Name: Rapida separazione e visualizzazione di agenti fibrinogenolitici attivi in Sipunculus nudus attraverso lelettroforesi su gel di fibrinogeno-poliacrilammide (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-19T13:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 36 s
Description: Scopri un metodo semplificato di elettroforesi su gel di fibrinogeno-poliacrilammide per identificare agenti fibrinogenolitici attivi in Sipunculus nudus. Questa tecnica efficiente accelera lo sviluppo di farmaci trombolitici per malattie cardiovascolari.

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<meta charset="utf8"></head><body>Svelare gli agenti fibrinogenolitici nei vermi delle arachidi con Fibrinogen-PAGE

<ol><li>Bikdeli, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((COVID-19+and+thrombotic+or+thromboembolic+disease%3A+Implications+for+prevention%2C+antithrombotic+therapy%2C+and+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">COVID-19 and thrombotic or thromboembolic disease: Implications for prevention, antithrombotic therapy, and follow-up.</a> J Am Coll Cardiol. 75 (23), 2950-2973 (2020).</li>
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<table><tbody><tr><td>1&nbsp; M Tris-HCl (pH 6,8)</td><td>Solarbio</td><td>T1020</td><td></td></tr><tr><td>1,5 M Tris-HCl (pH 8,8)</td><td>Solarbio</td><td>T1010</td><td></td></tr><tr><td>30% acrilammide/bis-acrilammide</td><td>Biosharp</td><td>BL513B</td><td></td></tr><tr><td>Persolfato di ammonio</td><td>XiLONG SCIENTIFIC</td><td>7727-54-0</td><td></td></tr><tr><td>Becher</td><td>PYREX</td><td>2-9425-02</td><td></td></tr><tr><td>Provetta da centrifuga (1,5 mL)</td><td>Biosharp</td><td>BS-15-M</td><td></td></tr><tr><td>Incubatore a temperatura costante</td><td>JINGHONG</td><td>JHS-400</td><td></td></tr><tr><td>Coomas Brillant Blue Soluzione di colorazione</td><td>Beyotime</td><td>P0017F</td><td></td></tr><tr><td>Bilancia analitica elettronica</td><td>DENVER</td><td>TP-213</td><td></td></tr><tr><td>Fibrinogeno</td><td>Solarbio</td><td>F8051</td><td></td></tr><tr><td>Puntali per pipette con caricamento in gel, Bulk</td><td>Biosharp</td><td>BS-200-GTB</td><td></td></tr><tr><td>Omogeneizzatore</td><td>AHS</td><td>ATS-1500</td><td></td></tr><tr><td>Oscillatore a rotazione orizzontale</td><td>NuoMi</td><td>NMSP-600</td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q Riferimento</td><td>Millipore</td><td>Z00QSV0CN</td><td></td></tr><tr><td>Mini-PROTEAN Tetra Cell</td><td>BIO-RAD</td><td>165-8000~165-8007</td><td></td></tr><tr><td>N,N,N',N'-Tetrametiletilendiammina</td><td>Sigma</td><td>T9281</td><td></td></tr><tr><td>Puntale per pipetta (1 mL)</td><td>Puntale per pipette Axygene</td><td>T-1000XT-C</td><td></td></tr><tr><td>(10 &; micro; L)</td><td>Puntale</td> per pipetta <td>Axygene T-10XT-C</td><td></td></tr><tr><td>(200 &; micro; L)</td><td>Pipettatore Axygene</td><td>T-200XT-C</td><td></td></tr><tr><td>(1 mL)</td>Pipettatore <td>ZY18723</td><td></td> <td>Thermo Fisher Scientific</td></tr><tr><td>(10&micro; L)</td>Pipettatore <td>ZX98775</td><td></td> <td>Thermo Fisher Scientific</td></tr><tr><td>(200 &5; L)</td>Pipettatore <td>ZY20280</td><td></td> <td>Thermo Fisher Scientific</td></tr><tr><td>(50 &; micro; L)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY15331</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga refrigerata</td><td>cence</td><td>H1650R</td><td></td></tr><tr><td>Sodio dodecil solfato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V900859</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>Solarbio</td><td>T8060</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCl</td><td>Solarbio</td><td>T8230</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Solarbio</td><td>T8200</td><td></td></tr></tbody></table>

rapida separazione e visualizzazione di agenti fibrinogenolitici attivi in sipunculus nudus attraverso l'elettroforesi su gel di fibrinogeno-poliacrilammide

