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DOI: 10.3791/66060-v
Rosario Perez-Pedroza1,2, Manola Moretti1,2,3, Charlotte A. E. Hauser1,2,3
1Laboratory for Nanomedicine, Biological & Environmental Science & Engineering,King Abdullah University of Science and Technology, 2Computational Bioscience Research Center,King Abdullah University of Science and Technology, 3Red Sea Research Center,King Abdullah University of Science and Technology
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Questo protocollo mira a valutare peptidi biofunzionali autoassemblanti per l'adesione cellulare, la morfologia degli organoidi e l'espressione genica mediante immunocolorazione. Utilizzeremo una linea cellulare di cancro del colon-retto per fornire un modo economico per ottenere organoidi per test intensivi.
La nostra ricerca mira a valutare peptidi autoassemblanti ultracorti come matrici per colture di organoidi di cancro del colon-retto. Affrontiamo questioni sulla morfologia degli organoidi, sulla vitalità, sulla proliferazione, sull'adesione e sull'impatto della biofunzionalizzazione. L'obiettivo è ottimizzare la composizione delle matrici peptidiche per un'efficace crescita degli organoidi e contribuire alla medicina rigenerativa.
Le tecnologie all'avanguardia nel nostro campo riguardano la biostampa 3D per la fabbricazione organica precisa, piattaforme microfluidiche per ambienti di coltura dinamici e strumenti di imaging avanzati come la microscopia a forza atomica e la microscopia multifotonica. L'editing genetico CRISPR-Cas9 perfeziona la modificazione genetica, mentre il sequenziamento dell'RNA a singola cellula fornisce approfondimenti molecolari. Le attuali sfide sperimentali includono il miglioramento della riproducibilità degli organoidi, il perfezionamento della vascolarizzazione per costrutti più grandi e l'imitazione di complesse architetture tissutali.
Il superamento di queste limitazioni nella coltura a lungo termine e l'incorporazione di componenti immunitarie nei modelli sono aree attive. Raggiungere protocolli standardizzati e affrontare le preoccupazioni etiche che si oppongono alle sfide in corso in questo campo. Risultati significativi nel nostro campo includono la dimostrazione dell'idoneità di peptidi autoassemblanti ultracorti per colture di organoidi.
Abbiamo dimostrato la versatilità, la riproducibilità e la stabilità di questi peptidi, fornendo una piattaforma per la messa a punto di microambienti. Ciò contribuisce a far progredire gli studi basati sugli organoidi, la medicina rigenerativa e la ricerca sugli idrogel biofunzionalizzati. Il nostro protocollo colma le lacune della ricerca, fornendo un approccio sistematico alla valutazione degli organoidi in matrici peptidiche autoassemblanti ultracorte.
Risponde alla necessità di metodi standardizzati per valutare il comportamento cellulare all'interno di queste matrici, aiutando nella progettazione duratura di idrogel a base di peptidi per una crescita ottimale degli organoidi e facendo progredire gli studi di medicina rigenerativa.
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