Name: Iniezione endovenosa ottimizzata nel pesce zebra adulto (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-12-20T14:40:00.000+00:00
Duration: 5 min 17 s
Description: Impara un protocollo di iniezione endovenosa ottimizzato nel pesce zebra adulto per studi ematologici. Questo metodo migliora la sopravvivenza e l'innesto cellulare rispetto alle tecniche intracardiaca e retro-orbitale.

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<ol><li>Choi, T. Y., Choi, T. I., Lee, Y. R., Choe, S. K., Kim, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+an+animal+model+for+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as an animal model for biomedical research.</a> Exp Mol Med. 53 (3), 310-317 (2021).</li>
<li>Lieschke, G. J., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+human+disease%3A+zebrafish+swim+into+view%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Animal models of human disease: zebrafish swim into view.</a> Nat Rev Genet. 8 (5), 353-367 (2007).</li>
<li>Wu, J. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+xenograft+in+zebrafish+embryos%3A+a+new+platform+for+translational+research+in+gastric+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Patient-derived xenograft in zebrafish embryos: a new platform for translational research in gastric cancer.</a> J Exp Clin Cancer Res. 36 (1), 160(2017).</li>
<li>Welker, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correction%3A+Standardized+orthotopic+xenografts+in+zebrafish+reveal+glioma+cell-line-specific+characteristics+and+tumor+cell+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Correction: Standardized orthotopic xenografts in zebrafish reveal glioma cell-line-specific characteristics and tumor cell heterogeneity.</a> Dis Model Mech. 9 (9), 1063-1065 (2016).</li>
<li>Stoletov, K., Montel, V., Lester, R. D., Gonias, S. L., Klemke, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+imaging+of+the+dynamic+tumor+cell+vascular+interface+in+transparent+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">High-resolution imaging of the dynamic tumor cell vascular interface in transparent zebrafish.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (44), 17406-17411 (2007).</li>
<li>Etchin, J. P. K. J., Look, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+model+for+the+study+of+human+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a model for the study of human cancer.</a> Methods Cell Biol. 105, 309-337 (2011).</li>
<li>Khan, N., Mahajan, N. K., Sinha, P., Jayandharan, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+efficient+method+to+generate+xenograft+tumor+models+of+acute+myeloid+leukemia+and+hepatocellular+carcinoma+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Cells+Mol+Dis%22%5BJournal%5D)">An efficient method to generate xenograft tumor models of acute myeloid leukemia and hepatocellular carcinoma in adult zebrafish.</a> Blood Cells Mol Dis. 75, 48-55 (2019).</li>
<li>Corkery, D. P., Dellaire, G., Berman, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leukaemia+xenotransplantation+in+zebrafish--chemotherapy+response+assay+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Haematol%22%5BJournal%5D)">Leukaemia xenotransplantation in zebrafish--chemotherapy response assay in vivo.</a> Br J Haematol. 153 (6), 786-789 (2011).</li>
<li>He, B. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functions+of+flt3+in+zebrafish+hematopoiesis+and+its+relevance+to+human+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Functions of flt3 in zebrafish hematopoiesis and its relevance to human acute myeloid leukemia.</a> Blood. 123 (16), 2518-2529 (2014).</li>
<li>Wang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+IDH2%28R172K%29+and+IDH2%28R140Q%29+zebrafish+models+recapitulated+features+of+human+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Transgenic IDH2(R172K) and IDH2(R140Q) zebrafish models recapitulated features of human acute myeloid leukemia.</a> Oncogene. 42 (16), 1331(2023).</li>
<li>Fan, R. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+xenograft+model+for+studying+mechanism+and+treatment+of+non-small+cell+lung+cancer+brain+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Zebrafish xenograft model for studying mechanism and treatment of non-small cell lung cancer brain metastasis.</a> J Exp Clin Cancer Res. 40 (1), 371(2021).</li>
<li>LeBlanc, J., Bowman, T. V., Zon, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+whole+kidney+marrow+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Transplantation of whole kidney marrow in adult zebrafish.</a> J Vis Exp. (2), e159(2007).</li>
<li>Pugach, E. K., Li, P., White, R., Zon, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retro-orbital+injection+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Retro-orbital injection in adult zebrafish.</a> J Vis Exp. (34), e1645(2009).</li>
