Name: Generazione di cellule T regolatorie del recettore dellantigene chimerico umano (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-03T13:40:00.000+00:00
Duration: 10 min 29 s
Description: Scopri come generare cellule T regolatorie CAR umane per terapie immunitarie. Questo protocollo standardizzato utilizza modelli murini umanizzati per ottimizzare l'affinità del recettore e migliorare il profilo delle citochine.

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<meta charset="utf8"></head><body>Ingegnerizzazione ed espansione delle Treg CAR umane per terapie di regolazione immunitaria

<ol><li>Zhang, X., Zhu, L., Zhang, H., Chen, S., Xiao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CAR-T+cell+therapy+in+hematological+malignancies%3A+current+opportunities+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">CAR-T cell therapy in hematological malignancies: current opportunities and challenges.</a> Front Immunol. 13, 927153(2022).</li>
<li>Cappell, K. M., Kochenderfer, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+outcomes+following+CAR+T+cell+therapy%3A+what+we+know+so+far%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Long-term outcomes following CAR T cell therapy: what we know so far.</a> Nat Rev Clin Oncol. 20 (6), 359-371 (2023).</li>
<li>Choi, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraventricular+CARv3-TEAM-E+T+cells+in+recurrent+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Intraventricular CARv3-TEAM-E T cells in recurrent glioblastoma.</a> N Engl J Med. 390 (14), 1290-1298 (2024).</li>
<li>Brown, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Locoregional+delivery+of+IL-13Ralpha2-targeting+CAR-T+cells+in+recurrent+high-grade+glioma%3A+a+phase+1+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Locoregional delivery of IL-13Ralpha2-targeting CAR-T cells in recurrent high-grade glioma: a phase 1 trial.</a> Nat Med. 30 (4), 1001-1012 (2024).</li>
<li>Bagley, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrathecal+bivalent+CAR+T+cells+targeting+EGFR+and+IL13Ralpha2+in+recurrent+glioblastoma%3A+phase+1+trial+interim+results%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Intrathecal bivalent CAR T cells targeting EGFR and IL13Ralpha2 in recurrent glioblastoma: phase 1 trial interim results.</a> Nat Med. 30 (5), 1320-1329 (2024).</li>
<li>Ghobadinezhad, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+emerging+role+of+regulatory+cell-based+therapy+in+autoimmune+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">The emerging role of regulatory cell-based therapy in autoimmune disease.</a> Front Immunol. 13, 1075813(2022).</li>
<li>Sakaguchi, S., Yamaguchi, T., Nomura, T., Ono, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+T+cells+and+immune+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Regulatory T cells and immune tolerance.</a> Cell. 133 (5), 775-787 (2008).</li>
<li>Sakaguchi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+T+cells+and+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Regulatory T cells and human disease.</a> Annu Rev Immunol. 38, 541-566 (2020).</li>
<li>Ferreira, L. M. R., Muller, Y. D., Bluestone, J. A., Tang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Next-generation+regulatory+T+cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Next-generation regulatory T cell therapy.</a> Nat Rev Drug Discov. 18 (10), 749-769 (2019).</li>
<li>Rosenblum, M. D., Gratz, I. K., Paw, J. S., Abbas, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treating+human+autoimmunity%3A+current+practice+and+future+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Treating human autoimmunity: current practice and future prospects.</a> Sci Transl Med. 4 (125), 125sr121(2012).</li>
<li>Sawitzki, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+cell+therapy+in+kidney+transplantation+%28The+ONE+Study%29%3A+a+harmonised+design+and+analysis+of+seven+non-randomised%2C+single-arm%2C+phase+1%2F2A+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Regulatory cell therapy in kidney transplantation (The ONE Study): a harmonised design and analysis of seven non-randomised, single-arm, phase 1/2A trials.</a> Lancet. 395 (10237), 1627-1639 (2020).</li>
<li>Spanier, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tregs+with+an+MHC+class+II+peptide-specific+chimeric+antigen+receptor+prevent+autoimmune+diabetes+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Tregs with an MHC class II peptide-specific chimeric antigen receptor prevent autoimmune diabetes in mice.</a> J Clin Invest. 133 (18), e168601(2023).</li>