Rapid Separation and Display of Active Fibrinogenolytic Agents in Sipunculus nudus through Fibrinogen-Polyacrylamide Gel Electrophoresis

Dopo l'elettroforesi, tutte le bande del marcatore sono state chiaramente visualizzate. Le corsie di carico 1x SDS-PAGE mostravano solo bande di 10 kDa (blu bromofenolo). I campioni di sFE e di verme delle arachidi non hanno mostrato alcuna banda osservabile (Figura 1). Sebbene le bande dei campioni non siano visibili, le prestazioni del marcatore e del blu di bromofenolo hanno indicato che l'elettroforesi è andata a buon fine e i campioni sono stati separati in base al loro peso molecolare.
Sebbene l'intero gel sia diventato blu a causa della colorazione, la decolorazione ha reso trasparente l'area in cui il fibrinogeno è stato degradato dagli agenti fibrinogenolitici. Rispetto al marcatore, l'sFE ha indicato una banda fibrinogenolitica attiva vicino a 25 kDa. L'omogeneizzato di verme delle arachidi mostrava 25 kDa, 33 kDa, 43 kDa e una serie di bande più grandi di 70 kDa (Figura 2). I risultati hanno indicato che l'sFE conteneva solo un componente fibrinogenolitico di 25 kDa, ma l'omogenato di verme dell'arachide conteneva componenti dell'sFE e altri agenti fibrinogenolitici. La Figura 1 supplementare è un esempio di un'immagine su gel che mostra il marcatore in blu intenso e i campioni target come bande luminose.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66536/66536fig01.jpg"> Figura 1: Gel dopo l'elettroforesi. M: Marcatore; Corsia 1: 1x buffer di caricamento SDS-PAGE; Corsia 2: sFE; Corsia 3: 1x buffer di caricamento SDS-PAGE; Corsia 4: omogeneizzato di verme delle arachidi; Corsia 5: 1x buffer di caricamento SDS-PAGE. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66536/66536fig01large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66536/66536fig02.jpg"> Figura 2: Gel dopo la decolorazione. M: Marcatore; Corsia 1: 1x buffer di caricamento SDS-PAGE; Corsia 2: sFE; Corsia 3: 1x buffer di caricamento SDS-PAGE; Corsia 4: omogeneizzato di verme delle arachidi; Corsia 5: 1x buffer di caricamento SDS-PAGE. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66536/66536fig02large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
Figura 1 supplementare: Immagine del gel che mostra il marcatore in blu intenso e i campioni target come bande luminose. M: Marcatore; Corsia 1: 1x buffer di caricamento SDS-PAGE; Corsia 2: sFE; Corsia 3: 1x buffer di caricamento SDS-PAGE; Corsia 4: omogeneizzato di verme delle arachidi; Corsia 5: 1x buffer di caricamento SDS-PAGE. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66536/Supplementary%20Figure%201.zip" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo file.</a>

Rapida separazione e visualizzazione di agenti fibrinogenolitici attivi in Sipunculus nudus attraverso l'elettroforesi su gel di fibrinogeno-poliacrilammide

Fibrinogenolytic agents that can dissolve fibrinogen directly have been widely used in anti-coagulation treatment. Generally, identifying new ...

rapid-separation-display-active-fibrinogenolytic-agents-sipunculus

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Ottimizzato fibrina Gel Bead Assay per lo studio della angiogenesi

In questo video, dimostriamo un metodo di elettroforesi su gel bidimensionale che separa singole proteine da una complessa miscela proteica ottenuta da tessuti tumorali di adenoma ipofisario umano non funzionale (NFPA). Le proteine vengono separate in base alla loro carica elettrica nella prima dimensione e ulteriormente separate in base ai pesi molecolari nella seconda dimensione.

