Name: Rilevamento rapido della virulenza e della tipizzazione dellHelicobacter pylori utilizzando la tecnologia di marcatura a punti quantici (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-13T13:05:00.000+00:00
Duration: 5 min 13 s
Description: Scopri la tecnologia dei punti quantici per la tipizzazione rapida di Helicobacter pylori. Questo metodo di immunocromatografia in vitro migliora la precisione diagnostica e permette trattamenti personalizzati basati sulla virulenza.

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Questo studio (KY2025-191-01) è stato condotto aderendo alle linee guida del comitato etico per la ricerca umana dell'Ospedale del popolo provinciale del Guangdong (Guangdong Academy of Medical Sciences), Southern Medical University. Questo articolo è conforme alla domanda di esenzione dal consenso informato.
NOTA: Questo studio mira a utilizzare la tecnologia dei punti quantici per progettare e sviluppare un kit per diagnosticare se le specie sanguigne dei partecipanti contengono anticorpi Helicobacter pylori ureasi (ureasi), anticorpi vacuolari della citotossina A (VacA) e anticorpi della tossina del gene A correlato alla citotossina (CagA) per determinare se H. pylori è infetto e se il ceppo infetto è di tipo I o di tipo II. Questo kit progettato utilizza un metodo sandwich a doppio antigene per misurare gli anticorpi dell'ureasi Helicobacter pylori , gli anticorpi CagA e gli anticorpi VacA. Quando il campione di prova contenente la sostanza bersaglio viene aggiunto al tampone del campione, scorre attraverso il tampone quantico e la membrana attraverso l'azione del sifone, formando un complesso antigene-anticorpo in fase solida. Dopo l'individuazione, la linea di rilevamento e la massa vengono lette rispettivamente dall'analizzatore. Il valore del segnale della linea di controllo viene utilizzato per determinare lo stato negativo e positivo dell'anticorpo Urase, dell'anticorpo CagA e dell'anticorpo VacA in base ai valori del segnale T/C di ciascuno dei tre anticorpi. Il diagramma di progettazione è illustrato nella Figura 1.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67792/67792fig01.jpg"> 
Figura 1: Diagramma schematico della scheda di test di tipizzazione di H. pylori . La figura mostra la struttura e la composizione della scheda di prova. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67792/67792fig01large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
1. Preparazione del kit
<ol>
	<li>Istituzione del sistema di reazione tampone dell'acido etansolfonico (MES) QDs-2-(n-morfina)<ol>
		<li>Equilibrare la soluzione originale di QDs a temperatura ambiente (RT). Quindi, aspirare 1000 μL e aggiungere un volume uguale di 2x soluzione MES (la concentrazione finale di MES era 10 mmol/L).</li>
		<li>Mescolare, agitare e sonicare per 30-3 minuti.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Attivazione<ol>
		<li>Aggiungere 20 mg/mL di 1-etil-3- (3-dimetilamminopropil)carbodiimmide (EDC)/ N-idrossisuccinimide (NHS) nel sistema tampone QDs-MES ad un rapporto di 10:1. Mescolare, agitare e sonicare per 3 minuti.</li>
		<li>Porre la soluzione preparata in un bagnomaria a 37 °C per 15 minuti e centrifugare a 13.000 × g per 20 minuti.</li>
		<li>Rimuovere il surnatante dalla soluzione centrifugata e scioglierlo nuovamente con 1 soluzione MES. Soffiare ripetutamente la soluzione con una pipetta, agitarla per mescolarla uniformemente e farla sonicare per 3 minuti.</li>
		<li>Porre la soluzione di cui sopra in un bagnomaria a 37 °C per 15 minuti e centrifugare a 13.000 × g per 20 minuti.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Accoppiamento<ol>
		<li>Aggiungere 0,03 mg di antigene dell'ureasi, antigene CagA, antigene VacA e IgG anti-topo di capra a 1000 μl della soluzione di attivazione, pipettare ripetutamente la punta, agitare e sonicare per 3 minuti.</li>
		<li>Porre la soluzione di cui sopra in un bagnomaria a 37 °C e reagire per 3 ore.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Chiusura e stoccaggio<ol>
		<li>Aggiungere 100 μl di soluzione bloccante (Tabella supplementare 1) e incubare per 1 ora.</li>
		<li>Centrifugare la soluzione bloccata a 13.000 × g per 15 minuti.</li>
		<li>Rimuovere il surnatante dalla soluzione centrifugata, aggiungere 750 μl di soluzione di ricostituzione (Tabella supplementare 1), pipettare, agitare e sonicare ripetutamente per 5 minuti, quindi conservare a 4 °C.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Preparazione delle lastre rivestite
<ol>
	<li>Preparazione dei pad quantici<ol>
		<li>Diluire il complesso antigenico di H. pylori marcato con punti quantici 1:5 con tampone di diluizione a punti quantici per preparare la quantità richiesta in base alla produzione in lotti.</li>
		<li>Prendi il tampone quantico e spruzza uniformemente una certa quantità di complesso antigenico di H. pylori marcato con punti quantici sul tampone utilizzando uno spruzzatore di pellicola e asciugalo a 37 °C per 30 minuti.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Preparazione della membrana<ol>
		<li>Utilizzare il buffer di stampa per diluire i materiali di rivestimento della linea di controllo e della linea di prova e preparare la quantità richiesta in base al volume di produzione del lotto.</li>
		<li>Incollare la membrana in nitrocellulosa sulla lastra di cloruro di polivinile (PVC), utilizzare uno spruzzatore d'oro a graffio di pellicola per rivestire uniformemente la linea di controllo qualità e testare i materiali della linea sulla membrana e asciugare a 57 °C per 24 ore.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Assemblaggio
<ol>
	<li>Incollare in sequenza il quantum e i tamponi del campione sulla piastra in PVC rivestita con film.</li>
</ol>
4. Taglio a strisce
<ol>
	<li>Utilizzare un tagliastrisce per tagliare la tavola di grandi dimensioni assemblata in strisce reattive.</li>
</ol>
5. Imballaggio interno
<ol>