<li>Muller, Y. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precision+engineering+of+an+anti-HLA-A2+chimeric+antigen+receptor+in+regulatory+T+cells+for+transplant+immune+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Precision engineering of an anti-HLA-A2 chimeric antigen receptor in regulatory T cells for transplant immune tolerance.</a> Front Immunol. 12, 686439(2021).</li>
<li>MacDonald, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alloantigen-specific+regulatory+T+cells+generated+with+a+chimeric+antigen+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Alloantigen-specific regulatory T cells generated with a chimeric antigen receptor.</a> J Clin Invest. 126 (4), 1413-1424 (2016).</li>
<li>Boardman, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flagellin-specific+human+CAR+Tregs+for+immune+regulation+in+IBD%5BTitle%5D)+AND+%22J+Autoimmun%22%5BJournal%5D)">Flagellin-specific human CAR Tregs for immune regulation in IBD.</a> J Autoimmun. 134, 102961(2023).</li>
<li>Schreeb, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+design%3A+human+leukocyte+antigen+Cclass+I+molecule+A%28%2A%2902-chimeric+antigen+receptor+regulatory+T+cells+in+renal+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int+Rep%22%5BJournal%5D)">Study design: human leukocyte antigen Cclass I molecule A(*)02-chimeric antigen receptor regulatory T cells in renal transplantation.</a> Kidney Int Rep. 7 (6), 1258-1267 (2022).</li>
<li>Zimmerman, C. M., Robino, R. A., Cochrane, R. W., Dominguez, M. D., Ferreira, L. M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Redirecting+human+conventional+and+regulatory+T+cells+using+chimeric+antigen+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Redirecting human conventional and regulatory T cells using chimeric antigen receptors.</a> Methods Mol Biol. 2748, 201-241 (2024).</li>
<li>Tang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+decrease+of+donor-reactive+T%28regs%29+after+liver+transplantation+limits+T%28reg%29+therapy+for+promoting+allograft+tolerance+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Selective decrease of donor-reactive T(regs) after liver transplantation limits T(reg) therapy for promoting allograft tolerance in humans.</a> Sci Transl Med. 14 (669), eabo2628(2022).</li>
<li>Bender, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+phase+2+randomized+trial+with+autologous+polyclonal+expanded+regulatory+T+cells+in+children+with+new-onset+type+1+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">A phase 2 randomized trial with autologous polyclonal expanded regulatory T cells in children with new-onset type 1 diabetes.</a> Sci Transl Med. 16 (746), eadn2404(2024).</li>
<li>Ferreira, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conference+report%3A+Advanced+Therapies+Week+2023%5BTitle%5D)+AND+%22Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Conference report: Advanced Therapies Week 2023.</a> Regen Med. 18 (4), 297-299 (2023).</li>
<li>Cochrane, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+to+test+human+CAR+T+cells+in+solid+tumors%2C+the+next+frontier+of+CAR+T+cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">How to test human CAR T cells in solid tumors, the next frontier of CAR T cell therapy.</a> Methods Mol Biol. 2748, 243-265 (2024).</li>
<li>Roy, A., Krzykwa, E., Lemieux, R., Neron, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+efficiency+of+gamma-irradiated+versus+mitomycin+C-treated+feeder+cells+for+the+expansion+of+normal+human+cells+in+long-term+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hematother+Stem+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Increased efficiency of gamma-irradiated versus mitomycin C-treated feeder cells for the expansion of normal human cells in long-term cultures.</a> J Hematother Stem Cell Res. 10 (6), 873-880 (2001).</li>
<li>Eyquem, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+a+CAR+to+the+TRAC+locus+with+CRISPR%2FCas9+enhances+tumour+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Targeting a CAR to the TRAC locus with CRISPR/Cas9 enhances tumour rejection.</a> Nature. 543 (7643), 113-117 (2017).</li>
<li>Negrini, M., Wang, G., Heuer, A., Bjorklund, T., Davidsson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AAV+Production+everywhere%3A+a+simple%2C+fast%2C+and+reliable+protocol+for+in-house+AAV+vector+production+based+on+chloroform+extraction%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Neurosci%22%5BJournal%5D)">AAV Production everywhere: a simple, fast, and reliable protocol for in-house AAV vector production based on chloroform extraction.</a> Curr Protoc Neurosci. 93 (1), e103(2020).</li>
<li>Velasco Cardenas, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Harnessing+CD3+diversity+to+optimize+CAR+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Harnessing CD3 diversity to optimize CAR T cells.</a> Nat Immunol. 24 (12), 2135-2149 (2023).</li>
