Ex Vivo Coltura di cellule tumorali circolanti nel liquido cerebrospinale da pazienti con melanoma per studiare la malattia leptomeningea associata al melanoma
March 29th, 2024
Questo articolo descrive un protocollo per la propagazione delle cellule tumorali circolanti nel liquido cerebrospinale (CSF-CTC) raccolte da pazienti con malattia leptomeningea associata a melanoma (M-LMD) per sviluppare modelli preclinici per lo studio di M-LMD.
La malattia leptomeningea da melanoma o MLMD è una forma aggressiva di metastasi delle meningi, in cui le cellule tumorali circolanti o CTC si infiltrano nel liquido cerebrospinale. Purtroppo, non esistono trattamenti efficaci per la MLMD, quindi comprenderne la biologia aiuterà a sviluppare terapie per ridurre la mortalità. Recenti rapporti hanno dimostrato come le CTC possano colonizzare l'ambiente del liquor cicatriziale dei nutrienti, ad esempio utilizzando la capacità di eliminazione del ferro per migliorare la loro sopravvivenza e integrare il C3 per promuovere l'invasione nel liquido cerebrospinale attraverso il plesso coroideo.
Pertanto, i CTC sono ottimi strumenti per studiare la MLMD. La sfida più grande nello studio delle CTC del liquido cerebrospinale è la mancanza generale di un modello preclinico e la scarsità di queste cellule. Trovare modi per far crescere queste cellule rare e fragili dai pazienti e generare un modello di xenotrapianto sarà di grande beneficio per i ricercatori nella comprensione della patologia MLMD e nella progettazione di terapie razionali.
Abbiamo sviluppato un metodo che ha propagato con successo le CTC del CSF da pazienti con MLMD in vitro e in vivo, che ci ha fornito la capacità di eseguire analisi molecolari e funzionali delle cellule MLMD, nonché studi di efficacia in modelli di xenotrapianto. Sebbene le metodologie attuali siano imperfette, essere in grado di coltivare ed espandere per la prima volta le CTC del liquido cerebrospinale da pazienti con melanoma, ci ha fornito informazioni sull'importanza di comprendere i microambienti del liquido cerebrospinale.
Panoramica
Questo articolo descrive un protocollo per la propagazione delle cellule tumorali circolanti nel liquido cerebrospinale (CSF-CTC) raccolte da pazienti con malattia leptomeningea associata al melanoma (M-LMD) per sviluppare modelli preclinici per studiare la M-LMD.
Componenti principali dello studio
Area della scienza
- Neuroscienze
- Oncologia
- Biologia cellulare
Contesto
- La malattia leptomeningea da melanoma (M-LMD) è una forma grave di metastasi.
- Le CTC infiltrano il liquido cerebrospinale, complicando le opzioni di trattamento.
- Comprendere la biologia delle CTC è cruciale per sviluppare terapie efficaci.
- Le metodologie attuali per studiare le CTC nel CSF sono limitate.
Obiettivo dello studio
- Propagare le CTC del CSF da pazienti con M-LMD.
- Generare modelli preclinici per studiare la patologia M-LMD.
- Facilitare le analisi molecolari e funzionali delle cellule M-LMD.
Metodi utilizzati
- Pre-rivestire le fiale T175 con poli-l-lisina per la coltura cellulare.
- Utilizzare cellule meningee umane per creare un terreno condizionato.
- Centrifugazione ed elaborazione dei campioni di liquido cerebrospinale.
- Stabilire modelli di xenotrapianto in topi immunodepressi.
Risultati principali
- Propagazione di successo delle CTC del CSF in vitro e in vivo.
- Conoscenze acquisite sul ruolo del microambiente del CSF nella sopravvivenza delle CTC.
- Identificazione di fattori di crescita che migliorano la coltura delle CTC.
- Sviluppo di una metodologia per studiare efficacemente la M-LMD.
Conclusioni
- La propagazione delle CTC del CSF fornisce uno strumento prezioso per la ricerca sulla M-LMD.
- Comprendere la biologia delle CTC può portare a nuove strategie terapeutiche.
- È necessario affinare ulteriormente le metodologie per ottenere risultati ottimali.
Domande frequenti
Chapters in this video
0:00
Introduction
1:36
Preparation of Human Meningeal Cell (HMC) Conditioned Media and Collection of Cerebrospinal Fluid for the Culture of Circulating Tumor Cells
3:23
In Vitro Culture and Expansion of Cerebro Spinal Fluid (CSF)-Circulating Tumor Cells (CTCs) for the Study of Leptomeningeal Disease
4:24
CSF Collection from Mice with Leptomeningeal Disease for Subsequent Clone Expansion