	<li>Completare l'imballaggio in base alle esigenze di composizione del kit. NOTA: I componenti del kit sono i seguenti: (i) Scheda di prova: è costituita da un guscio di striscia reattiva e una striscia reattiva. La striscia reattiva è costituita da una piastra in PVC, un tampone per campioni, un tampone quantico (un complesso antigenico marcato con punti quantici; il complesso contiene l'antigene dell'ureasi, l'antigene CagA, l'antigene VacA e le IgG di topo), una membrana di nitrocellulosa (l'area di rilevamento è fissata con l'antigene VacA, l'antigene CagA e l'antigene dell'ureasi (espressione eucariotica dell'antigene ricombinante) e l'area di controllo qualità è rivestita con IgG anti-topo di capra (poli-anticorpo di capra)), e carta assorbente. Diverse specifiche di imballaggio hanno diverse quantità di schede di prova. Per il reagente di una persona è necessaria una scheda di test. (ii) Scheda SD: 1 pezzo/scatola. I componenti della scheda di test e della scheda SD (Secure Digital) di lotti diversi di kit di test non devono essere mescolati.</li>
</ol>
6. Elaborazione del campione
NOTA: Per la raccolta dei campioni, fare riferimento alle procedure operative del National Clinical Laboratory.
<ol>
	<li>Raccogliere il sangue in una provetta di gel di separazione. Fare attenzione a evitare l'emolisi.</li>
	<li>Testare il campione di siero separato entro 4 ore a temperatura ambiente (RT). Se non può essere testato in tempo, conservare il campione a 2-8 °C per 3 giorni. Per un lungo periodo (entro 1 anno), sigillarlo e conservarlo a una temperatura inferiore a -20 °C.</li>
	<li>Ripristinare i campioni in RT e mescolarli accuratamente prima dell'uso. NOTA: I campioni congelati e scongelati devono essere completamente scongelati prima dell'uso e il numero di cicli di congelamento-scongelamento non deve superare i cinque. Ripetuti campioni congelati e scongelati possono causare il deterioramento dell'analita e devono essere evitati. Anche i campioni di chilo e di emolisi gravi influenzeranno il test e dovrebbero essere evitati.</li>
</ol>
7. Procedura per la prova
<ol>
	<li>Estrarre il kit di reagenti e i materiali per il controllo qualità per equilibrare a RT.</li>
	<li>Preparazione del campione: Centrifugare i campioni di sangue intero a 1467 g per 10 minuti.</li>
	<li>Verificare che il numero di lotto della scheda SD corrisponda a quello del kit di reagenti. Inserire la scheda SD nello strumento per la calibrazione automatica.</li>
	<li>Accendere lo strumento e il computer operativo. Avvia il software designato e seleziona il modulo Test . Scegliere Impostazioni di inizializzazione per inizializzare lo strumento e attendere il completamento con successo.</li>
	<li>Accedere all'area dei reagenti dello strumento e rimuovere lo slot della scheda di test. Aprire il kit di reagenti e selezionare il numero richiesto di schede di test.</li>
	<li>Aprire le buste di alluminio delle schede di prova e posizionarle nella fessura secondo l'orientamento indicato. Reinserire lo slot della scheda nell'area dei reagenti dello strumento.</li>
	<li>Test di controllo qualità (QC)<ol>
		<li>All'interno del modulo Test , selezionare Inserimento manuale. Fare clic su Immissione informazioni e inserire le informazioni specifiche sul materiale QC. Fare clic su Genera. Posizionare i materiali QC nell'apposito rack per campioni, assicurandosi che l'ordine e l'orientamento siano corretti.</li>
		<li>Fare clic su Avvia test per avviare il test QC. L'ago del campione dello strumento aspirerà 80 μL del campione e lo dispenserà verticalmente nel pozzetto del campione. Lo strumento inizierà automaticamente la temporizzazione dopo l'erogazione del campione. Dopo 15 minuti, lo strumento eseguirà il rilevamento, leggerà i valori di misurazione ed emetterà i risultati.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Test di esempio: all'interno del modulo Test , selezionare BIS bidirezionale. Posizionare i campioni da testare nell'apposito rack per campioni, assicurandosi che l'ordine e l'orientamento siano corretti. Fare clic su Avvia test. Allo stesso modo, lo strumento aspirerà 80 μL di campione da ciascuno di essi e li elaborerà in modo identico al processo QC.</li>
	<li>Una volta completati i test, rimuovere le schede di test usate dallo strumento e smaltirle come rifiuti sanitari.</li>
</ol>
8. Controllo di qualità
<ol>
	<li>H. pylori negativo: controllare e assicurarsi che i risultati dei prodotti di riferimento negativi Helicobacter pylori , vale a dire l'anticorpo ureasi, l'anticorpo CagA e l'anticorpo VacA, siano tutti negativi.</li>
	<li>Infezione da H. pylori di tipo II: controllare e assicurarsi che il prodotto di riferimento Helicobacter pylori di tipo II, ovvero l'anticorpo ureasi, sia positivo e che i risultati dell'anticorpo CagA e dell'anticorpo VacA siano tutti negativi.</li>
	<li>Infezione da H. pylori di tipo I: controllare e assicurarsi che il prodotto di riferimento Helicobacter pylori di tipo I, ovvero l'anticorpo ureasi sia positivo, l'anticorpo CagA e/o l'anticorpo VacA siano positivi.</li>
</ol>
9. Analisi dei risultati
<ol>
	<li>Infezione di tipo II con ceppi deboli o non tossigeni: quando la lettura degli anticorpi ureasi è positiva e le letture degli anticorpi CagA e VacA sono negative, interpretarla come un'infezione con un ceppo debole o non tossigenico di H. pylori .</li>
	<li>Infezione di tipo I con ceppi produttori di tossine altamente patogeni: quando la lettura dell'anticorpo ureasi è positiva e la lettura dell'anticorpo CagA o dell'anticorpo VacA è positiva, o entrambi sono positivi, interpretarla come un'infezione con un ceppo altamente patogeno produttore di tossine H. pylori .</li>
	<li>Negativo: quando le letture dell'anticorpo ureasi, dell'anticorpo CagA e dell'anticorpo VacA sono tutte negative, interpretarlo come nessuna infezione da ceppi di H. pylori .</li>
	<li>Non valido: quando lo strumento giudica il risultato non valido, verificare la presenza di operazioni errate o guasti al kit di reagenti e riprovare la procedura.</li>
</ol>
10. Taratura dell'analizzatore di fluorescenza
<ol>
	<li>Innanzitutto, accendere l'analizzatore e lasciarlo riscaldare per circa 15 minuti per stabilizzarne le prestazioni. Quindi, inserire lo standard di calibrazione fornito dal produttore nel portacampioni.</li>
	<li>Successivamente, accedere alla funzione di calibrazione sull'interfaccia dell'analizzatore e avviare il processo. L'analizzatore rileverà automaticamente la fluorescenza dello standard e regolerà i suoi parametri interni di conseguenza in modo che corrispondano ai valori di riferimento preimpostati.</li>
	<li>Successivamente, rimuovere lo standard di calibrazione e inserire un campione bianco per verificare che le letture rientrino nell'intervallo accettabile.</li>
	<li>La ripetizione regolare di questi passaggi secondo il programma consigliato aiuta a mantenere l'accuratezza dell'analizzatore per misure affidabili.</li>
</ol>

