Name: Analisi quantitativa della stabilizzazione della membrana del reticolo endoplasmatico (MAM) associata ai mitocondri in un modello neurale della malattia di Alzheimer (AD) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-10T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 41 s
Description: Impara a misurare quantitativamente la stabilizzazione delle membrane MAM in neuroni vivi per studiare la malattia di Alzheimer. Questo metodo innovativo utilizza l'imaging cellulare in tempo reale per valutare la dinamica mitocondriale.

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<meta charset="utf8"></head><body>Stabilizzazione dei MAM in un modello neurale 3D di Alzheimer

<ol><li>Giacomello, M., Pellegrini, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+coming+of+age+of+the+mitochondria-ER+contact%3A+a+matter+of+thickness%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">The coming of age of the mitochondria-ER contact: a matter of thickness.</a> Cell Death Differ. 23 (9), 1417-1427 (2016).</li>
<li>Degechisa, S. T., Dabi, Y. T., Gizaw, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mitochondrial+associated+endoplasmic+reticulum+membranes%3A+A+platform+for+the+pathogenesis+of+inflammation-mediated+metabolic+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Immun+Inflamm+Dis%22%5BJournal%5D)">The mitochondrial associated endoplasmic reticulum membranes: A platform for the pathogenesis of inflammation-mediated metabolic diseases.</a> Immun Inflamm Dis. 10 (7), e647(2022).</li>
<li>Schon, E. A., Area-Gomez, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria-associated+ER+membranes+in+Alzheimer+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mitochondria-associated ER membranes in Alzheimer disease.</a> Mol Cell Neurosci. 55, 26-36 (2013).</li>
<li>Erpapazoglou, Z., Mouton-Liger, F., Corti, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+dysfunctional+endoplasmic+reticulum-mitochondria+coupling+to+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochem+Int%22%5BJournal%5D)">From dysfunctional endoplasmic reticulum-mitochondria coupling to neurodegeneration.</a> Neurochem Int. 109, 171-183 (2017).</li>
<li>Sala-Vila, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interplay+between+hepatic+mitochondria-associated+membranes%2C+lipid+metabolism+and+caveolin-1+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Interplay between hepatic mitochondria-associated membranes, lipid metabolism and caveolin-1 in mice.</a> Sci Rep. 6, 27351(2016).</li>
<li>Fujimoto, M., Hayashi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+into+the+role+of+mitochondria-associated+endoplasmic+reticulum+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Rev+Cell+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">New insights into the role of mitochondria-associated endoplasmic reticulum membrane.</a> Int Rev Cell Mol Biol. 292, 73-117 (2011).</li>
<li>Hung, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+mapping+of+cytosol-facing+outer+mitochondrial+and+ER+membranes+in+living+human+cells+by+proximity+biotinylation%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Proteomic mapping of cytosol-facing outer mitochondrial and ER membranes in living human cells by proximity biotinylation.</a> eLife. 6, e24463(2017).</li>
<li>Area-Gomez, E., Schon, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+pathogenesis+of+Alzheimer%27s+disease%3A+The+MAM+hypothesis%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">On the pathogenesis of Alzheimer's disease: The MAM hypothesis.</a> FASEB J. 31 (3), 864-867 (2017).</li>
<li>Rizzuto, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Close+contacts+with+the+endoplasmic+reticulum+as+determinants+of+mitochondrial+Ca2%2B+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Close contacts with the endoplasmic reticulum as determinants of mitochondrial Ca2+ responses.</a> Science. 280 (5370), 1763-1766 (1998).</li>
<li>Sukhorukov, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+of+interactions+between+mitochondria+and+the+endoplasmic+reticulum%3A+A+new+look+at+how+important+cell+functions+are+supported%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms of interactions between mitochondria and the endoplasmic reticulum: A new look at how important cell functions are supported.</a> Mol Biol. 56 (1), 59-71 (2022).</li>
<li>Zhang, P., Konja, D., Zhang, Y., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Communications+between+Mitochondria+and+endoplasmic+reticulum+in+the+regulation+of+metabolic+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Communications between Mitochondria and endoplasmic reticulum in the regulation of metabolic homeostasis.</a> Cells. 10 (9), 2195(2021).</li>
<li>Ziegler, D. V., Martin, N., Bernard, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+senescence+links+mitochondria-ER+contacts+and+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">Cellular senescence links mitochondria-ER contacts and aging.</a> Commun Biol. 4 (1), 1323(2021).</li>
<li>Csordas, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+functional+features+and+significance+of+the+physical+linkage+between+ER+and+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Structural and functional features and significance of the physical linkage between ER and mitochondria.</a> J Cell Biol. 174 (7), 915-921 (2006).</li>
