletion+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Round spermatid injection rescues female lethality of a paternally inherited Xist deletion in mouse.</a> PLoS Genet. 12 (10), e1006358(2016).</li>
<li>Sakamoto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paternally+inherited+H3K27me3+affects+chromatin+accessibility+in+mouse+embryos+produced+by+round+spermatid+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Paternally inherited H3K27me3 affects chromatin accessibility in mouse embryos produced by round spermatid injection.</a> Development. 149 (18), 200696(2022).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+multiomics+sequencing+reveals+the+reprogramming+defects+in+embryos+generated+by+round+spermatid+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Single-cell multiomics sequencing reveals the reprogramming defects in embryos generated by round spermatid injection.</a> Sci Adv. 8, (2022).</li>
<li>Ward, M. A., Yanagimachi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracytoplasmic+sperm+injection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Intracytoplasmic sperm injection in mice.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2018 (1), (2018).</li>
<li>Yoshida, N., Perry, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Piezo-actuated+mouse+intracytoplasmic+sperm+injection+%28ICSI%29%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Piezo-actuated mouse intracytoplasmic sperm injection (ICSI).</a> Nat Protoc. 2 (2), 296-304 (2007).</li>
<li>Zhu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FACS+selection+of+valuable+mutant+mouse+round+spermatids+and+strain+rescue+via+round+spermatid+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Zygote%22%5BJournal%5D)">FACS selection of valuable mutant mouse round spermatids and strain rescue via round spermatid injection.</a> Zygote. 23 (3), 336-341 (2013).</li>
<li>Kong, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+the+histone+deacetylase+inhibitor+%27Scriptaid%27+on+the+developmental+competence+of+mouse+embryos+generated+through+round+spermatid+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Reprod%22%5BJournal%5D)">Effects of the histone deacetylase inhibitor 'Scriptaid' on the developmental competence of mouse embryos generated through round spermatid injection.</a> Hum Reprod. 32 (1), 76-87 (2017).</li>
<li>Hosseini, S., Salehi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tricostatin+A-treated+round+spermatid+enhances+preimplantation+embryo+developmental+competency+following+round+spermatid+injection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Zygote%22%5BJournal%5D)">Tricostatin A-treated round spermatid enhances preimplantation embryo developmental competency following round spermatid injection in mice.</a> Zygote. 30 (3), 373-379 (2022).</li>
<li>Kishigami, S., Wakayama, S., Nguyen, V. T., Wakayama, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Similar+time+restriction+for+intracytoplasmic+sperm+injection+and+round+spermatid+injection+into+activated+oocytes+for+efficient+offspring+production%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Similar time restriction for intracytoplasmic sperm injection and round spermatid injection into activated oocytes for efficient offspring production.</a> Biol Reprod. 70 (6), 1863-1869 (2004).</li>
<li>Tao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oocyte+activation+during+round+spermatid+injection%3A+state+of+the+art%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Biomed+Online%22%5BJournal%5D)">Oocyte activation during round spermatid injection: state of the art.</a> Reprod Biomed Online. 45 (2), 211-218 (2022).</li>
<li>Ogura, A., Ogonuki, N., Miki, H., Inoue, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microinsemination+and+nuclear+transfer+using+male+germ+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Rev+Cytol%22%5BJournal%5D)">Microinsemination and nuclear transfer using male germ cells.</a> Int Rev Cytol. 246, 189-229 (2005).</li>