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<li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consistency+analysis+of+highsensitivity+cardiac+troponin+I+in+peripheral+blood+and+venous+blood+using+quantum+dot+immunofluorescence+method+and+its+clinical+application+in+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Chest+Dis%22%5BJournal%5D)">Consistency analysis of highsensitivity cardiac troponin I in peripheral blood and venous blood using quantum dot immunofluorescence method and its clinical application in acute myocardial infarction.</a> J Chest Dis. 14 (4), 1267-1274 (2022).</li>
<li>Xirong, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+quantum+dotbased+lateral+flow+immunoassay+test+strips+for+rapid+and+sensitive+detection+of+SARSCoV2+neutralizing+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Development of quantum dotbased lateral flow immunoassay test strips for rapid and sensitive detection of SARSCoV2 neutralizing antibodies.</a> Sci Rep. 13, 22253(2023).</li>
<li>Purwidyantri, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Programmable+graphenebased+microfluidic+sensor+for+DNA+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Sens+Actuators+B+Chem%22%5BJournal%5D)">Programmable graphenebased microfluidic sensor for DNA detection.</a> Sens Actuators B Chem. 367, 132044(2022).</li>
<li>Lee, K. S., Wagner, M., Stocker, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ramanbased+sorting+of+microbial+cells+to+link+functions+to+their+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Microb+Cell%22%5BJournal%5D)">Ramanbased sorting of microbial cells to link functions to their genes.</a> Microb Cell. 7 (3), 62-65 (2020).</li>
<li>Hu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+fabrication+of+carbon+dots+for+energy+conversion+and+storage%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Soc+Rev%22%5BJournal%5D)">Design and fabrication of carbon dots for energy conversion and storage.</a> Chem Soc Rev. 48 (8), 2315-2337 (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1-(3-dimetilamminopropil) -3-etilcarbodiimmide cloridrato (EDC)</td><td>Sigma</td><td>25952-53-8</td><td>5 g/bottiglia</td></tr><tr><td>2-(n-morfina) acido etansolfonico (MES)</td><td>Sigma</td><td>145224-94-8</td><td>100 g/bottiglia</td></tr><tr><td>Centrifuga</td><td>Sigma</td><td>3K15</td><td></td></tr><tr><td>Fluorescenza Immuno Analyzer</td><td>Guangzhou Labsim Biotech Co., Ltd</td><td>Provincia del Guangdong Dispositivo medico n. </td><td></td>2017221743</tr><tr><td>Kit per il test di tipizzazione dell'Helicobacter pylori&nbsp;</td><td>Chongqing iSIA BIO-Technology Co., Ltd</td><td>Registrazione nazionale del dispositivo medico n. 20203400330</td><td>QDs Metodo di immunofluorescenza</td></tr><tr><td>Sale sodico di N-idrossitiosuccinimide (NHS)</td><td>Sigma</td><td>106627-54-7</td><td>1 g/flacone</td></tr></tbody></table>

