Il protocollo Mouse Stroke Unit con punteggio neurologico standardizzato per studi traslazionali sull'ictus del topo

Il modello murino di ictus con occlusione intravascolare traduce bene i trattamenti di trombectomia e riperfusione in corso, tuttavia non traduce le routine cliniche efficaci dell'stroke unit. In questo video, dimostriamo il nostro collaudato concetto di unità di corsa traslazionale del mouse e la scala di valutazione neurologica standardizzata. Il primo metodo del nostro protocollo si riferisce all'unità di corsa del mouse.

Valuta quotidianamente lo stato clinico dell'animale e calcola il suo punteggio di certificazione del rischio sommando i punti come mostrato qui. Adattare la frequenza e l'intensità del supporto in base all'RSS e alla fase post-ictus dell'animale. Per un supporto nutrizionale attivo, afferra e tieni il topo delicatamente ma fermo dal pelo del collo.

Stabilizzare la guancia con un dito medio e far scorrere il dito medio verso il naso del topo contro la guancia e mantenere la posizione. Posizionare la punta della siringa tra i denti verso il lato interno della guancia. Somministrare circa 40 o 50 microlitri di cibo in gel ogni volta.

Rimetti delicatamente il topo nella gabbia e ripeti l'alimentazione dopo uno o due minuti. Successivamente, viene dimostrata la componente focale della scala sperimentale del tratto. Inizia con il primo test per la paresi degli arti anteriori.

Solleva delicatamente il topo dalla base della coda ed esamina gli arti anteriori. Punteggio zero per l'estensione in avanti simmetrica e la mobilità degli arti anteriori. Punteggio uno per lieve flessione e ridotto movimento dell'arto controlesionale.

Segnare due punti per una lieve flessione dell'arto controlesionale. Punteggio tre per l'aderenza dell'arto controlesionale al tronco e punteggio quattro per l'arto plegico senza movimento dell'arto o del corpo. Ora valuta la paresi degli arti posteriori.

Continua a tenere il mouse per la base della coda come per il test. Esamina gli arti posteriori, segna zero per l'estensione simmetrica e il movimento degli arti posteriori. Punteggio uno per l'asimmetria degli arti posteriori con movimento significativamente ridotto e posizione asimmetrica dell'arto posteriore controlesionale.

Continua a tenere il topo per la base della coda per valutare la simmetria del tronco. Punteggio zero per la normale flessione simmetrica del tronco su entrambi i lati e nessuna flessione persistente del tronco superiore a 30 gradi rispetto all'asse verticale. Punteggio uno per una marcata flessione del tronco superiore a 30 gradi rispetto all'asse verticale con predominanza controlesionale.

Ora verifica il comportamento in cerchio. Posiziona delicatamente il mouse su una superficie piana e lascialo muovere liberamente per almeno un minuto. Osserva il suo schema di movimento.

Segna zero quando il mouse si muove velocemente e linearmente. Segna uno per tendenza a girarsi da un lato ma non in cerchi ravvicinati. Segna due per i cerchi incostanti chiusi da un lato.

Segna tre per cerchi costanti e ravvicinati su un lato e segna quattro per ruotare, ondeggiare o non muoverti affatto. Ora verifica la simmetria del corpo. Continua dal test quattro e lascia che il mouse si muova liberamente sulla superficie piana.

Osserva il suo asse naso-coda. Punteggio zero per postura normale, tronco rialzato dalla panca e coda dritta. Segna uno per una leggera asimmetria quando il corpo si piega leggermente da un lato e la coda è piegata distalmente.

Punteggio due per l'asimmetria moderata quando il corpo si inclina o si piega sul lato controlesionale e la coda è piegata prossimalmente. Punteggio tre per l'asimmetria prominente quando il corpo è piegato, un lato giace sulla panca e la coda è chiaramente piegata. E segna quattro per l'estrema asimmetria quando il corpo è piegato e un lato giace costantemente sulla panchina.

Ora per il test sei, continua dal test cinque e osserva la sua andatura. Verificare la presenza di deficit motori dell'andatura. Punteggio zero per l'andatura normale quando gli arti sono flessibili, simmetrici e veloci.

Segna un punto per un'andatura rigida, inflessibile e più lenta senza zoppicare. Segna due punti per zoppicare chiaramente con movimenti asimmetrici. Segna tre per tremare, andare alla deriva o cadere dopo una leggera spinta.

Segna quattro per nessuna camminata spontanea. Ora verifica la circerchiazione obbligatoria. Tieni il topo per la base della coda e sollevalo leggermente dalla superficie in modo che cammini sugli arti anteriori.

