Name: Facilitare la ripetizione delle iniezioni intracarotidei in modelli murini mediante una nuova tecnica di riparazione del sito di iniezione (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-03-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 8 s
Description: Scopri una tecnica innovativa per la riparazione del sito di iniezione intracarotidea nei modelli murini, che consente iniezioni ripetute prevenendo l'ischemia cerebrale. Questo metodo migliora la distribuzione di terapie per tumori cerebrali.

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<meta charset="utf8"></head><body>Riparazione comune dell'arteria carotide dopo l'iniezione in un modello murino

<ol><li>Loya, J., Zhang, C., Cox, E., Achrol, A. S., Kesari, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+intratumoral+therapy+for+the+high-grade+glioma+part+i%3A+Intratumoral+delivery+and+immunotoxins%5BTitle%5D)+AND+%22CNS+Oncol%22%5BJournal%5D)">Biological intratumoral therapy for the high-grade glioma part i: Intratumoral delivery and immunotoxins.</a> CNS Oncol. 8 (3), (2019).</li>
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<li>Qiao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+resonance+and+photoacoustic+imaging+of+brain+tumor+mediated+by+mesenchymal+stem+cell+labeled+with+multifunctional+nanoparticle+introduced+via+carotid+artery+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Nanotechnology%22%5BJournal%5D)">Magnetic resonance and photoacoustic imaging of brain tumor mediated by mesenchymal stem cell labeled with multifunctional nanoparticle introduced via carotid artery injection.</a> Nanotechnology. 29 (16), 165101(2018).</li>
<li>Yong, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+for+intravascular+delivery+of+oncolytic+adenovirus+delta24-rgd+to+human+gliomas%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Human bone marrow-derived mesenchymal stem cells for intravascular delivery of oncolytic adenovirus delta24-rgd to human gliomas.</a> Cancer Res. 69 (23), 8932-8940 (2009).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Siringhe da 1 mL (basso spazio morto)</td><td>Air-tite Products Co.</td><td>A1</td><td></td></tr><tr><td>26 G; ago da 1/2"</td><td>Air-tite Products Co.</td><td>N2612</td><td></td></tr><tr><td>33 G; ago da 1/2"</td><td>JBP, Air-tite Products Co.</td><td></td><td></td>JBP3313B</tr><tr><td>Piastra di Petri da 3 cm</td><td>Falcon, Fisher Scientific</td><td>08-772A</td><td></td></tr><tr><td>Nastro chirurgico durapore 3M</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-071-152</td><td></td></tr><tr><td>6-0 filo di sutura</td><td>Fine Science Tools</td><td>18020-60</td><td></td></tr><tr><td>70% etanolo</td><td>Fisher Scientific</td><td>04-355-122</td><td></td></tr><tr><td>9-0 sutura microchirurgica con ago&nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>12052-09</td><td></td></tr><tr><td>Analgesico per interventi chirurgici</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>importanti Lacrime artificiali/unguento oftalmico</td><td>Covetrus</td><td>8897</td><td></td></tr><tr><td>Sterilizzatore di perline</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-955-341</td><td></td></tr><tr><td>Betadine/Clorexidina</td><td>McKesson, Fisher Scientific</td><td>NC1696484</td><td></td></tr><tr><td>Divaricatore a gancio smussato</td><td>Fine Science Strumenti</td><td>17022-13</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio da dissezione</td><td>Zeiss Microscopy, LLC</td><td>491903-0010-000</td><td></td></tr><tr><td>Termoforo elettrico</td><td>Insource, Fisher Scientific</td><td>NC0667724</td><td></td></tr><tr><td>Forbici extra strette</td><td>Strumenti per la scienza fine</td><td>14088-10</td><td></td></tr><tr><td>Pinze fini - Pinze Dumont #5 con punte micro-smussate</td><td>Strumenti per la scienza fine</td><td>11253-20</td><td></td></tr><tr><td>Pinze fini - Pinze Dumont #5/45 con punte micro-smussate</td><td>Fine Science Tools</td><td>11253-25</td><td></td></tr><tr><td>Vaporizzatore di isoflurano (o cocktail di ketamina/xilazina)</td><td>Kent Scientific</td><td>VetFlo-1231</td><td></td></tr><tr><td>Sorgente luminosa</td><td>Laxco, Fisher Scientific</td><td>AMPSILED21</td><td></td></tr><tr><td>Coni nasali per anestesia di topo</td><td>Braintree Scientific, Inc</td><td>XENO- M</td><td></td></tr><tr><td>Needle driver nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>12002-12</td><td></td></tr><tr><td>Tamponi di cotone sterili</td><td>Texwipe, Fisher Scientific&nbsp;</td><td>18-366-472</td><td></td></tr><tr><td>Garze sterili</td><td>Covidien, Fisher Scientific</td><td>22-037-907</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina sterile (0,9%)</td><td>KD Medical, Fisher Scientific</td><td>50-103-1363</td><td></td></tr><tr><td>Teli chirurgici sterili</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-129-6666</td><td></td></tr><tr><td>Tavolo</td><td></td><td></td><td></td>chirurgico/downdraft sterile</tr><tr><td>Confezione di sutura sterile (qualsiasi diametro adatto per chiusura della ferita del topo)&nbsp;</td><td>Ethicon, Fisher Scientific</td><td>50-209-2811</td><td></td></tr><tr><td>Strumenti chirurgici</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nastro da laboratorio in vinile</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-901</td><td></td></tr></tbody></table>

