Name: Colorazione viva/morta per la quantificazione di cellule vitali ma non coltivabili nei batteri che causano ferite trattati con miele di Manuka (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-25T12:40:00.000+00:00
Duration: 6 min 29 s
Description: Scopri la colorazione viva/morta per quantificare le cellule VBNC nei batteri trattati con miele di Manuka. Questo metodo microbiologico aiuta a confrontare gli effetti degli antibiotici convenzionali.

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<ol><li>Spoering, A., Lewis, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biofilms+and+planktonic+cells+of+Pseudomonas+aeruginosa+have+similar+resistance+to+killing+by+antimicrobials%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Biofilms and planktonic cells of Pseudomonas aeruginosa have similar resistance to killing by antimicrobials.</a> J Bacteriol. 183 (23), 6746-6751 (2001).</li>
<li>Mulcahy, L. R., Burns, J. L., Lory, S., Lewis, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+of+Pseudomonas+aeruginosa+strains+producing+high+levels+of+persister+cells+in+patients+with+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Emergence of Pseudomonas aeruginosa strains producing high levels of persister cells in patients with cystic fibrosis.</a> J Bacteriol. 192 (23), 6191-6199 (2010).</li>
<li>Li, L., Mendis, N., Trigui, H., Oliver, J. D., Faucher, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+the+viable+but+non-culturable+state+in+human+bacterial+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22F+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The importance of the viable but non-culturable state in human bacterial pathogens.</a> F Microbiol. 5, 00258(2014).</li>
<li>Reygaert, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+of+the+antimicrobial+resistance+mechanisms+of+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22AIMS+Microbiol%22%5BJournal%5D)">An overview of the antimicrobial resistance mechanisms of bacteria.</a> AIMS Microbiol. 4 (3), 482-450 (2018).</li>
<li>Ayrapetyan, M., Williams, T. C., Baxter, R., Oliver, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viable+but+nonculturable+and+persister+cells+coexist+stochastically+and+are+induced+by+human+serum%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Viable but nonculturable and persister cells coexist stochastically and are induced by human serum.</a> Infect Immun. 83 (11), 4194-4203 (2015).</li>
<li>Cabral, D. J., Wurster, J. I., Belenky, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic+persistence+as+a+metabolic+adaptation%3A+Stress%2C+metabolism%2C+the+host%2C+and+new+directions%5BTitle%5D)+AND+%22PHARH2%22%5BJournal%5D)">Antibiotic persistence as a metabolic adaptation: Stress, metabolism, the host, and new directions.</a> PHARH2. 11 (1), 11010014(2018).</li>
<li>Heidelberg, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+aerosolization+on+culturability+and+viability+of+gram-negative+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Environ+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Effect of aerosolization on culturability and viability of gram-negative bacteria.</a> Appl Environ Microbiol. 63 (9), 3585-3588 (1997).</li>
<li>Cook, K. L., Bolster, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+of+Campylobacter+jejuni+and+Escherichia+coli+in+groundwater+during+prolonged+starvation+at+low+temperatures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Survival of Campylobacter jejuni and Escherichia coli in groundwater during prolonged starvation at low temperatures.</a> J Appl Microbiol. 103 (3), 573-583 (2007).</li>
<li>Xu, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+and+viability+of+nonculturable+Escherichia+coli+and+Vibrio+cholerae+in+the+estuarine+and+marine+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Microbl+Ecol%22%5BJournal%5D)">Survival and viability of nonculturable Escherichia coli and Vibrio cholerae in the estuarine and marine environment.</a> Microbl Ecol. 8 (4), 313-323 (1982).</li>
<li>Qi, Z., Huang, Z., Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolism+differences+of+biofilm+and+planktonic+Pseudomonas+aeruginosa+in+viable+but+nonculturable+state+induced+by+chlorine+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Total+Environ%22%5BJournal%5D)">Metabolism differences of biofilm and planktonic Pseudomonas aeruginosa in viable but nonculturable state induced by chlorine stress.</a> Sci Total Environ. 821, 153374(2022).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+on+the+Viable+but+Non-culturable+%28VBNC%29+state+formation+of+staphylococcus+aureus+and+its+control+in+food+system%5BTitle%5D)+AND+%22F+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Study on the Viable but Non-culturable (VBNC) state formation of staphylococcus aureus and its control in food system.</a> F Microbiol. 11, 599739(2020).</li>
