Name: Un Chirurgia Procedura Craniotomia per limaging cerebrale cronica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-02-15T11:06:00.000+00:00
Duration: 9 min 25 s
Description: Impara l'impianto di una finestra cranica in vetro su roditori per l'imaging cronico in vivo della neocorteccia mediante microscopia a due fotoni. Questa tecnica consente di studiare la funzione cerebrale nel tempo.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li> Anestetizzare topi con isoflurano (4% per l&#39;induzione, 1,5-2% per la chirurgia) utilizzando IACUC procedure approvate. E &#39;importante che la coda e / o pizzichi punta sono utilizzati al fine di assicurare l&#39;animale è completamente sedato. </li><li> Utilizzando un trimmer roditore, radere i capelli dalla parte posteriore del collo fino agli occhi. </li><li> Posizionare il mouse in una cornice stereotassica, nel corso di un intervento chirurgico d&#39;acqua a ricircolo di coperta. Fissare saldamente la testa con le barre orecchio. </li><li> Applicare una pomata oculare, al fine di prevenire gli occhi dell&#39;animale si secchi. </li><li> Somministrare, per via sottocutanea, Desametasone (0,2 mg / Kg) e carprofen (5 mg / Kg) per prevenire il gonfiore del cervello e / o una risposta infiammatoria, rispettivamente. </li><li> Prima di iniziare l&#39;intervento, sterilizzare l&#39;area operativa strofinando la pelle con tre colpi alternati di alcool al 70% e Betadine. </li><li> Tutti gli strumenti chirurgici sono stati pre-sterilizzati con uno sterilizzatore perle di vetro. Utilizzando le forbici che sono stati sterilizzati con etanolo, togliere la pelle sopra la parte superiore del cranio, a partire da un taglio orizzontale lungo tutta la base della testa, seguito da due tagli nella direzione rostrale, raggiungendo quasi le palpebre, poi due tagli obliqui che convergono sulla linea mediana. </li><li> Una goccia di adrenalina lidocaina + soluzione è applicata a questo punto sul periostio per evitare un eccessivo sanguinamento o dolore. Con un bisturi, ritrarre il periostio ai bordi del cranio. Inoltre, leggermente ritirare la muscolatura della parte posteriore del collo. </li><li> Raschiare delicatamente tutta l&#39;area esposta del cranio con il bisturi per creare una superficie asciutta. Questo è molto importante, in quanto consentirà la colla per aderire meglio se applicato in seguito. </li><li> Una volta che un sito di imaging è stato scelto, si è pronti per creare la finestra del cranio. In primo luogo, gentilmente &quot;disegnare&quot; un cerchio di circa 4 mm di diametro con il martello pneumatico dentale. </li><li> Dopo una foratura leggero, applicare lidocaina + adrenalina soluzione ancora una volta sulla superficie del cranio. Interrompere la perforazione quando uno strato molto sottile di osso è rimasto. Premendo delicatamente sul centro della craniotomia per sentire come si dà modo, si può sapere che di solito questa fase viene raggiunto. </li><li> Sotto una goccia di soluzione salina e prendendo vantaggio delle trabecole ossee - la struttura spugnosa delle ossa - ascensore via la craniotomia dal cranio con una pinza punta molto sottile. La salina è importante, in quanto contribuirà a sollevare il cranio e prevenire il sanguinamento della dura. </li><li> Applicare Gelfoam che è stato precedentemente lavate con soluzione alla dura madre per fermare qualsiasi emorragia di piccole dimensioni che si verifica di tanto in tanto quando il cranio è stato rimosso. </li><li> Dopo l&#39;essiccazione la superficie dura madre e la garanzia che non c&#39;è sanguinamento, appoggiare delicatamente una sterile di vetro da 5 millimetri di copertura antiscivolo sulla parte superiore della dura madre. (Nota: altri gruppi anche mettere una goccia di agarosio a basso punto di fusione (1,2%) oltre la dura e mettere il coprioggetto in cima alla agar). </li><li> Applicare una goccia di cianoacrilato colla a base all&#39;emisfero opposto sul cranio. Con l&#39;aiuto di un ago, esercitare il collante di tutto il finestra mentre facendo attenzione a non metterla sotto il vetro. Colla può essere applicata in uno strato sottile su tutta la superficie del cranio. </li><li> Una volta che la colla si è asciugata, mescolare acrilico dentale e applicarla su tutta la superficie del cranio, che contempli anche un orlo piccolo della ricevuta di copertura, per fissarlo. </li><li> Dopo essersi assicurato la polizza di copertura, fare un piccolo pozzo intorno alla finestra con acrilico dentale. Inoltre, integrare una barra di titanio in acrilico dentale. Questa barra sarà in seguito utilizzato per collegare il mouse in modo sicuro sul palco del microscopio per l&#39;imaging. E &#39;importante assicurarsi che il bar è di livello, in modo che sia parallelo con la finestra del cranio. Mettendo un pezzo di carta sotto la barra può permettere la barra di restare livello mentre l&#39;acrilico si indurisce. </li><li> L&#39;acrilico dentale è permesso di curare (indurimento) per 10 minuti, quando ormai la barra di titanio è fissata al suo posto. Posto l&#39;animale in una gabbia di caldo fino a che non recupera. </li><li> Dopo il recupero dall&#39;anestesia, l&#39;animale può essere ripreso nello stesso giorno. </li></ol>