<li>Kimura, Y., Yanagimachi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracytoplasmic+sperm+injection+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Intracytoplasmic sperm injection in the mouse.</a> Biol Reprod. 52 (4), 709-720 (1995).</li>
<li>Ogonuki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-speed+congenic+strategy+using+first-wave+male+germ+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A high-speed congenic strategy using first-wave male germ cells.</a> PLoS One. 4 (3), e4943(2009).</li>
<li>Abdelaal, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fertility+preservation+for+pediatric+male+cancer+patients%3A+illustrating+contemporary+and+future+options%3B+a+case+report%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Androl+Urol%22%5BJournal%5D)">Fertility preservation for pediatric male cancer patients: illustrating contemporary and future options; a case report.</a> Transl Androl Urol. 10 (1), 520-526 (2021).</li>
<li>Eyni, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+bioengineering+of+male+germ+stem+cells+to+preserve+fertility%5BTitle%5D)+AND+%22J+Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Advanced bioengineering of male germ stem cells to preserve fertility.</a> J Tissue Eng. 12, (2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>CaCl22H2O&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>C7902&nbsp;</td><td>Preparazione della CZB</td></tr><tr><td>Glucosio&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>G6152&nbsp;</td><td>Preparazione della CZB</td></tr><tr><td>HEPES-Na (base)&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>H3784&nbsp;</td><td>Preparazione della CZB</td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Beyotime&nbsp;</td><td>C1025</td><td>FACS</td></tr><tr><td>gonadotropina corionica umana (HCG)</td> <td>Ningbo Seconda azienda ormonale</td><td>HCG</td><td>Farmaci che promuovono l'ovulazione</td></tr><tr><td>Ialuronidasi</td><td>Sigma</td><td>H3506</td><td>Rimozione delle cellule della granulosa intorno all'ovocita</td></tr><tr><td>KCl&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P5405</td><td>Preparazione di CZB</td></tr><tr><td>KH2PO4&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P5655&nbsp;</td><td>Preparazione della CZB</td></tr><tr><td>KSOMaa</td><td>Caisson Labs</td><td>IVL04-100ML</td><td>Terreno ottimizzato per simplex di potassio integrato con aminoacidi</td></tr><tr><td>L-glutammina&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>G8540&nbsp;</td><td>Preparazione della CZB</td></tr><tr><td>M2</td><td>Sigma</td><td>M7167-50ML</td><td>Fluido operativo</td></tr><tr><td>MgSO47H2O&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>M1880&nbsp;</td><td>Preparazione della CZB</td></tr><tr><td>Na2-EDTA2H2O&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>E5134&nbsp;</td><td>Preparazione della CZB</td></tr><tr><td>NaCl&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>S5886</td><td>Preparazione di CZB</td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sigma</td><td>S5761&nbsp;</td><td>Preparazione della CZB</td></tr><tr><td>Sciroppo di nalattato 60% d = 1,32 g/L</td><td>Sigma</td><td>L7900&nbsp;</td><td>Preparazione della CZB</td></tr><tr><td>Na-piruvato&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P4562&nbsp;</td><td>Preparazione della CZB</td></tr><tr><td>Punte per trapano piezoelettrico (ICSI)&nbsp;</td><td>Eppendorf&nbsp;</td><td>piezoXpert</td><td>Rottura della membrana piezoelettrica</td></tr><tr><td>gonadotropina sierica della cavalla incinta (PMSG)</td><td>Ningbo Seconda azienda ormonale</td><td>PMSG</td><td>Farmaci che promuovono l'ovulazione</td></tr><tr><td>PVA&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P8136</td><td>Preparazione di CZB</td></tr></tbody></table>

