Name: Screening CRISPR a livello di genoma per svelare geni radiosensibili e radioresistenti (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-23T13:25:00.000+00:00
Duration: 8 min 32 s
Description: Scopri il metodo di screening CRISPR a livello di genoma per identificare geni radiosensibili e radioresistenti nelle cellule tumorali del polmone. Questo protocollo migliora la comprensione dei meccanismi di resistenza alla radioterapia.

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<li>Jing, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+CRISPR+activation+screening+in+senescent+cells+reveals+SOX5+as+a+driver+and+therapeutic+target+of+rejuvenation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Genome-wide CRISPR activation screening in senescent cells reveals SOX5 as a driver and therapeutic target of rejuvenation.</a> Cell Stem Cell. 30 (11), 1452-1471 (2023).</li>
<li>Shifrut, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+CRISPR+screens+in+primary+human+t+cells+reveal+key+regulators+of+immune+function%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Genome-wide CRISPR screens in primary human t cells reveal key regulators of immune function.</a> Cell. 175 (7), 1958-1971 (2018).</li>
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<li>Huang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FACS-based+genome-wide+CRISPR+screens+define+key+regulators+of+DNA+damage+signaling+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">FACS-based genome-wide CRISPR screens define key regulators of DNA damage signaling pathways.</a> Mol Cell. 83 (15), 2810-2828 (2023).</li>
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<li>Sharma, G., Sharma, A. R., Bhattacharya, M., Lee, S. S., Chakraborty, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR-Cas9%3A+A+preclinical+and+clinical+perspective+for+the+treatment+of+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">CRISPR-Cas9: A preclinical and clinical perspective for the treatment of human diseases.</a> Mol Ther. 29 (2), 571-586 (2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>piastra per coltura cellulare e tissutale da 150 mm</td><td>Wuxi NEST Biotechnology Co., Ltd.</td><td>715011</td><td>Piastra per coltura cellulare</td></tr><tr><td>e tissutale da 35 mm</td><td>Wuxi NEST Biotechnology Co., Ltd.</td><td>706011</td><td>Coltura cellulare</td></tr><tr><td>Linea cellulare A549</td><td>ATCC-</td><td></td><td>-</td></tr><tr><td>Kit per il conteggio delle cellule-8</td><td>Shanghai Beyotime Biotech Inc</td><td>C0041</td><td>Per il test di vitalità cellulare</td></tr><tr><td>Terreno CO2-indipendente</td><td>PHCbi</td><td>MCO-50AIC</td><td>Contatore di</td></tr><tr><td>cellule automatizzato Countess 3 FL</td><td>Themo Scientific</td><td>AMQAF2001</td><td>Per il conteggio</td></tr> <tr>delle cellule<td>EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200056</td><td>Colture cellulari</td></tr><tr><td>Siero fetale bovino</td><td>Gibco</td><td>10099141</td><td>Colture cellulari Microscopia a</td></tr><tr><td>fluorescenza</td><td>LEICA</td><td>ebq 100-04</td><td>Per microscopio a fluorescenza</td></tr><tr><td>Libreria lentivirale CRISPR a livello di genoma</td><td>Shanghai OBiO Technology Co., Ltd.</td><td>H5070</td><td>Per l'infezione lentivirale</td></tr><tr><td>MiniAmp plus PCR</td><td>Themo Scientific</td><td>C37835</td><td>Per l'amplificazione PCR</td></tr><tr><td>Piastre per colture cellulari NEST, 12 pozzetti</td><td>Wuxi NEST Biotechnology Co., Ltd.</td><td>712002</td><td>Piastre</td></tr> per <tr><td>colture cellulari NEST per colture cellulari, 6 pozzetti</td><td>Wuxi NEST Biotechnology Co., Ltd.</td><td>703002</td><td>Piastre</td></tr> per <tr><td>colture cellulari NEST per colture cellulari, 96 pozzetti</td><td>Wuxi NEST Biotechnology Co., Ltd.</td><td>701001</td><td>Primer</td></tr> diretto per <tr><td>PCR per colture cellulari PBS</td><td>Gibco</td><td>C10010500BT</td> per <td>colture cellulari</td></tr><tr><td>(AATGGACTATCATATGCTTACCGTAACTTGAAAGTATTTCG)</td><td>Beijing AuGCT Biotech Co., Ltd.</td><td>-</td><td>Per l'amplificazione PCR primer</td></tr><tr><td>inverso PCR (GATGTGCGCTGCCCACTGACGGGCA)</td><td>Beijing AuGCT Biotech Co., Ltd.</td><td>-</td><td>Per l'amplificazione PCR</td></tr><tr><td>Polybrene</td><td>Shanghai Beyotime Biotech Inc</td><td>C0351</td><td>Per l'infezione lentivirale</td></tr><tr><td>Puromicina</td><td>MCE</td><td>HY-K1057</td><td>Per la selezione post infezione lentivirale</td></tr><tr><td>RPMI 1640 terreno di coltura cellulare</td><td>Gibco</td><td>23400-021</td><td>Kit</td></tr><tr><td>di DNA genomico per colture cellulari TIANGENamp</td><td>Beijing TIANGEN Biotech Co., Ltd.</td><td>DP304</td><td>Per estrazione di DNA genomico</td></tr><tr><td>Diffrattometro a raggi X per polvere</td><td>PerkinElmer</td><td></td><td>Per radioterapia</td></tr></tbody></table>

screening crispr a livello di genoma per svelare geni radiosensibili e radioresistenti

Genome-Wide CRISPR Screen for Unveiling Radiosensitive and Radioresistant Genes

Il cancro del polmone, con il principale tasso di mortalità, rappresenta una malattia medica altamente aggressiva e prevalente. Utilizzando la linea cellulare di cancro del polmone A549 come esempio per condurre uno screening CRISPR a livello di genoma con radiazioni come condizione di screening, il flusso di lavoro schematico è mostrato nella Figura 1. In primo luogo, esplorare la sensibilità delle cellule A549 a diverse dosi di radiazioni attraverso la formazione di cloni e gli esperimenti...