<li>Boomer, J. S., Green, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+enigmatic+tail+of+CD28+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Biol%22%5BJournal%5D)">An enigmatic tail of CD28 signaling.</a> Cold Spring Harb Perspect Biol. 2 (8), a002436(2010).</li>
<li>Suhoski, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+artificial+antigen-presenting+cells+to+express+a+diverse+array+of+co-stimulatory+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Engineering artificial antigen-presenting cells to express a diverse array of co-stimulatory molecules.</a> Mol Ther. 15 (5), 981-988 (2007).</li>
<li>Fung, V. C. W., Rosado-Sanchez, I., Levings, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transduction+of+human+T+cell+subsets+with+lentivirus%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Transduction of human T cell subsets with lentivirus.</a> Methods Mol Biol. 2285, 227-254 (2021).</li>
<li>Bailey-Bucktrout, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-antigen-driven+activation+induces+instability+of+regulatory+T+cells+during+an+inflammatory+autoimmune+response%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Self-antigen-driven activation induces instability of regulatory T cells during an inflammatory autoimmune response.</a> Immunity. 39 (5), 949-962 (2013).</li>
<li>Nakagawa, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Instability+of+Helios-deficient+Tregs+is+associated+with+conversion+to+a+T-effector+phenotype+and+enhanced+antitumor+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Instability of Helios-deficient Tregs is associated with conversion to a T-effector phenotype and enhanced antitumor immunity.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 113 (22), 6248-6253 (2016).</li>
<li>Dawson, N. A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+effects+of+chimeric+antigen+receptor+co-receptor+signaling+domains+in+human+regulatory+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Functional effects of chimeric antigen receptor co-receptor signaling domains in human regulatory T cells.</a> Sci Transl Med. 12 (557), eaaz3866(2020).</li>
<li>Rana, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CAR-+and+TRuC-redirected+regulatory+T+cells+differ+in+capacity+to+control+adaptive+immunity+to+FVIII%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">CAR- and TRuC-redirected regulatory T cells differ in capacity to control adaptive immunity to FVIII.</a> Mol Ther. 29 (9), 2660-2676 (2021).</li>
<li>Battaglia, M., Stabilini, A., Tresoldi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expanding+human+T+regulatory+cells+with+the+mTOR-inhibitor+rapamycin%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Expanding human T regulatory cells with the mTOR-inhibitor rapamycin.</a> Methods Mol Biol. 821, 279-293 (2012).</li>
<li>Brady, B. L., Steinel, N. C., Bassing, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen+receptor+allelic+exclusion%3A+an+update+and+reappraisal%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Antigen receptor allelic exclusion: an update and reappraisal.</a> J Immunol. 185 (7), 3801-3808 (2010).</li>
<li>Samarasinghe, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+characterization+of+alloreactive+T+cells+identifies+CD25+and+CD71+as+optimal+targets+for+a+clinically+applicable+allodepletion+strategy%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Functional characterization of alloreactive T cells identifies CD25 and CD71 as optimal targets for a clinically applicable allodepletion strategy.</a> Blood. 115 (2), 396-407 (2010).</li>
<li>Voss, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FOXP3+protects+conventional+human+T+cells+from+premature+restimulation-induced+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Immunol%22%5BJournal%5D)">FOXP3 protects conventional human T cells from premature restimulation-induced cell death.</a> Cell Mol Immunol. 18 (1), 194-205 (2021).</li>
<li>Collison, L. W., Vignali, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+Treg+suppression+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">In vitro Treg suppression assays.</a> Methods Mol Biol. 707, 21-37 (2011).