<li>Oryan, A., Alemzadeh, E., Moshiri, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+properties+and+therapeutic+activities+of+honey+in+wound+healing%3A+A+narrative+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Tissue+Viability%22%5BJournal%5D)">Biological properties and therapeutic activities of honey in wound healing: A narrative review and meta-analysis.</a> J Tissue Viability. 25 (2), 98-118 (2016).</li>
<li>Lusby, P. E., Coombes, A. L., Wilkinson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bactericidal+Activity+of+different+honeys+against+pathogenic+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Med+Res%22%5BJournal%5D)">Bactericidal Activity of different honeys against pathogenic bacteria.</a> Arch Med Res. 36 (5), 464-467 (2005).</li>
<li>Mandal, M. D., Mandal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Honey%3A+Its+medicinal+property+and+antibacterial+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Asian+Pac+J+Trop.+Biomed%22%5BJournal%5D)">Honey: Its medicinal property and antibacterial activity.</a> Asian Pac J Trop. Biomed. 1 (2), 154-160 (2011).</li>
<li>Carter, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+Manuka+Honey%3A+No+longer+so+alternative%5BTitle%5D)+AND+%22F+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Therapeutic Manuka Honey: No longer so alternative.</a> F Microbiol. 7, 00569(2016).</li>
<li>Cooper, R. A., Molan, P. C., Harding, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+sensitivity+to+honey+of+Gram-positive+cocci+of+clinical+significance+isolated+from+wounds%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The sensitivity to honey of Gram-positive cocci of clinical significance isolated from wounds.</a> J Appl Microbiol. 93 (5), 857-863 (2002).</li>
<li>George Narelle May, C., Keith, F. Antibacterial Honey: In-vitro activity against clinical isolates of MRSA, VRE, and other multiresistant Gram-negative organisms. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGeorge+Narelle+May%2C+C+%22HMP+Global+Learning+Network%22">HMP Global Learning Network</a>. , https://www.hmpgloballearningnetwork.com/site/wounds/article/7751 (2007).</li>
<li>Blair, S. E., Cokcetin, N. N., Harry, E. J., Carter, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+unusual+antibacterial+activity+of+medical-grade+Leptospermum+honey%3A+Antibacterial+spectrum%2C+resistance+and+transcriptome+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Soc+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The unusual antibacterial activity of medical-grade Leptospermum honey: Antibacterial spectrum, resistance and transcriptome analysis.</a> Eur Soc Clin Microbiol. 28 (10), 1199-1208 (2009).</li>
<li>Cooper, R. A., Jenkins, L., Henriques, A. F. M., Duggan, R. S., Burton, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absence+of+bacterial+resistance+to+medical-grade+manuka+honey%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Soc+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Absence of bacterial resistance to medical-grade manuka honey.</a> Eur Soc Clin Microbiol. 29 (10), 1237-1241 (2010).</li>
<li>Lu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Honey+can+inhibit+and+eliminate+biofilms+produced+by+Pseudomonas+aeruginosa%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Honey can inhibit and eliminate biofilms produced by Pseudomonas aeruginosa.</a> Sci Rep. 9 (1), 18160(2019).</li>
<li>Bischofberger, A. M., Pfrunder Cardozo, K. R., Baumgartner, M., Hall, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+honey+resistance+in+experimental+populations+of+bacteria+depends+on+the+type+of+honey+and+has+no+major+side+effects+for+antibiotic+susceptibility%5BTitle%5D)+AND+%22Evol+Appl%22%5BJournal%5D)">Evolution of honey resistance in experimental populations of bacteria depends on the type of honey and has no major side effects for antibiotic susceptibility.</a> Evol Appl. 14 (5), 1314-1327 (2021).</li>
<li>Cunningham, E., O'Byrne, C., Oliver, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+weak+acids+on+Listeria+monocytogenes+survival%3A+Evidence+for+a+viable+but+nonculturable+state+in+response+to+low+pH%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Control%22%5BJournal%5D)">Effect of weak acids on Listeria monocytogenes survival: Evidence for a viable but nonculturable state in response to low pH.</a> Food Control. 20 (12), 1141-1144 (2009).</li>