facilitare la ripetizione delle iniezioni intracarotidei in modelli murini mediante una nuova tecnica di riparazione del sito di iniezione

Facilitating Repeat Intracarotid Injections in Mouse Models by a Novel Injection Site Repair Technique

Precedenti studi hanno dimostrato che le cellule staminali mesenchimali umane derivate dal midollo osseo (BM-hMSC) somministrate mediante iniezione intracarotidea hanno ospitato con successo gliomi intracranici nei topi19. Abbiamo impiegato questo modello per confrontare gli effetti della legatura del CCA rispetto alla riparazione del CCA con il ripristino della circolazione dopo l'iniezione intracarotidea di BM-hMSC in topi portatori di glioma. A topi nudi atimici sono state impiantate cellule di glioma U87, seguite dall'iniezione di BM-hMSC marcate con GFP con successiva legatura CCA o riparazione CCA con circolazione ripristinata. Dopo 3 giorni, i topi sono stati sacrificati e il cervello è stato raccolto, fissato ed è stata eseguita l'immunoistochimica per rilevare la GFP e sono state contate le cellule GFP-positive (Figura 8A-D).
L'homing complessivo delle GFP-BM-hMSC ai gliomi intracranici è stato valutato dal numero totale di cellule GFP-positive all'interno del confine tumorale su due diversi vetrini (sezioni distanti &gt;75 μm) dallo stesso campione. Il confronto delle medie con il test t spaiato ha suggerito che non c'era alcuna differenza significativa tra l'homing medio osservato tra le due procedure (P = 0,6858) (Figura 8E). La dispersione delle GFP-BM-hMSC in tutto il tumore è stata valutata contando le cellule GFP-positive in 10 campi ad alta potenza all'interno del tumore. L'aumento del numero di cellule all'interno di campi ad alta potenza può indicare cambiamenti nella dispersione delle cellule in tutto il tumore derivanti dalla variazione della procedura. Il confronto dei valori mediani utilizzando il test Wilcoxon Signed Rank ha indicato che non vi era alcuna differenza significativa tra i conteggi mediani delle cellule GFP-positive nei campi ad alta potenza tra i gruppi di legatura CCA e i gruppi di riparazione CCA (Figura 8F).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66303/66303fig01.jpg"> Figura 1: Preparazione del tavolo operatorio e del topo per l'intervento chirurgico. (A,B) Letto chirurgico (etichette A. Nastro vinilico che forma il letto, B. Nastro chirurgico di contenzione degli arti anteriori, C. Cuscino, D. Peso, E. Cono per anestesia, F. Divaricatore a uncino smussato, G. Suture da 1 cm in etanolo al 70%, H. Pinze fini, I. Pinze a punta angolata, J. Forbici strette, K. Batuffoli di cotone sterili). (C, D) Posizionamento del mouse. (E,F) Sito chirurgico e disinfezione del sito chirurgico. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66303/66303fig01large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66303/66303fig02.jpg"> Figura 2: Incisione ed esposizione delle strutture nel sito di iniezione. (A) Incisione della linea mediana. (B,C) Retrazione della ghiandola salivare destra. (D) È visibile anche il triangolo muscolare formato dal muscolo trachea/sternoioideo, il muscolo sternocleidomastoideo e il muscolo digastrico, il muscolo omoioideo. (E) Arteria carotide comune, indicata dalla freccia. (F) Nervo vago e arteria carotide comune, indicati dalle frecce. Abbreviazioni: sh = trachea/muscolo sternoioide; sm = muscolo sternocleidomastoideo; DG = muscolo digastrico; oh = muscolo omoioideo; CCA = Arteria carotide comune. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66303/66303fig02large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66303/66303fig03v2.jpg"> Figura 3: Preparazione del CCA per l'iniezione. (A) Pinze a punta angolata passate sotto il CCA. (B) La sutura è stata tirata a metà sotto il CCA utilizzando una pinza a punta angolata. (C) La seconda sutura è stata tirata a metà sotto il CCA. (D) Suturato legato in sciolti sa intorno al CCA. Abbreviazione: CCA = Arteria carotide comune. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66303/66303fig03largev2.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66303/66303fig04.jpg"> Figura 4: Isolamento e preparazione dell'arteria carotide esterna. (A) CCA, arteria carotide esterna e arteria carotide interna. (B) Sutura tirata a metà sotto l'ECA. Abbreviazioni: CCA Arteria carotide comune; ECA = arteria carotide esterna; ICA = arteria carotide interna. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66303/66303fig04large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66303/66303fig05.jpg"> Figura 5: Preparazione dell'ago e della siringa. (A) Iniezione con un ago dritto con una siringa appoggiata contro il corpo del topo. (B) Iniezione con un ago piegato, con una mano appoggiata sul tavolo operatorio. (C, D) Preparare un ago piegato. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66303/66303fig05large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66303/66303fig06v2.jpg"> Figura 6: Iniezione intracarotidea. (A) La sutura superiore è allentata, la sutura inferiore è stretta sul CCA, l'ago è posizionato sopra la sutura inferiore. (B) L'ago viene inserito appena oltre lo smusso, l'arteria viene sigillata attorno all'ago. (C) La sutura superiore viene sollevata per piegare l'arteria verso l'alto e prevenire il riflusso. (D) La sutura superiore del CCA è stretta. Abbreviazione: CCA = Arteria carotide comune. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66303/66303fig06largev2.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66303/66303fig07.jpg"> Figura 7: Riparazione del sito di iniezione e ripristino della circolazione. (A) Il sito di iniezione indicato con una freccia. (B) Il sito di iniezione si è chiuso con un nodo da chirurgo, un minimo di quattro lanci. (C, D) Allentamento delle suture superiori e inferiori sul CCA dopo la riparazione del sito di iniezione; Nessun sanguinamento osservato dopo l'allentamento della sutura. (E) Le suture vengono rimosse dopo che il sito di iniezione è stato determinato per essere sufficientemente riparato. Abbreviazione: CCA = Arteria carotide comune. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66303/66303fig07large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66303/66303fig08.jpg"> Figura 8: Iniezione intracarotidea di GFP-BM-hMSC e confronto dell'homing con i tumori del glioma intracranico dopo legatura CCA o riparazione CCA con circolazione ripristinata. Le sezioni di tessuto cerebrale di topi portatori di tumore sono state colorate con anticorpi primari anti-GFP e anticorpi secondari Alexa Fluor 488 per marcare GFP-BM-hMSC (verde). I nuclei sono stati colorati con Hoechst 33342 (blu). Campi rappresentativi a bassa potenza di sezioni marcate che mostrano l'homing complessivo al tumore e campi ad alta potenza che mostrano la distribuzione cellulare GFP-positiva dopo la riparazione del CCA (A,C) o la legatura del CCA (B,D). (E) L'homing complessivo delle GFP-BM-hMSC ai tumori è stato valutato in base al numero totale di cellule GFP-positive all'interno del confine tumorale su due diversi vetrini e le medie sono state confrontate mediante t-test. Non è stata osservata alcuna differenza significativa nell'homing complessivo tra le procedure alternative (P = 0,6858). (F) La dispersione delle GFP-BM-hMSC in tutto il tumore è stata valutata contando le cellule GFP-positive in 10 campi ad alta potenza all'interno del tumore. Il confronto dei valori mediani con il test Wilcoxon Signed Rank non indica differenze significative tra gli individui, indipendentemente dalla procedura (P = 0,1914, 0,5000, 0,1641, 0,9512, 0,8828, 0,2207). Abbreviazioni: GFP = proteina fluorescente verde; GFP-BM-hMSCs = cellule staminali mesenchimali umane derivate dal midollo osseo marcate con GFP; CCA = Arteria carotide comune. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66303/66303fig08large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>

Facilitare la ripetizione delle iniezioni intracarotidei in modelli murini mediante una nuova tecnica di riparazione del sito di iniezione

Given recent advances in the delivery of novel antitumor therapeutics using endovascular selective intraarterial delivery methods in neuro-oncology, there ...

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Facilitare la ripetizione delle iniezioni intracarotidei in modelli murini mediante una nuova tecnica di riparazione del sito di iniezione

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