Isolamento e crioconservazione di cellule mononucleate del sangue periferico umano altamente vitali da sangue intero: una guida per principianti

In questo protocollo, miriamo a fornire un tutorial passo-passo facile da seguire su come raccogliere e conservare sangue periferico ad alta vitalità e cellule mononucleate, o PBMC, da sangue intero. Le PBMC includono linfociti, cellule dendritiche e monociti. Le PBMC bulk possono essere elaborate per isolare singoli tipi di cellule e sono comunemente utilizzate in un'ampia varietà di esperimenti e saggi, tra cui il sequenziamento dell'RNA e la citometria a flusso.

Oltre alle PBMC, dimostriamo anche come raccogliere il plasma EDTA e l'intero buffy coat. Prima di iniziare questo protocollo, preparare i materiali e i reagenti elencati nella Tabella 2. Si noti che questo protocollo è progettato per la raccolta di PBMC da sei provette per centrifugazione a gradiente di densità, ciascuna delle quali produce circa 12 milioni di cellule.