iniezione di spermatide rotondo di topo

Mouse Round Spermatid Injection

Abbiamo iniziato la nostra indagine esaminando l'effetto dell'AOA sulla capacità di sviluppo degli embrioni. Un'illustrazione schematica del disegno sperimentale è mostrata nella Figura 1A. Prima dell'iniezione dello spermatozoo, gli ovociti sono stati sottoposti ad AOA (A-ICSI) o non sono stati trattati (ICSI). I dati dettagliati sullo sviluppo embrionale sono presentati nella Tabella 1. I risultati non hanno rivelato differenze significative nella scissione, nella blastocisti o nei tassi di natalità tra i gruppi A-ICSI e ICSI (P &gt; 0,05; Figura 1B). Questi risultati indicano che l'AOA con 10 mM di SrCl2 per 20 minuti non ha influenzato il potenziale di sviluppo degli embrioni.
In precedenza era stato riportato che non vi erano differenze percepibili nell'efficienza dello sviluppo degli embrioni ROSI selezionati mediante FACS o mediante esame visivo diretto al microscopio22. I nostri esperimenti hanno utilizzato la tecnologia FACS per identificare RS (Figure 2A, B). Al microscopio, gli spermatidi rotondi di topo avevano un diametro di circa 10 μm e mostravano una struttura nucleolica simile a una sporgenza al centro (Figura 2C). Ipotizziamo che la selezione attraverso la FACS sia più accurata dell'esame visivo diretto al microscopio. Inoltre, la letteratura supporta l'esplorazione diretta della RS attraverso le differenze morfologiche. Gli embrioni ROSI sono stati generati utilizzando due metodi distinti: il gruppo A-ROSI, in cui gli ovociti sono stati sottoposti ad AOA prima dell'iniezione di spermatide rotondo, e il gruppo ROSI-A, in cui gli ovociti sono stati sottoposti ad AOA dopo l'iniezione di spermatide rotondo. Il diagramma schematico del disegno sperimentale è mostrato nella Figura 1C. In particolare, non sono state riscontrate differenze significative nei tassi di clivaggio e blastocisti tra i gruppi A-ROSI, ROSI-A e ICSI (P &gt; 0,05; Figura 1D). I tassi di blastocisti dei gruppi A-ROSI, ROSI-A e ICSI erano significativamente più alti di quelli del gruppo di attivazione (P &lt; 0,05; Figura 1D). Tuttavia, il tasso di natalità del gruppo ROSI era inferiore a quello del gruppo ICSI, indipendentemente dal fatto che gli ovociti fossero attivati prima o dopo l'iniezione (P &lt; 0,05; Figura 1D). È importante sottolineare che il tasso di natalità del gruppo A-ROSI era leggermente superiore a quello del gruppo ROSI-A (Figura 1D). Ulteriori dettagli sui dati sullo sviluppo embrionale sono presentati nella Tabella 1.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65898/65958fig01.jpg"> 
Figura 1: Gli embrioni ROSI hanno mostrato una ridotta efficienza di sviluppo rispetto agli embrioni ICSI. (A) Illustrazione schematica del protocollo sperimentale che valuta l'effetto dell'attivazione sullo sviluppo embrionale dell'ICSI. Blu = Gli ovociti non sono stati attivati; Giallo = Gli ovociti sono stati attivati. (B) Efficienza dello sviluppo degli embrioni derivati da A-ICSI e ICSI. (C) Illustrazione schematica del protocollo sperimentale per la generazione di diversi tipi di embrioni. (D) Efficienza dello sviluppo degli embrioni derivati da A-ROSI, ROSI-A, A e ICSI. **, P &lt; 0,01. Abbreviazioni: A= Attivazione E= Giorno embrionale; ROSI= Iniezione di spermatide rotondo; ICSI= Iniezione intracitoplasmatica di spermatozoi. Le barre di errore mostrano la deviazione standard. Il confronto dei tassi viene condotto utilizzando il test del chi-quadrato. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65898/65958fig01large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65898/65958fig02.jpg"> 
Figura 2: Gli spermatidi rotondi sono stati selezionati tramite smistamento citofluorimetrico. (A) Per la selezione degli spermatidi rotondi è stato utilizzato un diagramma di smistamento citofluorimetrico. (B) Immagini rappresentative che mostrino la selezione di spermatidi rotondi. Barra di scala: 10 μm. Abbreviazioni: FSC = Forward scatter; SSC = dispersione laterale; 355 è la lunghezza d'onda di eccitazione; 460/50 e 670/30 sono due canali di rilevamento sotto laser a 355 lunghezze d'onda. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65898/65958fig02large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td rowspan="2">Gruppi</td>
			<td colspan="3">Sviluppo preimpianto</td>
			<td colspan="2">Sviluppo post-impianto</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Replica</td>
			<td>Tasso di scissione (%)</td>
			<td>Tasso di blastocisti (%)</td>
			<td>Embrioni a 2 cellule trasferiti/ N. dei destinatari</td>
			<td>Tasso di natalità (%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A-ICSI</td>
			<td>5</td>
			<td>99.33 (149/150)</td>
			<td>75.17 (112/149)</td>
			<td>49/5</td>
			<td>48.98 (24/49)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A-ROSI</td>
			<td>5</td>
			<td>99.33 (149/150)</td>
			<td>73.83 (110/149)</td>
			<td>44/5</td>
			<td>18.18 (8/44) **</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ROSI-A</td>
			<td>5</td>
			<td>98.00 (147/150)</td>
			<td>64.63 (95/147)</td>
			<td>45/5</td>
			<td>13.33 (6/45) **</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Attivazione</td>
			<td>5</td>
			<td>100.00 (150/150)</td>
			<td>12.00 (18/150) **</td>
			<td>51/5</td>
			<td>0.00 (0/51) **</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ICSI</td>
			<td>5</td>
			<td>98.00 (147/150)</td>
			<td>73.47 (108/147)</td>
			<td>46/5</td>
			<td>52.17 (24/46)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabella 1. L'efficienza dello sviluppo di embrioni derivati da gruppi diversi.
Tabella supplementare 1. La proporzione di diverse popolazioni cellulari ordinate mediante citometria a flusso. La parte P3 è costituita da spermatidi rotondi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65898/Supplementary%20Table%201_RE.zip" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo file.</a>