<li>Benjamin, D. C., Hynes, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+imaging+of+metastasis+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">Intravital imaging of metastasis in adult zebrafish.</a> BMC Cancer. 17 (1), 660(2017).</li>
<li>Hilligan, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+administration+of+BCG+protects+mice+against+lethal+SARS-CoV-2+challenge%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Intravenous administration of BCG protects mice against lethal SARS-CoV-2 challenge.</a> J Exp Med. 219 (2), e20211862(2022).</li>
<li>Moreo, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+administration+of+BCG+in+mice+promotes+natural+killer+and+T+cell-mediated+antitumor+immunity+in+the+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Intravenous administration of BCG in mice promotes natural killer and T cell-mediated antitumor immunity in the lung.</a> Nat Commun. 14 (1), 6090(2023).</li>
<li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+administration+of+IL-12+encoding+self-replicating+RNA-lipid+nanoparticle+complex+leads+to+safe+and+effective+antitumor+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Intravenous administration of IL-12 encoding self-replicating RNA-lipid nanoparticle complex leads to safe and effective antitumor responses.</a> Sci Rep. 14 (1), 7366(2024).</li>
<li>Saleem, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+best+practice+for+validating+tail+vein+injections+in+rat+with+near-infrared-labeled+agents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A new best practice for validating tail vein injections in rat with near-infrared-labeled agents.</a> J Vis Exp. (146), e59295(2019).</li>
<li>Rojas, A. M., Shiau, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain-localized+and+Intravenous+Microinjections+in+the+Larval+Zebrafish+to+Assess+Innate+Immune+Response%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">Brain-localized and Intravenous Microinjections in the Larval Zebrafish to Assess Innate Immune Response.</a> Bio Protoc. 11 (7), e3978(2021).</li>
<li>van Soest, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+static+immersion+and+intravenous+injection+systems+for+exposure+of+zebrafish+embryos+to+the+natural+pathogen+Edwardsiella+tarda%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Immunol%22%5BJournal%5D)">Comparison of static immersion and intravenous injection systems for exposure of zebrafish embryos to the natural pathogen Edwardsiella tarda.</a> BMC Immunol. 12, 58(2011).</li>
<li>Cianciolo Cosentino, C., Roman, B. L., Drummond, I. A., Hukriede, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+microinjections+of+zebrafish+larvae+to+study+acute+kidney+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Intravenous microinjections of zebrafish larvae to study acute kidney injury.</a> J Vis Exp. (42), e2079(2010).</li>
<li>Gerlach, G. F., Schrader, L. N., Wingert, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissection+of+the+adult+zebrafish+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Dissection of the adult zebrafish kidney.</a> J Vis Exp. (54), e2839(2011).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Autoclavi Sterilizzatore a vapore</td><td>HIRAYAMA&nbsp;</td><td>HRG-140</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga 5424</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Countess 3 Contatore di celle automatizzato</td><td>Thermofisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Countess II FL</td><td>Invitrogen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Etile 3-amminobenzoato sale di metanosolfonato (Tricaina)</td><td>Sigma-aldrich</td><td>MKCL9483</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 40 &; m Filtro cellulare</td><td>CORNING</td><td></td><td>blu, sterile, confezionato singolarmente, 50/cartone</td></tr><tr><td>FBS, qualificato</td><td>Gibco</td><td>26140079</td><td></td></tr><tr><td>FITC-destrano (MW 10000)&nbsp;</td><td>MedChemExpress</td><td>60842-46-8</td><td></td></tr><tr><td>Ago per iniezione</td><td>Hamilton</td><td>HAMI207434</td><td>34 G, lunghezza 10 mm</td></tr><tr><td>Micro siringa</td><td>Hamilton</td><td>7635-01&nbsp;</td><td>10 &micro; Capacità L, Modello 701 RN</td></tr><tr><td>Nikon SMZ18</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS pH 7,4 (1x)</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>Penicillina-Streptomicina (5.000 U/mL)</td><td>Gibco&commercio;</td><td>15070063</td><td>100x</td></tr><tr><td>puntali per pipette</td><td>Eppendorf&nbsp;</td><td>epTIPS</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta a canale singolo</td><td>Eppendorf&nbsp;</td><td>05-403-151</td><td></td></tr><tr><td>Acqua distillata ultrapura</td><td>Invitrogen</td><td>10977015</td><td></td></tr></tbody></table>