<ol><li>Svoboda, K., Denk, W., Kleinfeld, D., Tank, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((+In+vivo+dendritic+calcium+dynamics+in+neocortical+pyramidal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)"> In vivo dendritic calcium dynamics in neocortical pyramidal neurons.</a> Nature. 85, 161-165 (1997).</li>
<li>Lendvai, B., Stern, E. A., Chen, B., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experience-dependent+plasticity+of+dendritic+spines+in+the+developing+rat+barrel+cortex+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Experience-dependent plasticity of dendritic spines in the developing rat barrel cortex in vivo.</a> Nature. 404, 876-881 (2000).</li>
<li>Trachtenberg, J. T., Chen, B., Knott, G. W., Feng, G., Sanes, J. R., Welker, E., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+in+vivo+imaging+of+experience-dependent+synaptic+plasticity+in+adult+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Long-term in vivo imaging of experience-dependent synaptic plasticity in adult cortex.</a> Nature. 420, 788-794 (2002).</li>
<li>Portera-Cailliau, C., Weimer, R. M., DePaola, V., Caroni, P., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diverse+modes+of+axon+elaboration+in+the+developing+neocortex%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Diverse modes of axon elaboration in the developing neocortex.</a> PLoS Biol. 3, (2005).</li>
<li>Holtmaat, A., Wilbrecht, L., Knott, G. W., Welker, E., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experience-dependent+and+cell-type-specific+spine+growth+in+the+neocortex%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Experience-dependent and cell-type-specific spine growth in the neocortex.</a> Nature. 441, 979-983 (2006).</li>
</ol>

Come abbiamo mostrato nel video e nelle figure supplementari, la preparazione window cranica, combinato con l&#39;uso della microscopia a due fotoni, è uno strumento molto potente per studiare in vivo la struttura e la funzione della neocorteccia. La tecnica richiede un addestramento rigoroso per acquisire familiarità con l&#39;anatomia e le relative procedure chirurgiche e sottile abilità che richiede questa preparazione. Solo interventi chirurgici incontaminate possono essere utilizzati per l&#39;imaging cronica. Se la durata è manipolato...

un chirurgia procedura craniotomia per l&#39;imaging cerebrale cronica

A Craniotomy Surgery Procedure for Chronic Brain Imaging

Tecniche di imaging stanno diventando sempre più importante nella funzione del cervello di studio. Tra questi, la microscopia a due fotoni scansione laser è emerso come un metodo estremamente utile, perché permette lo studio del cervello vive intatto. Con i preparativi del caso, questa tecnica permette l&#39;osservazione della stessa area corticale cronica, da minuti a mesi. In questo video ci mostra una preparazione cronica imaging in vivo del cervello usando la microscopia a due fotoni. Questa tecnica è stata inizialmente introdotta da Dott. Karel Svoboda, che ora è un Howard Hughes Medical Institute presso Janelia Farm. Preparati come quella mostrata qui può essere utilizzata per l&#39;imaging della struttura neocorticale (ad esempio, dinamiche dendritica e assonale), per registrare l&#39;attività neuronale con calcio-sensibili coloranti, alle dinamiche del flusso sanguigno corticale immagine, o per intrinseca studi di imaging ottico. L&#39;imaging profondo della neocorteccia è possibile con interventi chirurgici ottimale finestra cranica. Che operano nelle condizioni più sterile possibile per evitare infezioni, insieme con estrema cura per non danneggiare la dura madre durante l&#39;intervento, si tradurrà in successo e di lunga durata con tetto in vetro finestre craniche.

Questo video e protocollo dimostrano come impiantare una copertura in vetro finestra cranica nei roditori. Queste preparazioni possono essere utilizzate per cronica in vivo a due fotoni di imaging della neocorteccia su scale temporali di mesi. Può essere utilizzato anche per altri tipi di imaging, tra cui l&#39;imaging ottico del segnale intrinseco.

Un Chirurgia Procedura Craniotomia per l&#39;imaging cerebrale cronica

Le tecniche di imaging stanno diventando sempre più importanti nello studio della funzione cerebrale. Tra queste, la microscopia a scansione laser a due fotoni è emersa come un...

Le tecniche di imaging stanno diventando sempre più importanti nello studio della funzione cerebrale. Tra queste, la microscopia laser a due fotoni si è affermata come un metodo estremamente utile perché consente lo studio del cervello di formica vivo e, con preparazioni adeguate, permette l'osservazione cronica della stessa area corticale per periodi che vanno da minuti a mesi.In questo video, mostriamo una preparazione per l'immagine cronica in vivo del cervello mediante due microscopie foto. Il dottor Carl Voda, un ricercatore dell'Howard Hughes Medical Institute presso Janelia Farm, ha inizialmente sviluppato la preparazione della finestra cranica che dimostreremo oggi. Ciao e Ricardo Must, dal laboratorio di Carlos Porter Cayo del Dipartimento di Neurologia dell'Università della California di Los Angeles.Oggi vi mostreremo la procedura per creare una finestra cranica per l'immagine cronica in vivo. Questa preparazione è molto utile perché consente di ottenere immagini in profondità all'interno del cervello utilizzando un microscopio laser a due fotoni. Cominciamo dunque.Prima di iniziare l'intervento chirurgico, i topi vengono anestetizzati con isoflurano: 4% per l'induzione,

a-craniotomy-surgery-procedure-for-chronic-brain-imaging

Research

Ricerca

JoVE Journal

Biology

Biologia

In questo materiale video e supplementare, mostriamo un protocollo per la...