Iniezione di spermatide rotondo di topo

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Applicazione delle cellule staminali embrionali aploidi partinogenetiche del topo come sostituto dello sperma

Questo articolo riporta un'inibizione in vivo di CENP-E attraverso la chirurgia addominale e l'iniezione testicolare di GSK923295, un valido modello per la divisione meiotica maschile. Utilizzando i saggi di immunofluorescenza, citometria a flusso e microscopia elettronica a trasmissione, dimostriamo che l'inibizione di CENP-E provoca disallineamento cromosomico e instabilità del genoma negli spermatociti di topo.

Valutazione funzionale della kinesina-7 CENP-E negli spermatociti mediante inibizione in vivo , immunofluorescenza e citometria a flusso

Il metodo di manipolazione cervicale presentato può indurre pseudogravidanza nei topi senza la necessità di riproduttori di femmine con maschi vasectomizzati. L'induzione della pseudogravidanza è necessaria per il successo del trasferimento di embrioni non chirurgico e dell'inseminazione artificiale non chirurgica, entrambi presentati.

Indurre una pseudogravidanza in topi femmina senza la necessità di maschi vasectomizzati prima del trasferimento di embrioni non chirurgici o dell'inseminazione artificiale

Il modello murino AcroSensE e i metodi di imaging di cellule vive qui descritti forniscono un nuovo approccio allo studio della dinamica del calcio nel compartimento subcellulare dell'acrosoma spermatico e di come regolano i passaggi intermedi che portano alla fusione della membrana e all'esocitosi dell'acrosoma.

Imaging in tempo reale della dinamica del calcio acrosomiale e dell'esocitosi in spermatozoi di topo vivi

Qui, presentiamo un protocollo per stabilire un modello murino di iniezione intracitoplasmatica di spermatozoi (ICSI)-trasferimento di embrioni (ET), che ci consente di osservare i cambiamenti legati all'età nel metabolismo del glucosio che possono essere attribuiti all'ICSI, fornendo informazioni sui suoi potenziali impatti a lungo termine sullo sviluppo umano.

Monitoraggio della glicemia nella prole di topo dopo l'iniezione intracitoplasmatica di spermatozoi

Impara la tecnica di iniezione di spermatide rotondo (ROSI) nel topo per migliorare l'efficienza dello sviluppo embrionario. Questo metodo offre potenziali applicazioni cliniche per l'azoospermia non ostruttiva.

Iniezione di spermatide rotondo di topo

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