iniezione endovenosa ottimizzata nel pesce zebra adulto

Optimized Intravenous Injection in Adult Zebrafish

Per valutare l'efficacia e la precisione dei diversi metodi di iniezione nei pesci Casper adulti, è stata condotta un'analisi comparativa utilizzando tecniche intracardiache, RO e IV (Figura 2A). Sono state iniettate quantità variabili di cellule WKM da pesci Tg(mpo: EGFP), ciascuna miscelata con colorante FITC-destrano a concentrazioni di 1 × 105 e 3 × 105 cellule. Il successo di ciascun metodo è stato determinato attraverso una valutazione microscopica immediata della presenza del segnale GFP dopo l'iniezione. I risultati hanno rivelato variazioni significative nel successo della consegna tra i metodi. Il metodo di iniezione endovenosa ha dimostrato la massima efficacia, con segnali GFP rilevati in 41 pesci su 43. Al contrario, il metodo RO ha mostrato un successo limitato, con iniezioni di successo osservate solo in 3 pesci su 37. Il metodo intracardiaco ha ottenuto un rilascio efficace in 11 pesci su 40 (Figura 2A). È stata inoltre monitorata la sopravvivenza dei pesci trapiantati. I pesci iniettati tramite i metodi RO e intracardiaci avevano tassi di sopravvivenza significativamente più bassi rispetto a quelli iniettati per via endovenosa (Figura 2B). In particolare, il numero di cellule iniettate ha influenzato i tassi di sopravvivenza tra i pesci iniettati per via endovenosa, con i riceventi che hanno ricevuto 3 × 105 cellule che hanno mostrato una migliore sopravvivenza. Questi risultati evidenziano l'efficacia e l'affidabilità superiori del metodo di iniezione endovenosa nel veicolare cellule e sostanze nel pesce zebra adulto.
L'efficienza di attecchimento delle cellule WKM nel pesce Casper ricevente è stata accuratamente valutata monitorando il segnale GFP dalle cellule trapiantate. Nei pesci che hanno ricevuto iniezioni endovenose, i segnali GFP erano rilevabili già dal terzo giorno dopo il trapianto (Figura 2C), indicando un processo di attecchimento rapido ed efficace. Al contrario, i pesci sottoposti a iniezioni RO e intracardiache hanno mostrato un'emergenza ritardata del segnale GFP, indicando un tasso di attecchimento più lento. Al 17° giorno dopo il trapianto, le cellule trapiantate avevano prevalentemente ripopolato il midollo renale, con i segnali GFP più pronunciati osservati nei pesci iniettati per via endovenosa (Figura 2C). L'analisi citofluorimetrica della KM dai riceventi ha ulteriormente sottolineato l'efficacia del metodo di iniezione endovenosa. Nei riceventi inizialmente iniettati con 3 × 105 cellule per via endovenosa, circa il 18% delle cellule nel KM era GFP-positivo, una proporzione simile a quella trovata nel midollo renale del pesce donatore Tg (mpo: EGFP) che non aveva subito alcun trapianto (Figura 2D, E). Al contrario, l'iniezione intracardiaca ha prodotto circa il 5% di cellule GFP-positive, mentre il metodo RO ha prodotto solo circa il 2% di cellule GFP-positive nel midollo renale dei riceventi. Inoltre, il tasso di attecchimento era correlato positivamente con il numero di cellule iniettate, dimostrando che dosi cellulari più elevate portavano a un maggiore attecchimento. Questi risultati confermano la robustezza della tecnica di iniezione endovenosa nel facilitare l'attecchimento cellulare e il successivo ripopolamento del midollo renale.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67463/67463fig01v2.jpg"> 
Figura 1: Risultati di sopravvivenza dopo l'irradiazione e l'iniezione endovenosa in zebrafish adulto. (A) I pesci Casper sono stati esposti a irradiazioni fino a 35 Gy e hanno monitorato la sopravvivenza per 30 giorni, confermando 25 Gy come dosaggio subletale (n = 10 per tutti i gruppi). (B) Diagrammi schematici che illustrano i siti di iniezione sia per il pesce zebra Casper che per il pesce TU, insieme ad esempi di pesci iniettati con successo. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67463/67463fig01largev2.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67463/67463fig02v2.jpg"> 
Figura 2: Confronto tra iniezioni retro-orbitali, intracardiache ed endovenose in zebrafish adulto. (A) Rappresentazioni schematiche ed esiti rappresentativi di metodi di iniezione RO, intracardiaci e IV in zebrafish adulto. I numeri nell'angolo in basso a destra indicano il conteggio dei pesci iniettati con successo o in modo errato rispetto al numero totale tentato per ciascun metodo, il segnale GFP è stato verificato al microscopio a fluorescenza immediatamente dopo l'iniezione. (B) Sopravvivenza globale dei riceventi dopo trapianto con un numero diverso di cellule del midollo renale del donatore con diversi metodi di iniezione (IV-100K: n = 24; Intracardiac-100K: n = 10; RO-100K: n = 12; IV-300K: n = 20; Intracardiac-300K: n = 6; RO-300K: n = 8). (C) Osservazione dell'efficienza dell'attecchimento nei riceventi dopo il trapianto tramite metodi di iniezione RO, intracardiaci e IV (D) Grafico rappresentativo della citometria a flusso per le cellule GFP-positive in KM dei riceventi a 17 giorni dopo il trapianto. (E) La percentuale di cellule GFP+ nella KM dei riceventi 17 giorni dopo il trapianto, così come nella KM dei pesci Tg(mpo:EGFP) donatori senza irradiazione (IV-100K: n = 30; Intracardiac-100K: n = 28; RO-100K: n = 22; IV-300K: n = 22; Intracardiac-300K: n = 26; RO-300K: n = 18). I dati sono medi ± s.e.m. L'ANOVA unidirezionale è stata eseguita per D. Il test Log-Rank è stato eseguito per B. *P &lt; 0,05, **P &lt; 0,01, ***P &lt; 0,001, ****P &lt; 0,0001. Barre della scala = 1 mm (A, C). Abbreviazioni: RO = retro-orbitale; IV = endovenosa; GFP = proteina fluorescente verde; KM = midollo renale; SSC-A = area laterale del picco di dispersione; FITC-A = isotiocianato di fluoresceina-area di picco. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67463/67463fig02largev2.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>