Imaging cronica di mouse corteccia visiva Utilizzando un Assottigliato-teschio di preparazione

Un metodo è descritto per l'etichettatura di neuroni con coloranti fluorescenti in predeterminate funzionali micro-domini della neocorteccia. Primo, imaging segnale intrinseco ottico viene utilizzato per ottenere una mappa funzionale. Poi microscopia a due fotoni è usato per l'etichetta e neuroni di immagine all'interno di un micro-dominio della mappa.

Etichettatura mirata di neuroni in una specifica funzionale Micro-dominio della neocorteccia combinando segnale intrinseca e due fotoni Imaging

Questo protocollo presenta un metodo per creare una grande craniotomia unilaterale sulle regioni temporali e parietali della corteccia cerebrale del mouse. Ciò è particolarmente utile per l'imaging in tempo reale su un'area espansiva di un emisfero corticale.

Una procedura Grande laterale Craniotomia per Mesoscale Wide-field Optical Imaging di Brain Activity

Descriviamo i passi per usare il nostro software progettato su misura per l'integrazione di immagini, la visualizzazione e la pianificazione in chirurgia dell'epilessia.

Una pipeline per il 3D multimodalità integrazione di immagini e progettazione assistita da computer in chirurgia dell&#39;epilessia

Qui descriviamo un metodo per l'imaging multi-fotofilano ad alta risoluzione delle cellule tumorali cerebrali prima e dopo l'intervento chirurgico invasivo (ad esempio, biopsia) all'interno dello stesso animale vivente. Questo metodo consente di studiare l'impatto di queste procedure chirurgiche invasive sul comportamento migratorio, invasivo e proliferativo delle cellule tumorali a livello di singola cellula.

Imaging intravitale longitudinale del comportamento delle cellule tumorali cerebrali in risposta a una biopsia chirurgica invasiva

Questo protocollo descrive una tecnica cronica di impianto della finestra cranica che può essere utilizzata per l'imaging longitudinale di strutture neuro-glio-vascolari, interazioni e funzione sia in condizioni sane che malate. Serve come alternativa complementare all'approccio di imaging transcranico che, sebbene spesso preferito, possiede alcune limitazioni critiche.

Mappatura precisa del cervello per eseguire immagini ripetitive in vivo della dinamica neuroimmune nei topi

Presentiamo un protocollo per integrare la trattografia MRI a diffusione nel work-up del paziente alla chirurgia endoscopica endonasale per un tumore alla base cranica. Vengono descritte le modalità di adozione di questi studi di neuroimaging nelle fasi pre- e intra-operatorie.

Ruolo della trattografia MRI a diffusione nella chirurgia endoscopica della base cranica endonasale

Questo articolo dimostra la preparazione di una finestra di imaging su misura integrata con cannula per infusione e il suo impianto sulla regione CA1 dell'ippocampo nei topi.

Procedura craniotomia per la visualizzazione delle attività neuronali nell'ippocampo dei topi che si comportano

Qui viene presentato un protocollo per l'impianto di una finestra cranica cronica per l'imaging longitudinale delle cellule cerebrali in topi svegli e trattenuti dalla testa.

Impianto di una finestra cranica per l'imaging ripetuto in vivo in topi svegli

Se integrata con una piastra di testa e un design ottico compatibile con microscopi a singolo e due fotoni, la lente del microprisma presenta un vantaggio significativo nella misurazione delle risposte neurali in una colonna verticale in diverse condizioni, inclusi esperimenti ben controllati in stati di fissazione della testa o compiti comportamentali naturali in animali che si muovono liberamente.

Imaging a lungo termine di popolazioni neurali identificate utilizzando microprismi in animali che si muovono liberamente e fissano la testa

Questo protocollo descrive l'esecuzione di una craniectomia utilizzando un trapano pneumatico ad alta velocità su un maiale Landrace danese di 3 mesi. L'accesso avviene attraverso l'osso frontale e rivela la dura madre ventrale e gli emisferi cerebrali sottostanti. Questa procedura consente l'accesso a gran parte del cervello del maiale.

Accesso al cervello suino tramite craniectomia pneumatica ad alta velocità

Impara l'impianto di una finestra cranica in vetro su roditori per l'imaging cronico in vivo della neocorteccia mediante microscopia a due fotoni. Questa tecnica consente di studiare la funzione cerebrale nel tempo.

Un Chirurgia Procedura Craniotomia per l'imaging cerebrale cronica

Esplora altri video