<li>Kogure, K., Simidu, U., Taga, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+tentative+direct+microscopic+method+for+counting+living+marine+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Can+J+Microbiol%22%5BJournal%5D)">A tentative direct microscopic method for counting living marine bacteria.</a> Can J Microbiol. 25 (3), 415-420 (1979).</li>
<li>Albertini, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+multiparameter+analysis+for+Vibrio+alginolyticus+viable+but+nonculturable+state+determination%5BTitle%5D)+AND+%22Cytom+J+Int+Soc+Anal+Cytol%22%5BJournal%5D)">Use of multiparameter analysis for Vibrio alginolyticus viable but nonculturable state determination.</a> Cytom J Int Soc Anal Cytol. 69 (4), 260-265 (2006).</li>
<li>Nocker, A., Camper, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+approaches+toward+preferential+detection+of+viable+cells+using+nucleic+acid+amplification+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Microbiol+Lett%22%5BJournal%5D)">Novel approaches toward preferential detection of viable cells using nucleic acid amplification techniques.</a> FEMS Microbiol Lett. 291 (2), 137-142 (2009).</li>
<li>Trevors, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viable+but+non-culturable+%28VBNC%29+bacteria%3A+Gene+expression+in+planktonic+and+biofilm+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Microbiol+Methods%22%5BJournal%5D)">Viable but non-culturable (VBNC) bacteria: Gene expression in planktonic and biofilm cells.</a> J Microbiol Methods. 86 (2), 266-273 (2011).</li>
<li>Ankley, L. M., Monteiro, M. P., Camp, K. M., O'Quinn, R., Castillo, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manuka+honey+chelates+iron+and+impacts+iron+regulation+in+key+bacterial+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22J+App+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Manuka honey chelates iron and impacts iron regulation in key bacterial pathogens.</a> J App Microbiol. 128 (4), 1015-1024 (2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Mueller Hinton brodo</td><td>Fisher Bioreagents</td><td>B12322</td><td></td></tr><tr><td>Luria Bertani (LB) brodo&nbsp;</td><td>Fisher Bioreagents</td><td>BP142602</td><td></td></tr><tr><td>BD Difco Agar</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0812-07-1</td><td></td></tr><tr><td>cloruro di sodio</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>S3014-500g</td><td></td></tr><tr><td>meropenem</td><td>TargetMol</td><td>T0224</td><td></td></tr><tr><td>tobramicina</td><td>Selleck Chemicals</td><td>S2514</td><td></td></tr><tr><td>Staphylococcus aureus&nbsp;</td><td>ATCC</td><td>ATCC29213</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Pseudomonas aeruginosa</td><td>Incubatore</td><td></td> a scuotimento ATCC ATCC9721 <td></td></tr><tr><td></td><td>Eppendorf</td><td>incubatore M13520000</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Benchmark Scientific</td><td>H2200-H&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Manukaguard Manuka Honey</td><td>Amazon</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>DMIL microscopio a fluorescenza invertito&nbsp;</td><td>Leica Microsystems</td><td>11521265</td><td></td></tr><tr><td>Fotocamera digitale</td><td>Leica Microsystems</td><td>12730522</td><td></td></tr><tr><td>provette per falco da 15 mL</td><td>Genesee Scientific</td><td>28-103</td><td></td></tr><tr><td>pipette sierologiche</td><td>Diagnocine</td><td>DP-LB0100005, DP-LB010010</td><td></td></tr><tr><td>Pipet Aid Pipettor</td><td>Drummond Scientific Company</td><td>4-000-101</td><td></td></tr><tr><td>Bruciatore Bunsen</td><td>Fisher Scientific</td><td>S48108</td><td></td></tr><tr><td>Pipette Rainin</td><td>Pipette.com</td><td>bilancia L-20, L-200, L-1000</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Mettler Toledo</td><td>XS603S</td><td></td></tr> piastra <tr><td>a 96 pozzetti</td><td>Falcon</td><td>351172</td><td></td></tr><tr><td>ansa di inoculazione</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-104-5</td><td></td></tr><tr><td>isopropanolo</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2618-1</td><td></td></tr><tr><td>vetro divaricatore</td> fatto <td>in casa</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Kit di colorazione per morti vivi per batteri</td> Tubi per microfugi <td>Invitrogen</td><td>L7012</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Biologix Research Company</td><td>SKU 80-1500/P80-1500</td><td></td></tr><tr><td>foglio di stagnola</td><td>Costco</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Software per la creazione di figure</td><td>GraphPad</td><td>NA</td><td>GraphPad Prism è stato utilizzato per la creazione di figure e l'esecuzione di analisi statistiche.</td></tr></tbody></table>