rilevamento rapido della virulenza e della tipizzazione dell'helicobacter pylori utilizzando la tecnologia di marcatura a punti quantici

Rapid Detection of Helicobacter pylori Virulence and Typing Using Quantum Dot Labeling Technology

La Figura 2 mostra il principio di funzionamento dell'immunoanalizzatore a fluorescenza a punti quantici. È costituito principalmente da una sorgente luminosa di eccitazione, una sorgente luminosa ricevente, un modulo di circuito di conversione fotoelettrica, un circuito di elaborazione del segnale, un circuito di conversione del valore AD e un modulo di calcolo dell'elaborazione del segnale; La sorgente luminosa di eccitazione genera marcatori fluorescenti. Assorbe la luce monocromatica con...

Rilevamento rapido della virulenza e della tipizzazione dell'Helicobacter pylori utilizzando la tecnologia di marcatura a punti quantici

We present a method based on quantum dot labeling technology for rapidly detecting the virulence of Helicobacter pylori and performing typing, aiming to ...

rapid-detection-helicobacter-pylori-virulence-typing-using-quantum

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Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

Il protocollo presenta un metodo non invasivo per la diagnosi rapida delle infezioni dello stomaco da Helicobacter pylori attraverso il test di stringa e determina la sua resistenza antibiotica alla claritromicina e alla levofloxacina utilizzando la reazione a catena della polimerasi quantitativa (qPCR).

Diagnosi rapida basata sulla reazione a catena della polimerasi quantitativa (qPCR) dell'infezione da Helicobacter pylori e della resistenza agli antibiotici

Un metodo rapido e accurato per il rilevamento di H. pylori e i test di resistenza ai farmaci è molto importante per eradicare efficacemente H. pylori nella pratica clinica. Questo protocollo mira a presentare una metodologia specifica che coinvolge la reazione quantitativa della polimerasi (qPCR) della mucosa gastrica per la rilevazione rapida di H. pylori e della resistenza agli antibiotici.

