Name: Tecnica meno invasiva per la frattura mandibolare non stabilizzata in modelli murini (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-09-27T13:25:00.000+00:00
Duration: 4 min 13 s
Description: Scopri una tecnica meno invasiva per fratture mandibolari non stabilizzate nel topo. Questo metodo riduce la perdita ossea e i danni ai tessuti molli, facilitando lo studio della riparazione endocondrale in vivo.

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<meta charset="utf8"></head><body>Protocollo standardizzato per la frattura mandibolare per la riparazione ossea nei topi

<ol><li>Thompson, Z., Miclau, T., Hu, D., Helms, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+intramembranous+ossification+during+fracture+healing%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ortho+Res%22%5BJournal%5D)">A model for intramembranous ossification during fracture healing.</a> J Ortho Res. 20 (5), 1091-1098 (2002).</li>
<li>Bahney, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+biology+of+fracture+healing%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ortho+Res%22%5BJournal%5D)">Cellular biology of fracture healing.</a> J Ortho Res. 37 (1), 35-50 (2019).</li>
<li>Yu, Y. Y., Lieu, S., Hu, D., Miclau, T., Colnot, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Site+specific+effects+of+zoledronic+acid+during+tibial+and+mandibular+fracture+repair%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Site specific effects of zoledronic acid during tibial and mandibular fracture repair.</a> PLoS One. 7 (2), e31771(2012).</li>
<li>Landry, P. S., Marino, A. A., Sadasivan, K. K., Albright, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+soft-tissue+trauma+on+the+early+periosteal+response+of+bone+to+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Trauma%22%5BJournal%5D)">Effect of soft-tissue trauma on the early periosteal response of bone to injury.</a> J Trauma. 48 (3), 479-483 (2000).</li>
<li>Colnot, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skeletal+cell+fate+decisions+within+periosteum+and+bone+marrow+during+bone+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Miner+Res%22%5BJournal%5D)">Skeletal cell fate decisions within periosteum and bone marrow during bone regeneration.</a> J Bone Miner Res. 24 (2), 274-282 (2009).</li>
<li>Julien, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+contribution+of+skeletal+muscle+mesenchymal+progenitors+to+bone+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Direct contribution of skeletal muscle mesenchymal progenitors to bone repair.</a> Nat Commun. 12 (1), 2860(2021).</li>
<li>McGuire, C., Boudreau, C., Prabhu, N., Hong, P., Bezuhly, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Piezosurgery+versus+conventional+cutting+techniques+in+craniofacial+surgery%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Piezosurgery versus conventional cutting techniques in craniofacial surgery: A systematic review and meta-analysis.</a> Plast Reconstr Surg. 149 (1), 183-195 (2022).</li>
<li>Wong, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chondrocyte-to-osteoblast+transformation+in+mandibular+fracture+repair%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Res%22%5BJournal%5D)">Chondrocyte-to-osteoblast transformation in mandibular fracture repair.</a> J Orthop Res. 39 (8), 1622-1632 (2021).</li>
<li>Vercellotti, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technological+characteristics+and+clinical+indications+of+piezoelectric+bone+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Minerva+Stomatol%22%5BJournal%5D)">Technological characteristics and clinical indications of piezoelectric bone surgery.</a> Minerva Stomatol. 53, 207-214 (2004).</li>
<li>Wong, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chondrocyte-to-osteoblast+transformation+in+mandibular+fracture+repair%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Res%22%5BJournal%5D)">Chondrocyte-to-osteoblast transformation in mandibular fracture repair.</a> J Orthop Res. 39 (8), 1622-1632 (2021).</li>
<li>Tian, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIF-1%CE%B1+regulates+osteoclast+activation+and+mediates+osteogenesis+during+mandibular+bone+repair+via+CT-1%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Dis%22%5BJournal%5D)">HIF-1α regulates osteoclast activation and mediates osteogenesis during mandibular bone repair via CT-1.</a> Oral Dis. 28 (2), 428-441 (2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Buprenorfina : Buprecare 0,3 mg/kg</td><td>Animalcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Elevator OBWEGESER larghezza 6 mm Lunghezza 17,5 cm&nbsp;</td><td>Collin Medical</td><td>HA 5905</td><td></td></tr><tr><td>Pinze : Piastra Pad MORIA 11 cm N&deg; 5</td><td>MORIA</td><td>9906</td><td></td></tr><tr><td>Tavolo riscaldante Bioseblab 55 cm x 33 cm</td><td>Bioseblab</td><td>707</td><td></td></tr><tr><td>Ago HOLDER : Micro Halsey Needle Holder - Metallo&nbsp;</td><td>LABODERM</td><td>21.100</td><td></td></tr><tr><td>Neo Clear&nbsp;</td><td>Merck Millipore, Darmstadt, Germania</td><td>109843&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Ocry Gel Tubo 10 g (lubrificante per gli occhi)</td><td>tvm lab&nbsp; &nbsp;</td><td>3.70045E+12</td><td></td></tr><tr><td>Piezotomo 2 ASS FINAL</td><td>ACTEON</td><td>X57402</td><td></td></tr><tr><td>Inserto piezotomo Piezocision PZ3</td><td>ACTEON</td><td>F87574</td><td></td></tr><tr><td>Forbici micro&nbsp;</td><td>MORIA</td><td>MC52</td><td></td></tr><tr><td>Suture in seta PERMA HAND SEIDE&nbsp; / MERSILK</td><td>ETHICON</td><td>REF 18501G&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Forbici dritte</td><td>MORIA</td><td>4877A</td><td></td></tr><tr><td>Vetflurano (isoflurano) 250 ml</td><td>VIRBAC</td><td>VET066 (Centravet)</td><td></td></tr></tbody></table>