colorazione viva/morta per la quantificazione di cellule vitali ma non coltivabili nei batteri che causano ferite trattati con miele di manuka

Live/Dead Staining for Quantifying Viable but Not Culturable Cells in Manuka Honey-Treated Wound-Causing Bacteria

Le forme di vita batteriche vitali ma non coltivabili (VBNC) sono indotte da fattori di stress, incluso il trattamento antibiotico, e causano infezioni ricorrenti a causa della loro tolleranza agli antibiotici. Poiché l'MH è un antimicrobico ad ampio spettro a cui è stata raramente rilevata resistenza, è stato ipotizzato che l'MH inducesse meno VBNC rispetto agli antibiotici convenzionali. Il metodo qui descritto è stato utilizzato per quantificare le VBNC formate da due batteri che causano ferite, S. aureus e <...

Colorazione viva/morta per la quantificazione di cellule vitali ma non coltivabili nei batteri che causano ferite trattati con miele di Manuka

Antibiotic resistance and tolerance among bacteria pose a significant threat to global health. Mechanisms contributing to antibiotic resistance and ...

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Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

Questo video descrive un metodo per purificare Wolbachia pipientis da una linea di cellule Anopheles gambiae e poi la coltura endosymbiont nella cella senza medium. Un test per la vitalità del batterio è dimostrata.

Il mantenimento di Wolbachia in Cell-free medio

Fonte: Anderson, Q. L., et al. Un patosistema C . elegans ad alto rendimento, ad alto contenuto e a base liquida. J. Vis. Exp. (2018)Il video mostra un test a base liquida in cui larve di C. elegans geneticamente modificate sono esposte a batteri patogeni in una micropiastra. Le tossine batteriche secrete nel mezzo inducono stress e morte dell'ospite. Un colorante fluorescente colora i vermi morti, consentendo la quantificazione della mortalità basata sull'imaging per valutare la suscettibilità...

Valutazione della mortalità indotta da batteri patogeni nelle larve di C. elegans

Source: Calatayud Arroyo, M., et al. Assessing the Viability of a Synthetic Bacterial Consortium on the In Vitro Gut Host-microbe Interface. J. Vis. Exp. (2018)The video demonstrates a method to evaluate the viability of anaerobic oral bacteria using fluorescent dyes and flow cytometry. It begins with culturing bacteria in oxygen-free broth, followed by resuspending a single colony from a blood agar plate. After incubation and dilution, the culture is stained with membrane-permeable and...

Fluorescence-Based Viability Assessment of Oral Anaerobic Bacteria

Il video mostra un test di uccisione opsonofagocitaria in vitro utilizzando una co-coltura di neutrofili umani con Streptococcus pneumoniae. Gli anticorpi e le proteine del complemento facilitano l'opsonizzazione dei batteri, consentendo ai neutrofili di riconoscere e uccidere i batteri, mostrando un'attività opsonofagocitaria di successo.