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Virus adeno-associato&nbsp;( AAV)</td><td>Charles River Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CAR che esprimono il bersaglio delle cellule</td><td></td><td></td> K562, <td>ad es. CD19-K562</td></tr><tr><td>Cesio-137 Irradiatore</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anti-umano CD8 PerCP (clone SK1)</td><td>Biolegend</td><td>344708</td><td></td></tr><tr><td>Anti-umano CD4 PE/Cy7 (clone SK3)</td><td>Biolegend</td><td>344612</td><td></td></tr><tr><td>DynaMag-15</td><td>magnete ThermoFisher</td><td>12301D</td><td></td></tr><tr><td>Ghost BV510 colorante di vitalità</td><td>Cellule TONBO</td><td>13-0870-T100</td><td></td></tr><tr><td>K562</td><td>Collezione di colture di tipo americano</td><td>CCL-243</td><td></td></tr><tr><td>0,5 M EDTA, pH 8,0</td><td>Gibco</td><td></td><td></td>15575020</tr><tr><td>1 M</td><td>HEPES Gibco 15630080</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di cloruro di ammonio</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>7850</td><td></td></tr><tr><td>Anti-umano CD127 PE (clone hIL-7R-M21)</td><td>BD Biosciences</td><td>557938</td><td></td></tr><tr><td>Anti-umano CD25 APC (clone BC96)</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td>302610</td><td></td></tr><tr><td>Anti-umano CD4 FITC (clone SK3)</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td></td><td></td>344604</tr><tr><td>Anti-umano CD71 PE (clone SK1)</td><td>Biolegend</td><td>334106</td><td></td></tr><tr><td>Anti-umano CD8 PerCP (clone SK1)</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td></td><td></td>344707</tr><tr><td>Anti-umano CTLA-4 PerCP-e710</td><td>ThermoFisher</td><td>46-1529-42</td><td></td></tr><tr><td>Anti-umano EGFR APC (clone AY13)</td><td>Biolegend</td><td>352905</td><td></td></tr><tr><td>Anti-umano FOXP3 eFluor 450</td><td>ThermoFisher</td><td>48-4776-42</td><td></td></tr><tr><td>Anti-umano HELIOS PE</td><td>Biolegend</td><td>137216</td><td></td></tr><tr><td>Ca2+ e Mg2+ Dulbecco' libero s Soluzione salina tamponata con fosfato (DPBS)&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>14190144</td><td></td></tr><tr><td>Contatore di cellule (TC20 Automated Cell Counter)</td><td>Bio-Rad</td><td>1450102</td><td></td></tr><tr><td>Vetrini per il conteggio delle cellule</td><td>Bio-Rad</td><td>1450016</td><td></td></tr><tr><td>CellTrace Violet Cell Proliferation Kit</td><td>ThermoFisher</td><td>C34571</td><td></td></tr><tr><td>DNA LoBind Tubes</td><td>Eppendorf</td><td>22431021</td><td></td></tr><tr><td>Easy 50 EasySep magnet&nbsp;</td><td>Kit</td><td></td><td></td></tr> per <tr><td>l'arricchimento delle cellule T EasySep Human CD4+</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>19052</td><td></td></tr><tr><td>EasySep Human CD8+ Kit per l'arricchimento delle cellule T</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>19053</td><td></td></tr><tr><td>Magnete EasySep</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>18000</td><td></td></tr><tr><td>eBioscience Set di tamponi per colorazione del fattore di trascrizione Foxp3</td><td>ThermoFisher</td><td>00-5523-00</td><td></td></tr><tr><td>Provette in polistirene a fondo tondo Falcon con tappo a scatto per filtro cellulare, 5 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-771-23</td><td>40&mu; m</td></tr><tr><td>Siero fetale bovino (FBS)</td><td>Gibco</td><td>26140079</td><td></td></tr><tr><td>Citometro a flusso</td><td>Beckman Coulter</td><td></td><td>CytoFLEX LX U3-V5-B3-Y5-R3-I2</td></tr><tr><td>Selezionatore cellulare attivato da fluorescenza</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td>FACS Aria III Cell Sorter</td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>Dynabeads di espansione e attivazione delle cellule T CD3/28 umane</td><td>Gibco</td><td>11131D</td><td></td></tr><tr><td>Sistema di trasfezione Neon Invitrogen</td><td>10431915</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Invitrogen Neon Transfection System 100 &mu; L Kit</td><td>ThermoFisher</td><td>10114334</td><td></td></tr><tr><td>Lentivirus</td><td>VectorBuilder</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MEM Soluzione di aminoacidi non essenziali&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>Myc Tag anticorpo A647 (clone 9B11)</td><td>Cell Signaling Technologies</td><td>2233S</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM I Siero ridotto</td><td>Medium ThermoFisher</td><td>31985062</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina-Streptomicina Soluzione</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Interleuchina umana ricombinante 2 (rhIL-2)</td><td>Peprotech</td><td>200-02</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 medium, senza glutammina&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>piruvato di sodio</td><td>Gibco</td><td>11360070</td><td></td></tr><tr><td>citometro a flusso spettrale</td><td>Cytek</td><td></td><td>Northern Lights</td></tr><tr><td>TRAC gRNA</td><td>Synthego</td><td></td><td>Sequence (CAGGGTTCTGGATATCTGT)</td></tr><tr><td>TrueCut Cas9 Protein v2</td><td>ThermoFisher</td><td>A36496</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue solution&nbsp;</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>T8154-100ML</td><td></td></tr><tr><td>1/10 Leukopak</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>200-0092</td><td>1-2 miliardi di PBMC</td></tr></tbody></table>