Elettroforesi su gel di poliacrilammide bidimensionale: una tecnica di separazione per l'analisi delle proteine in una miscela proteica complessa basata sulla carica e sul peso molecolare

Questo video dimostra l'uso di uno spettrofotometro UV-visibile per monitorare la formazione di coaguli di fibrina insolubili in funzione del cambiamento nella torbidità della soluzione. Lo spettrofotometro UV-visibile misura l'assorbanza della soluzione nel tempo, che rappresenta la variazione di torbidità dovuta alla formazione di coaguli di fibrina insolubile.

Spettroscopia UV-visibile per il monitoraggio della formazione di coaguli di fibrina

L'obiettivo è frazionare e isolare piccole molecole bioattive, peptidi da un complesso estratto vegetale e proteine da microbi patogeni utilizzando il metodo di messa a fuoco isoelettrica a fase liquida (IEF). Inoltre, sono state identificate le molecole separate e la loro bioattività è stata confermata.

Separazione delle piccole molecole bioattive, Peptidi da fonti naturali e proteine dai microbi di Preparative Isoelectric Focusing (IEF) Metodo

Questo rapporto descrive le tecniche per isolare e purificare i glicosaminoglicani solfati (GAG) da campioni biologici e un approccio di elettroforesi su gel di poliacrilammide per approssimarne le dimensioni. I GAG contribuiscono alla struttura dei tessuti e influenzano i processi di segnalazione attraverso l'interazione elettrostatica con le proteine. La lunghezza del polimero GAG contribuisce alla loro affinità di legame per i ligandi affini.

Rilevazione di glicosaminoglicani mediante elettroforesi su gel di poliacrilammide e colorazione dell'argento

Qui, presentiamo un metodo di purificazione di affinità di un enzima fibrinolitico da Sipunculus nudus che è semplice, economico ed efficiente.

Purificazione per affinità di un enzima fibrinolitico da Sipunculus nudus

L'esperimento qui utilizzato mostra un metodo di docking molecolare combinato con il saggio di spostamento termico cellulare per prevedere e convalidare l'interazione tra piccole molecole e bersagli proteici.

Previsione e validazione del bersaglio proteico di un composto a piccola molecola

Le proteinasi sono vitali per la patogenesi batterica, consentendo l'invasione e l'evasione immunitaria. L'estrazione in un'unica fase delle proteine citoplasmatiche e di membrana dei batteri nella loro forma attiva è straziante. Questo articolo video mostra l'estrazione di intere proteine cellulari di Leptospira per l'analisi zimografica per rilevare e caratterizzare le gelatinasi.

Estrazione in un'unica fase e analisi zimografica delle gelatinasi batteriche

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Saggio di profilazione trombonica: una piattaforma basata sulla microfluidica per caratterizzare in modo completo la trombogenesi biomeccanica

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Il saggio sull'emostasi di Nijmegen: misurazione simultanea fluorogenica della generazione di trombina e plasmina in un singolo pozzo

Scopri un metodo semplificato di elettroforesi su gel di fibrinogeno-poliacrilammide per identificare agenti fibrinogenolitici attivi in Sipunculus nudus. Questa tecnica efficiente accelera lo sviluppo di farmaci trombolitici per malattie cardiovascolari.

Rapida separazione e visualizzazione di agenti fibrinogenolitici attivi in Sipunculus nudus attraverso lelettroforesi su gel di fibrinogeno-poliacrilammide (Video) | JoVE Journal

Rapida separazione e visualizzazione di agenti fibrinogenolitici attivi in Sipunculus nudus attraverso l'elettroforesi su gel di fibrinogeno-poliacrilammide

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