tecnica meno invasiva per la frattura mandibolare non stabilizzata in modelli murini

Less-Invasive Technique for Non-stabilized Mandibular Fracture in Mouse Models

Per quanto riguarda le procedure chirurgiche in vivo , per eseguire in modo ottimale questa procedura di frattura mandibolare non stabilizzata in un modello murino, sono necessari un apprendimento e una formazione specifici.
Questa tecnica per la frattura mandibolare non stabilizzata consente lo studio del processo di riparazione dell'osso endocondrale. Dopo l'eutanasia, sono stati raccolti campioni mandibolari in paraformaldeide al 4% (24 ore). Dopo la decalcificazione completa con EDTA pH 8, le sezioni sono state incorporate nella paraffina. Le sezioni seriali sagittali sono state eseguite, deparaffinate in soluzione di deparaffinazione e quindi reidratate prima della colorazione con Sirus Red/Alcian Blue, utilizzando protocolli standard. Le immagini istologiche hanno confermato la formazione di un callo molle con stampo cartilagineo (Figura 5). La guarigione ossea si completa a 4 settimane dalla frattura, come dimostrato dalle analisi micro-CT. Si consiglia di studiare il processo di riparazione ossea in diversi punti chiave dall'inizio della formazione del callo (ad esempio, ogni 7 giorni (giorno 7, 14, 21) o più a seconda dell'obiettivo dello studio) fino alla fine della guarigione ossea (ad esempio, giorno 28), con analisi istomorfologiche e morfometriche micro-CT.
Sulla base di un'analisi retrospettiva di questa procedura eseguita su 58 topi wild-type (background C57BL/6J), il tasso di successo del protocollo è dell'86,3% e un tasso di esclusione del 13,7%. L'esclusione era dovuta alla morte spontanea prematura nel primo periodo postoperatorio (3%), alla decisione di eutanasia per i topi che presentavano un punteggio critico (1%; punteggio &gt; 3 e/o in caso di perdita di peso &gt; 20%), o in caso di posizione anomala dell'osteotomia, con anormale divisione dell'angolo mandibolare (5%), o quando la frattura era a livello molare (n=1/58). In quest'ultimo caso è stata osservata un'infezione, con la spaccatura anomala della frattura a livello molare (n= 1/58; Tabella 2).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66824/66824fig01.jpg"> 
Figura 1: Immagine dell'approccio cutaneo sottomandibolare del ramo ascendente mandibolare. Il bordo inferiore della mandibola è fratturato con un inserto piezotomico, consentendo una perdita ossea minima (freccia). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66824/66824fig01large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66824/66824fig02.jpg"> 
Figura 2: Colorazione della mandibola del topo. Vista laterale di una mandibola di topo wild type di 6 settimane (colorata con colorazione rosso alizarina / blu alciano): 1. Condilo, 2. Processo coronoideo, 3. Tacca coronoidea, 4. Processo angolare, 5. Bordo posteriore del ramo, 6. Bordo basilare (o inferiore) della mandibola. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66824/66824fig02large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66824/66824fig03.jpg"> 