Osserva il suo movimento. Punteggio zero per il movimento lineare normale. Segna uno per tendenza a girarsi da un lato.

Segna due quando il mouse gira da un lato a cerchi chiusi completi. Segna tre quando ruota e il suo movimento è lento. E segna quattro quando il mouse non avanza e la parte anteriore del tronco giace sulla panchina.

Qui descriviamo come eseguire il test di postura. Posiziona il mouse sul palmo della mano come mostrato nel video e fallo oscillare delicatamente avanti e indietro. Si noti come il mouse mantiene la sua posizione eretta e si bilancia contro le forze laterali, il suo corpo non tocca il palmo o le dita.

I filmati di diversi punteggi di quel test non sono utili in quanto il suo punteggio si basa fortemente sul rilevamento di movimenti rapidi e sottili del mouse che vengono percepiti dalla mano e i segnali visivi non sono sufficienti per il punteggio. Descriviamo ogni punteggio sotto forma di testo per comodità. Ora valuta il posizionamento degli arti anteriori.

Tieni il mouse dalla schiena o dalla base della coda e dirigilo verso il raggio come bersaglio da raggiungere. Osserva per la portata simmetrica. Quindi, una volta afferrata la trave, tirala via delicatamente e osserva il rilascio simmetrico degli arti anteriori.

Punteggio zero per il raggiungimento e il rilascio simmetrici. Segna uno per ogni asimmetria. Ora test per il deficit sensomotorio degli arti anteriori.

Tenere il topo per la schiena come dimostrato e stimolare le zampe anteriori successivamente con una punta sottile. Punteggio zero per i normali movimenti di presa immediati. Segnare uno per l'assenza o il chiaramente ritardo della presa della zampa anteriore controlesionale.

Quindi, prova la sua camminata del raggio. Posiziona il mouse sulla trave con l'asse naso-coda parallelo ad essa e lascialo stare in equilibrio o camminare sulla trave. Osservare l'equilibrio, la paresi degli arti e le cadute.

Tieni sempre la mano sotto l'animale nel caso in cui cada. Punteggio zero quando il mouse si bilancia con una postura stabile e cammina verso un lato della trave. Segna uno quando afferra il lato della trave e non ci cammina sopra.

Tieni presente che potrebbe essere necessario un po' di tempo per stare in equilibrio ancora sulla trave. Segna due quando un arto cade dalla trave. Segna tre quando due arti cadono dalla trave.

Segna quattro quando il mouse tenta di stare in equilibrio sulla trave ma cade dopo 40 secondi. Tieni presente che in questo test il mouse deve essere osservato per un massimo di 60 secondi. Segna cinque quando c'è una caduta che si verifica tra 20 e 40 secondi.

E segna sei quando non fa alcun tentativo di bilanciarsi o di appendersi alla trave. Valuta la sensazione dei baffi. Posiziona il mouse su un piano di lavoro aperto e stimola con successo i suoi baffi con un batuffolo di cotone sottile a punta lunga.

Provenendo da un angolo cieco, osservare la sua risposta di rotazione. Punteggio zero per la normale accensione rapida dopo stimolazione bilaterale. Punteggio uno per una risposta controlesionale più lenta.

Punteggio due per l'assenza di risposta controlesionale. Punteggio tre per l'assenza di risposta controlesionale e ipsilesionale più lenta. E punteggio quattro per la risposta assente bilaterale.

Testare la capacità di arrampicata. Posiziona il mouse al centro di una superficie rivestita in gomma con un angolo di 45 gradi e osserva la sua risposta mentre cerca di arrampicarsi. Segna zero quando il mouse si arrampica rapidamente sulla parte superiore della superficie.

Segna uno quando si arrampica con sforzo ed è presente debolezza degli arti. Segna due quando si mantiene in pendenza e non scivola né si arrampica. Segna tre quando scivola giù per il pendio nonostante lo sforzo per prevenire la caduta.

E segna quattro quando scivola senza alcuno sforzo per evitare la caduta. Il protocollo dell'unità di ictus del topo ha supportato in modo riproducibile la sopravvivenza dei topi dopo l'occlusione filamentosa dell'arteria cerebrale media, mantenendo un tasso di sopravvivenza dell'80%L'ESS focale eccelle nel rilevare i deficit neurologici, catturare il recupero e mantenere la sensibilità fino a sei mesi dopo l'ictus. Complementare all'ESS focale, è possibile utilizzare un test del gradino della scala per rilevare e quantificare la debolezza degli arti anteriori e posteriori per un massimo di sei mesi.