generazione di cellule t regolatorie del recettore dell'antigene chimerico umano

Generation of Human Chimeric Antigen Receptor Regulatory T Cells

Il protocollo qui descritto fornisce una pipeline semplificata e standardizzata per valutare nuovi costrutti di recettori chimerici dell'antigene (CAR) nelle cellule T regolatorie umane (Treg), con l'obiettivo di creare terapie viventi per le malattie autoimmuni, la malattia del trapianto contro l'ospite, il rigetto del trapianto d'organo e l'allergia. La Figura 1 illustra come otteniamo Treg umane altamente pure dal sangue periferico utilizzando FACS (Figura 1A...

Generazione di cellule T regolatorie del recettore dell'antigene chimerico umano

Chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy has reshaped the face of cancer treatment, leading to record remission rates in previously incurable ...

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Immunologia e Infezioni

Noi descriviamo un metodo per generare le cellule T normativo, di memoria e naif da un singolo donatore di sangue umano. Polarizzato Tregs può essere quindi confrontato con altri sottoinsiemi in una varietà di applicazioni genetiche e funzionali con omogeneità genetica, comprendente un saggio di soppressione anche dettagliati qui.

Generazione di cellule T regolatrici indotte da cellule primarie umane T naive e memoria

Questo video mostra una tecnica per produrre cellule T del recettore dell'antigene chimerico (CAR) ex vivo. Le cellule T umane sono incubate con biglie magnetiche rivestite con anticorpi anti-CD3 e anti-CD28, insieme a un terreno integrato con interleuchina-2 (IL-2), che porta all'attivazione e alla proliferazione delle cellule T. Vengono introdotti vettori lentivirali transgenici, che consentono all'RNA transgenico di integrarsi nel genoma ospite ed esprimere il transgene. Ciò si traduce in...