<li>Cieri, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SPLICS%3A+a+split+green+fluorescent+protein-based+contact+site+sensor+for+narrow+and+wide+heterotypic+organelle+juxtaposition%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">SPLICS: a split green fluorescent protein-based contact site sensor for narrow and wide heterotypic organelle juxtaposition.</a> Cell Death Differ. 25 (6), 1131-1145 (2018).</li>
<li>Carpio, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BOK+controls+apoptosis+by+Ca%282%2B%29+transfer+through+ER-mitochondrial+contact+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">BOK controls apoptosis by Ca(2+) transfer through ER-mitochondrial contact sites.</a> Cell Rep. 34 (10), 108827(2021).</li>
<li>Prudent, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MAPL+SUMOylation+of+Drp1+stabilizes+an+ER%2Fmitochondrial+platform+required+for+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">MAPL SUMOylation of Drp1 stabilizes an ER/mitochondrial platform required for cell death.</a> Mol Cell. 59 (6), 941-955 (2015).</li>
<li>Zellmer, J. C., Tarantino, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stabilization+of+mitochondria-associated+endoplasmic+reticulum+membranes+regulates+Abeta+generation+in+a+three-dimensional+neural+model+of+Alzheimer%E2%80%99s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Alzheimer%E2%80%99s+Dement%22%5BJournal%5D)">Stabilization of mitochondria-associated endoplasmic reticulum membranes regulates Abeta generation in a three-dimensional neural model of Alzheimer’s disease.</a> Alzheimer’s Dement. , 1-20 (2024).</li>
<li>Magalhaes Rebelo, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+modulation+of+mitochondria-endoplasmic+reticulum+contact+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Chemical modulation of mitochondria-endoplasmic reticulum contact sites.</a> Cells. 9 (7), 1637(2020).</li>
<li>Berger, S. I., Iyengar, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+systems+pharmacology+in+understanding+drug+adverse+events%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdiscip+Rev+Syst+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Role of systems pharmacology in understanding drug adverse events.</a> Wiley Interdiscip Rev Syst Biol Med. 3 (2), 129-135 (2011).</li>
<li>Friedman, J. R., Webster, B. M., Mastronarde, D. N., Verhey, K. J., Voeltz, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ER+sliding+dynamics+and+ER-mitochondrial+contacts+occur+on+acetylated+microtubules%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">ER sliding dynamics and ER-mitochondrial contacts occur on acetylated microtubules.</a> J Cell Biol. 190 (3), 363-375 (2010).</li>
<li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contacts+between+the+endoplasmic+reticulum+and+other+membranes+in+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Contacts between the endoplasmic reticulum and other membranes in neurons.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 114 (24), E4859-E4867 (2017).</li>
<li>Cagin, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+retrograde+signaling+regulates+neuronal+function%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial retrograde signaling regulates neuronal function.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 112 (44), E6000-E6009 (2015).</li>
<li>Choi, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+three-dimensional+human+neural+cell+culture+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A three-dimensional human neural cell culture model of Alzheimer's disease.</a> Nature. 515 (7526), 274-278 (2014).</li>
<li>Kim, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+3D+human+neural+cell+culture+system+for+modeling+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">A 3D human neural cell culture system for modeling Alzheimer's disease.</a> Nat Protoc. 10 (7), 985-1006 (2015).</li>
<li>Kwak, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amyloid-beta42%2F40+ratio+drives+tau+pathology+in+3D+human+neural+cell+culture+models+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Amyloid-beta42/40 ratio drives tau pathology in 3D human neural cell culture models of Alzheimer's disease.</a> Nat Commun. 11 (1), 1377(2020).</li>
<li>Csordas, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+interorganelle+contacts+and+local+calcium+dynamics+at+the+ER-mitochondrial+interface%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">Imaging interorganelle contacts and local calcium dynamics at the ER-mitochondrial interface.</a> Mol Cell. 39 (1), 121-132 (2010).</li>
<li>Bhattacharyya, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axonal+generation+of+amyloid-beta+from+palmitoylated+APP+in+mitochondria-associated+endoplasmic+reticulum+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Axonal generation of amyloid-beta from palmitoylated APP in mitochondria-associated endoplasmic reticulum membranes.</a> Cell Rep. 35 (7), 109134(2021).</li>
<li>Tebo, A. G., Gautier, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+split+fluorescent+reporter+with+rapid+and+reversible+complementation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">A split fluorescent reporter with rapid and reversible complementation.</a> Nat Commun. 10 (1), 2822(2019).</li>
</ol>

L'inibizione del recettore sigma-1 (S1R) ha ridotto la stabilizzazione MAM nei processi neuronali e ha ridotto drasticamente (~90%) la generazione di Aβ dagli assoni ma non dal soma di un sistema di coltura tridimensionale (3D) di cellule progenitrici neurali umane (ReN) che esprimono mutazioni familiari di AD [FAD] nel gene della proteina precursore dell'amiloide [APP] (ReN GA)23,24,25,27</...