Analisi quantitativa della reazione a catena della polimerasi della mucosa gastrica per il rilevamento dell'Helicobacter pylori e della resistenza agli antibiotici

Il protocollo impiega un campionamento non invasivo delle feci combinato con una reazione a catena quantitativa della polimerasi per offrire un metodo diagnostico conveniente e rapido per l'infezione da Helicobacter pylori e la sua resistenza alla claritromicina e ai chinoloni.

Rilevamento dell'infezione da Helicobacter pylori e della resistenza agli antibiotici tramite l'analisi quantitativa della reazione a catena della polimerasi delle feci

In questo studio, è stata sviluppata una tecnica di rilevamento a sandwich basata su doppi anticorpi per il rilevamento rapido di antigeni fecali infettati da Helicobacter pylori.

Rilevamento rapido dell'antigene fecale dell'infezione da Helicobacter pylori basato sulla tecnologia di rilevamento a sandwich di doppi anticorpi

Questo protocollo descrive un semplice nastro adesivo a base di approccio per il campionamento di pomodoro e di altre superfici di prodotti freschi, seguita da una rapida individuazione cellule intere...

Combinazione di nastro adesivo a base di campionamento e di fluorescenza In situ</emIbridazione> per il rilevamento rapido di Salmonella Su prodotti freschi

Una rapida e accurata point-of-care test per aspergillosi polmonare è presentato. Esso si avvale di flusso laterale tecnologia utilizza uno specifico anticorpo monoclonale che si lega ad...

Rilevamento di aspergillosi polmonare in pazienti con neoplasie ematologiche maligne utilizzando la tecnologia a flusso laterale

Questo articolo illustra l'uso della marcatura radio a caccia di impulsi in combinazione con la fotoreticolazione sito-specifica per monitorare le interazioni tra una proteina di interesse e altri fattori in E. coli. A differenza dei tradizionali metodi chimici di reticolazione, questo approccio genera "istantanee" ad alta risoluzione di un percorso di assemblaggio ordinato in una cellula vivente.

Monitoraggio parte dell&#39;Assemblea di una Secreted batterica Virulence Factor Uso site-specific reticolazione

Qui descriviamo un metodo per visualizzare l'organello batterico oncogenico noto come Cag Type IV Secretion System (Cag-T4SS).  Troviamo che il Cag-T4SS è prodotto in modo differenziale sulla superficie di H. pylori in risposta a condizioni variabili di disponibilità di ferro.

Ad alta risoluzione microscopia elettronica del Helicobacter pylori Cag secrezione di tipo IV Sistema Pili Prodotto in diverse condizioni di Ferro Disponibilità

Intatte classe I complessi HLA / peptide sono capannone dalle cellule tumorali, che rappresenta un potenziale biomarcatore cancro rilevante. Utilizzando la tecnologia dei sensori senza etichetta e il recettore delle cellule T mimando anticorpi monoclonali, rilevamento di capannone MIF / HLA-A * 02: 01 complessi in sovranatanti cellulari MDA-MB-231, spillo siero umano, e plasma del paziente è dimostrata, consentendo lo sviluppo di un romanzo cancro piattaforma diagnostica.

Rilevamento dei leucociti umani Antigen Biomarkers in Breast Cancer Utilizzando libero-Label Biosensor Tecnologia

Le colture derivate da cellule staminali hanno un enorme potenziale per modellare le malattie infettive. Qui viene descritta la coltura di organoidi gastrici di topo e umani derivati da cellule staminali adulte. Gli organoidi vengono microiniettati con l'agente patogeno gastrico Helicobacter pylori.

Organoidi come modello per le malattie infettive: cultura dei diritti dell&#39;uomo e organoidi stomaco murini e microiniezione dell&#39;Helicobacter Pylori

Scopri la tecnologia dei punti quantici per la tipizzazione rapida di Helicobacter pylori. Questo metodo di immunocromatografia in vitro migliora la precisione diagnostica e permette trattamenti personalizzati basati sulla virulenza.

Rilevamento rapido della virulenza e della tipizzazione dellHelicobacter pylori utilizzando la tecnologia di marcatura a punti quantici (Video) | JoVE Journal

Rilevamento rapido della virulenza e della tipizzazione dell'Helicobacter pylori utilizzando la tecnologia di marcatura a punti quantici

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