Una tecnica ex vivo per produrre cellule T del recettore dell'antigene chimerico

Questo video dimostra una tecnica per la generazione ex vivo di cellule T del recettore dell'antigene chimerico (CAR) antigene specifico del tumore. I vettori retrovirali che trasportano RNA transgenico vengono mescolati con le cellule della milza in un terreno integrato con interleuchina-2 per promuovere la sopravvivenza e la proliferazione delle cellule T. La miscela viene quindi trasferita su una piastra rivestita con frammenti di fibronectina umana ricombinante e centrifugata per facilitare...

Una tecnica ex vivo per generare cellule T del recettore dell'antigene chimerico tumore-specifico

Questo video dimostra una tecnica per generare cellule T del recettore chimerico dell'antigene (CAR) antigene-specifico attraverso la trasduzione retrovirale. Le cellule T CD8+ murine attivate vengono aggiunte a una piastra a micropozzetti rivestita con frammenti di fibronectina ricombinante. Vengono quindi introdotti vettori retrovirali contenenti RNA transgenico che codifica per un recettore chimerico dell'antigene (CAR) antigene-specifico e la piastra viene centrifugata per facilitare la...

Una tecnica per la generazione di cellule T CAR antigene-specifiche

Descriviamo un approccio per generare in modo affidabile le cellule T del recettore dell'antigene chimerico (CAR) e testare la loro differenziazione e funzione in vitro e in vivo.

Produzione Chimeric Antigen Receptor (CAR) Cellule T per l'immunoterapia adottiva

Questo protocollo delinea il processo di trasduzione delle cellule T umane primarie con un gene di interesse, garantendo la compatibilità con gli standard delle buone pratiche di fabbricazione (GMP).

Una procedura conforme alle GMP per la generazione di cellule T geneticamente modificate

Questo articolo descrive in dettaglio il processo di produzione delle cellule T del recettore dell'antigene chimerico per uso clinico, in particolare utilizzando un processore cellulare automatizzato in grado di eseguire la trasduzione virale e la coltivazione delle cellule T. Forniamo raccomandazioni e descriviamo le insidie che dovrebbero essere considerate durante lo sviluppo del processo e l'implementazione di uno studio clinico in fase iniziale.

Produzione di cellule T del recettore dell'antigene chimerico su un processore cellulare automatizzato

Questo protocollo semplifica la produzione di vettori retrovirali e la trasduzione delle cellule T murine, facilitando la generazione efficiente di cellule CAR-T di topo.

Generazione efficiente di cellule T del recettore chimerico murino dell'antigene (CAR)-T

Qui presentiamo un protocollo per la generazione e la verifica funzionale di cellule T sensibili al recettore chimerico dell'antigene (CAR)-T sensibili all'ipossia. Questo protocollo presenta la generazione di cellule CAR-T sensibili all'ipossia basate su lentivirus e la loro caratterizzazione, inclusa la convalida dell'espressione CAR ipossia-dipendente e della citotossicità selettiva.

Generazione e verifica funzionale di cellule T del recettore dell'antigene chimerico sensibili all'ipossia

CD4+ Le cellule T regolatorie sono potenti immunomodulatori e svolgono importanti funzioni nell'omeostasi immunitaria. La scarsità di queste cellule nel sangue periferico rende difficili gli studi funzionali, in particolare nel contesto dell'infezione da HIV-1. Qui descriviamo un metodo per isolare ed espandere le Treg CD4+ funzionali dal sangue periferico di individui con infezione da HIV-1.

Nuovi strumenti per espandere cellule T regolatorie di individui HIV-1-infetti

Scopri come generare cellule T regolatorie CAR umane per terapie immunitarie. Questo protocollo standardizzato utilizza modelli murini umanizzati per ottimizzare l'affinità del recettore e migliorare il profilo delle citochine.

Generazione di cellule T regolatorie del recettore dell'antigene chimerico umano

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