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DOI: 10.3791/66580-v
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Questo protocollo fornisce un metodo di isolamento primario delle cellule T murine e la microscopia time-lapse della migrazione delle cellule T in specifiche condizioni ambientali con analisi quantitativa.
L'obiettivo della nostra ricerca è comprendere i modelli di migrazione delle cellule T in condizioni ambientali altamente definite per consentire una sperimentazione informata in vitro e decifrare le interazioni molecolari che influenzano la migrazione. L'imaging dal vivo, come la microscopia multifotone intravitale, viene utilizzato per la comprensione in vivo della cinetica delle cellule immunitarie. Ma i dispositivi microfluidici sono uno strumento in vitro comune che offre un controllo preciso sul microambiente che non può essere offerto in un campione vivo.
Il nostro protocollo ci consente di analizzare complesse vie di segnalazione e fornisce una migliore comprensione per esperimenti mirati in vitro per affrontare ulteriormente i ruoli biologici dei singoli segnali in un modo specifico per tipo di cellula. Il nostro metodo è semplice, riproducibile e di facile accesso nei laboratori di ricerca che dispongono di un microscopio a campo chiaro con una fotocamera digitale collegata. Pertanto, il nostro approccio garantisce un insieme affidabile di metodi per studiare gli eventi dinamici di migrazione cellulare.
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