Valutazione dell'attività di uccisione opsonofagocitaria contro patogeni batterici

Questo video mostra un test per studiare l'effetto della rigidità della matrice extracellulare (ECM) sull'infezione batterica delle cellule aderenti. Gli idrogel di poliacrilammide di rigidità variabile, ricoperti di collagene, sono stratificati in una piastra a più pozzetti per imitare la rigidità della ECM fisiologica. Dopo aver sovrapposto cellule endoteliali umane sugli idrogel e aver infettato le cellule con batteri Listeria monocytogenes ingegnerizzati per esprimere una proteina...

Un test per studiare l'impatto della rigidità della matrice extracellulare sull'infezione batterica

Centrale al campo della patogenesi batterica è la capacità di definire se e come i microbi sopravvivono dopo l'esposizione a cellule eucariotiche. Questo articolo descrive i protocolli per l'uso di coloranti fluorescenti che rivelano la vitalità dei singoli batteri all'interno e associati alle cellule ospiti.

Microscopia a fluorescenza metodi per determinare la vitalità di batteri in associazione con cellule di mammifero

Le infezioni da biofilm mostrano un'alta tolleranza alla chemioterapia. Nessun singolo test è in grado di catturare la complessità dei biofilm. Invece, sono necessari saggi complementari. Presentiamo una piattaforma di screening (sviluppata per S. aureus) che combina saggi di vitalità, biomassa e matrice di biofilm. Consente la scoperta di farmaci anti-biofilm, compresa la valutazione degli effetti chemioterapici a lungo termine.

Una piattaforma di test anti-biofilm Adatto per l&#39;esplorazione del Biblioteche composto naturale

Un'analisi di ATP-misurazione semplice e live/dead metodo di colorazione sono stati usati per quantificare e visualizzare le gonorree di Neisseria sopravvivenza dopo il trattamento con ceftriaxone. Questo protocollo può essere esteso per esaminare gli effetti antimicrobici di qualsiasi antibiotico e può essere utilizzato per definire la concentrazione inibitoria minima di antibiotici in biofilm batterici.

L'esame quantitativo di suscettibilità antibiotica nei test di Neisseria gonorrhoeae aggregati utilizzando ATP-utilizzazione commerciale Live/Dead macchiatura

Qui descritto è un metodo per l'analisi di espressione genica batterica nei tessuti animali ad un livello cellulare. Questo metodo fornisce una risorsa per studiare la diversità fenotipica che si verificano all'interno di una popolazione batterica in risposta all'ambiente del tessuto durante l'infezione.

Un metodo basato su fluorescenza per studiare la regolazione genica batterica nei tessuti infetti

Il protocollo descrive un metodo passo-passo per impostare un modello di pelle ferita ovina ex vivo infettata da Staphylococcus aureus. Questo modello ad alto rendimento simula meglio le infezioni in vivo rispetto alle tecniche di microbiologia convenzionali e presenta ai ricercatori una piattaforma fisiologicamente rilevante per testare l'efficacia degli antimicrobici emergenti.

Un nuovo modello di ferita della pelle ovina ex vivo ad alta produttività per testare antibiotici emergenti

Qui, presentiamo un protocollo per quantificare la sopravvivenza post-stress in campioni di lievito. Il test utilizza due coloranti fluorescenti, SYTO 9 e ioduro di propidio (PI), per quantificare l'integrità della membrana plasmatica. Utilizza la citometria a flusso per fornire stime quantitative e riproducibili delle frazioni cellulari vive, morte e danneggiate per campioni di stress post-ossidativo.

Un test LIVE/DEAD ottimizzato abbinato alla citometria a flusso per quantificare la sopravvivenza post-stress nelle cellule di lievito

Scopri la colorazione viva/morta per quantificare le cellule VBNC nei batteri trattati con miele di Manuka. Questo metodo microbiologico aiuta a confrontare gli effetti degli antibiotici convenzionali.

Colorazione viva/morta per la quantificazione di cellule vitali ma non coltivabili nei batteri che causano ferite trattati con miele di Manuka (Video) | JoVE Journal

Colorazione viva/morta per la quantificazione di cellule vitali ma non coltivabili nei batteri che causano ferite trattati con miele di Manuka

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