Screening CRISPR a livello di genoma per svelare geni radiosensibili e radioresistenti

The CRISPR-Cas9 system has been harnessed and repurposed into a powerful genome editing tool. By leveraging this technology, researchers can precisely ...

genome-wide-crispr-screen-for-unveiling-radiosensitive-radioresistant

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Questo video descrive un metodo di screening per identificare le mosche transgeniche Drosophila, il cui genoma è stato modificato utilizzando CRISPR-Cas9. CRISPR-Cas9 è un potente strumento di editing del genoma che ha rivoluzionato il modo in cui gli scienziati possono manipolare il genoma di un organismo. Nel protocollo di esempio, vedremo come identificare mutanti generati da CRISPR, in cui l'inserimento di una sequenza di transattivazione sostituisce il primo esone del gene branchless...

Screening per le modifiche genomiche: un metodo per identificare i mutanti generati da CRISPR in Drosophila

La tecnica qui descritta genotipizzazione, che accoppia fluorescente reazione a catena della polimerasi (PCR) per elettroforesi su gel capillare, permette high-throughput genotipizzazione di cloni knockout nucleasi-mediata. Elude limitazioni incontrate da altre tecniche di genotipizzazione ed è più conveniente rispetto ai metodi di sequenziamento.

Usando una tecnica fluorescente PCR-capillare elettroforesi su gel al genotipo CRISPR / Cas9 mediata Knockout Mutants in un formato high-throughput

I recenti progressi nella capacità di manipolare geneticamente le linee cellulari somatiche hanno un grande potenziale per la ricerca di base e applicata. Qui presentiamo due approcci per la produzione e lo screening generati da CRISPR / Cas9 nelle linee cellulari mammiferi, con e senza l'uso di marcatori selectable.

Selezione-dipendente e generazione indipendente di CRISPR / Cas9-mediata Gene Knockouts nelle cellule di mammiferi

Una libreria CRISPR/sgRNA è stata applicata a interrogare i geni di proteina-codificazione. Tuttavia, la fattibilità di una libreria di sgRNA per scoprire la funzione di un confine CTCF nella regolazione genica rimane inesplorata. Qui, descriviamo una raccolta di specifiche sgRNA loci HOX per delucidare la funzione dei confini CTCF in loci HOX .

HOX Loci Focused CRISPR/sgRNA biblioteca Screening identificazione critico CTCF confini

La tecnologia CRISPR-Cas9 fornisce un metodo efficiente per modificare con precisione il genoma dei mammiferi in qualsiasi tipo di cellula e rappresenta un nuovo mezzo per eseguire schermi genetici a livello di genoma. Qui viene fornito un protocollo dettagliato che illustra i passaggi necessari per il successo delle prestazioni degli schermi CRISPR-Cas9 a livello di genoma raggruppato.

Schermi genetici basati su CRISPR in cellule mammaliane

Questo manoscritto descrive un approccio di screening basato sulle cellule su scala genomica per identificare le interazioni recettore-ligando extracellulari.

Identificazione del recettore della superficie cellulare utilizzando schermi genetici CRISPR/Cas9 su scala genomica

Qui descriviamo una metodologia di screening CRISPR/Cas9 in vivo rapida e diretta utilizzando iniezioni lentivirali embrionali guidate da ultrasuoni in utero per valutare contemporaneamente le funzioni di diversi geni nella pelle e nella cavità orale dei topi immunocompetenti.

Screening CRISPR/Cas9 in vivo per valutare contemporaneamente la funzione genica nella pelle del topo e nella cavità orale

Un ostacolo significativo a tecnologie come CRISPR sono gli eventi fuori bersaglio che possono interrompere i geni vitali. CIRCLE-seq ("Circularization for In Vitro Reporting of Cleavage Effects by Sequencing") è una tecnica progettata per identificare i siti di scissione non intenzionali. Questo metodo mappa l'attività dell'intero genoma di CRISPR-Cas9 con alta sensibilità e senza bias.

CIRCLE-Seq per l'interrogazione dell'editing genetico off-target

L'articolo descrive un protocollo per l'applicazione di un modello in vitro per l'esaurimento per completare uno screening CRISPR knockout per l'intero genoma in cellule T del recettore dell'antigene chimerico del donatore sano.

Esecuzione di uno screening CRISPR knockout in vitro a livello di genoma in cellule T del recettore dell'antigene chimerico

Qui, presentiamo un protocollo che integra la tecnologia CRISPR/Cas9 con il saggio Cell Counting Kit-8 (CCK-8) per identificare i geni candidati che sono cruciali per l'anomala capacità proliferativa delle cellule staminali ematopoietiche e delle cellule progenitrici.

Valutazione dei geni correlati alla crescita anormale di cellule staminali e progenitrici ematopoietiche combinando la tecnologia CRISPR/Cas9 con il conteggio delle cellule

Scopri il metodo di screening CRISPR a livello di genoma per identificare geni radiosensibili e radioresistenti nelle cellule tumorali del polmone. Questo protocollo migliora la comprensione dei meccanismi di resistenza alla radioterapia.

Screening CRISPR a livello di genoma per svelare geni radiosensibili e radioresistenti

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