Iniezione endovenosa ottimizzata nel pesce zebra adulto

Intravenous (IV) injection is widely recognized as the most effective and commonly utilized method for achieving systemic delivery of substances in ...

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Qui vi mostriamo come fare retro-orbitale iniezione in zebrafish adulti.

Retro-orbitale iniezione in Zebrafish adulti

Descriviamo una tecnica di microinjecting l'aminoglicoside, gentamicina, in 2 giorni dopo fetilization (DPF) larve di zebrafish per indurre danno renale acuto (AKI). Abbiamo anche descritto un metodo per intero immunoistochimica montaggio, plastica embedding e sezionamento delle larve di zebrafish per visualizzare il danno mediato AKI.

Microiniezioni endovenosa di larve Zebrafish allo Studio danno renale acuto

Dimostriamo iniezione intraperitoneale in zebrafish adulti. Usiamo una microsiringa da 10 microlitri NanoFil controllato da un controller Micro4 e UltraMicroPump III. Questa dimostrazione include l'uso di acqua fredda come anestetico.

Iniezione intraperitoneale in Zebrafish adulti

Questo video descrive la tecnica di iniezione intramuscolare per la somministrazione di composti nei muscoli dorsali di un pesce zebra adulto.

Iniezione intramuscolare (IM): Somministrazione di composto nel muscolo dorsale di un pesce zebra adulto

Questo video descrive una tecnica di iniezione intraperitoneale, un metodo per somministrare soluzioni nella cavità addominale di un pesce zebra adulto.

Iniezione intraperitoneale: un metodo di somministrazione della soluzione nella cavità addominale di un pesce zebra adulto

Questo video descrive la tecnica di somministrazione di composti nel cuore di zebrafish adulto utilizzando l'iniezione intratoracica.

Iniezione intratoracica: somministrazione di composti al cuore adulto di pesce zebra

Qui descriviamo un protocollo per l'immunizzazione del adulto zebrafish (Danio rerio) con un vaccino basato su DNA e dimostrare la convalida di un evento di successo vaccinazione. Questo metodo è adatto per lo screening preclinico di candidati vaccinali in vari modelli di infezione.

Immunizzazione di Zebrafish adulto per lo Screening preclinico di vaccini basati sul DNA

Questo metodo si basa sull'iniezione di 0,5 − 3 μL di soluzione nel torace di zebrafish adulto. La procedura trasporta efficacemente proteine e composti chimici nella vicinanza del cuore del pesce zebra senza danneggiare l'organo. L'approccio è adatto per testare gli effetti di fattori esogeni su vari tessuti del cuore.

Iniezione intrathoracica per lo studio del cuore di zebrafish adulto

Viene descritto un nuovo metodo di iniezione intraperitoneale (IP) nel pesce zebra adulto. Quando si maneggiano composti tossici come la doxorubicina, questa procedura è più efficace dei due metodi IP precedentemente riportati. La tecnica è progettata per essere facilmente adottata da ricercatori con esperienza limitata nel modello del pesce zebra.

Una tecnica di iniezione intraperitoneale nel pesce zebra adulto che riduce al minimo i danni al corpo e la mortalità associata

Questo manoscritto fornisce la procedura dettagliata dell'iniezione intra-iliaca dell'arteria (IIA), una tecnica per fornire cellule tumorali specificamente ai tessuti degli arti posteriori, comprese le ossa, per stabilire metastasi ossee sperimentali. Sebbene inizialmente stabilito con modelli di tumore al seno, questo protocollo può essere facilmente esteso ad altri tipi di cancro.

Intra-iliaca iniezione per un efficiente e selettivo Modellazione di microscopico metastasi ossee

Impara un protocollo di iniezione endovenosa ottimizzato nel pesce zebra adulto per studi ematologici. Questo metodo migliora la sopravvivenza e l'innesto cellulare rispetto alle tecniche intracardiaca e retro-orbitale.

Iniezione endovenosa ottimizzata nel pesce zebra adulto

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