Figura 3: Radiografia del cranio del topo. Radiografie laterali del cranio di un topo selvatico di 6 settimane (vista sagittale) che mostrano l'aspetto della mandibola di un topo non fratturato (a sinistra) e l'aspetto della mandibola di un topo fratturato e la direzione della frattura mandibolare non stabilizzata (frecce), dal bordo inferiore alla tacca coronoidea, posta anteriormente al condilo (a destra). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66824/66824fig03large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66824/66824fig04.jpg"> 
Figura 4. Radiografia del cranio del topo in condizioni non ottimali. Radiografie laterali del cranio di un topo selvatico di 6 settimane (vista sagittale) che mostrano una frattura anomala dell'angolo mandibolare (frecce). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66824/66824fig04large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66824/66824fig05.jpg"> 
Figura 5: Risultati rappresentativi. Risultati al giorno 14 dopo la frattura in un topo wild-type (C57BL/6J). Viste coronali 3D rappresentative di una scansione μCT ricostruita del sito della frattura mandibolare, che mostra il callo osseo (frecce bianche). Immagini rappresentative della cartilagine del callo (colorazione Sirus Red/Alcian Blue) che confermano la presenza di un processo di riparazione ossea endocondrale. Abbreviazioni: B = osso, C = cartilagine. Barra della scala: 200 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66824/66824fig05large.jpg" target="_blank">Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td>0</td>
			<td>1</td>
			<td>2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aspetto animale</td>
			<td>Normale</td>
			<td>Riduzione WC</td>
			<td>Peli arruffati, schiena arcuata</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Comportamento</td>
			<td>Normale</td>
			<td>Ipomobilità</td>
			<td>Ipomobilità, riduzione dell'assunzione di cibo, perdita di peso &gt; 10 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Segni clinici</td>
			<td>Normale</td>
			<td>Infiammazione cicatriziale</td>
			<td>Cicatrice aperta, infezione</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabella 1. Scala di punteggio del benessere post-operatorio. 
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td>n = 58 topi</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percentuale di successo</td>
			<td>86.3 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tasso di esclusione :</td>
			<td>13.7 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Morte spontanea prematura</td>
			<td>3%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Punteggio critico &lt; 3 e/o perdita di peso &gt; 20 %</td>
			<td>1%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frattura anomala divisa all'angolo mandibolare</td>
			<td>5%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frattura anomala, a livello molare</td>
			<td>1.7 %</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabella 2. Tassi di successo e di esclusione del protocollo.

Tecnica meno invasiva per la frattura mandibolare non stabilizzata in modelli murini

Non-stabilized fractures can be made at mandibular sites in mice, thus making it possible to analyze bone repair using an endochondral ossification mode. ...

less-invasive-technique-for-non-stabilized-mandibular-fracture-mouse

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Biologia

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