<table><tbody><tr><td>Piastra con fondo in vetro a 6 pozzetti</td><td>Cellvis</td><td>P06-1.5H-N</td><td></td></tr><tr><td>B-27 Supplement (50X), senza siero</td><td>Gibco/Thermo Fisher Scientific</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>bFGF</td><td>R& Sistema D&nbsp;</td><td>233-FB</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Fisher Scientific</td><td>501781532</td><td></td></tr><tr><td>Countess</td> Camera di conteggio delle cellule <td>Vetrini Invitrogen</td><td>C10283</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12 con L-glutammina&nbsp;</td><td>Gibco/Thermo Fisher Scientific</td><td>11320-033</td><td></td></tr><tr><td>EDTA&nbsp; &nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>41116134</td><td></td></tr><tr><td>EGF</td><td>Sigma-Aldrich 92090408</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Falcon Piastre a 6 pozzetti&nbsp;</td><td>VWR International</td><td>41122107</td><td></td></tr><tr><td>GAPDH Anticorpo policlonale Thermo</td><td>Fisher Scientific</td><td>PA1-988</td><td></td></tr><tr><td>Gelatina&nbsp;</td><td>VWR International</td><td>9000-70-8</td><td></td></tr><tr><td>Graphpad Prism N/A</td><td>Prism 9, versione 9.5.0</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Eparina</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td></td><td></td>H0200000</tr><tr><td>Software ImageJ&nbsp;</td><td>ImageJ 1.53a</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Matrice della membrana basale Matrigel&nbsp; &nbsp;</td><td>Corning</td><td>356234</td><td></td></tr><tr><td>mCherry anticorpo policlonale</td><td>Invitrogen</td><td>PA5-34974</td><td></td></tr><tr><td>MS Excel&nbsp; &nbsp;</td><td>Microsoft Excel, versione 2302</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Kit di test di elettrochemiluminescenza multi-array</td><td>Meso Scale Diagnostics (MSD)</td><td>K15200E-2</td><td>V-PLEX A&beta; Kit Pannello peptidico 1 (6E10)</td></tr><tr><td>NaCl&nbsp; &nbsp;</td><td>Fisher Scientific 7647145</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NuPAGE 4&ndash; 12% Bis-Tris gel&nbsp; &nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>NP0321BOX</td><td></td></tr><tr><td>Penicillina/Streptomicina/Amfotericina B&nbsp;</td><td>Lonza</td><td> 17-745E</td><td></td></tr><tr><td>Photoshop</td><td>Adobe Photoshop CC 20.0.10&nbsp;</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Kit Nucleofector Neurone di Ratto</td><td>Lonza</td><td>VPG-1003</td><td></td></tr><tr><td>StemPro Accutase&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>A1110501</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCL, pH 7,6&nbsp; &nbsp;</td><td>Boston BioProducts</td><td>42000000</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100&nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Fisher Scientific 501657287</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

analisi quantitativa della stabilizzazione della membrana del reticolo endoplasmatico (mam) associata ai mitocondri in un modello neurale della malattia di alzheimer (ad) 

Quantitative Analysis of Mitochondria-Associated Endoplasmic Reticulum Membrane (MAM) Stabilization in a Neural Model of Alzheimer's Disease (AD)

Sono state eseguite analisi chimografiche e di imaging su cellule vive per misurare la motilità dei mitocondri liberi marcati con Mito-RFP o dei mitocondri legati all'ER di larghezze di contatto strette (6 nm ± 1 nm) o sciolte (24 nm ± 3 nm) stabilizzate da MAM 1X o MAM 9X, rispettivamente, nel processo neuronale più lungo di ciascun neurone ReN GA (AD) o ReN (naïve) lungo almeno 500 nm, considerando questo come un assone (Figura 1 e Figura 2). Le frequenze dei...

Analisi quantitativa della stabilizzazione della membrana del reticolo endoplasmatico (MAM) associata ai mitocondri in un modello neurale della malattia di Alzheimer (AD) 

A method to quantitate the stabilization of Mitochondria-Associated endoplasmic reticulum Membranes (MAMs) in a 3-dimensional (3D) neural model of ...

quantitative-analysis-mitochondria-associated-endoplasmic-reticulum

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Impara a misurare quantitativamente la stabilizzazione delle membrane MAM in neuroni vivi per studiare la malattia di Alzheimer. Questo metodo innovativo utilizza l'imaging cellulare in tempo reale per valutare la dinamica mitocondriale.

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Analisi quantitativa della stabilizzazione della membrana del reticolo endoplasmatico (MAM) associata ai mitocondri in un modello neurale della malattia di Alzheimer (AD)

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