Name: In vitro Esposizioni alla cannabis delle cellule epiteliali polmonari allinterfaccia aria-liquido (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-20T13:05:00.000+00:00
Duration: 7 min 5 s
Description: Scopri un modello standardizzato per esporre cellule epiteliali polmonari al vapore di cannabis all'interfaccia aria-liquido. Questo protocollo utilizza microbilance a cristallo di quarzo per dosimetria in tempo reale, migliorando la riproducibilità nella ricerca tossicologica.

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<ol><li>Graves, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+characterization+of+mainstream+marijuana+and+tobacco+smoke%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Comprehensive characterization of mainstream marijuana and tobacco smoke.</a> Sci Rep. 10 (1), 7160(2020).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>Provetta da centrifuga da 15 mL, rack (rack in polistirene), sterile</td><td>Montreal Biotech Inc.</td><td></td><td></td>MBI601051C</tr><tr><td>fiale di vetro da 30 ml</td><td>Thomas Scientific</td><td>1755F32</td><td></td></tr><tr><td>A549 cellule</td><td>ATCC</td><td>CCL-185</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotico-antimicotico (100x)</td><td>Wisent</td><td>450-115-EL</td><td></td></tr><tr><td>Grinder per erbe di cannabis&nbsp;</td><td>Genchi</td><td>https://www.amazon.ca/Genchi-Grinder-Crystal-Threads-Premium/dp/B094WX443Y/ref=sr_1_10?crid=A1EV93N8PW1V&dib=eyJ2Ijo iMSJ9.WX_vMBLeAHzc6JplZiba8i w7k_cGpHrEm0VunfiDZqO0U1mT NA0Tr8j5nGMqrGq1BW75hAV8Fr3 SDCGH7O7zwsmmCWOxvdAEN4 97Npj07w0FHMuNDtuKZ3hKv9d8 vauHRtueWaDqYEPOCIAy956bGf PwXu2Gp9nCWVhFCo1gHqgeh1N nrWwD3lJ_r_wx2GoauoNdVw9eH A2QYc1tx3XKMidd2YkVRF_ABYL ZJd0EIDxi22hBnzaM4KklLO6Ep0v OGb1QifhM062KUvTTY9PAOUn8F -O1V0qNYQiRk6SQo2WId2wOHS Mz_zo4YCbkDQf2rNGy81iXhuBzV qu9LhvOcI1xnPUd-JPLx_4rZdSC92 Q_QZODiSxBhH-ellca78LW2iV4XXU vIr-fVWIKdhrS49MD7KV1lCjdBcT_ K3l4bT0mBgZB1_Qpgf_5tmrj-kf.-ctY GDLXKn-ovr6On-5g1G0_oK5mrHdj CN3LXumyu8Q& dib_tag=se& parole chiave=erba%2Bgrinder& qid=1736346511& sprefix=erba%2Bgrinder%2Caps% 2C168& sr=8-10& th=1</td><td></td></tr><tr><td>Collagene da placenta umana, tipo IV</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C7521</td><td></td></tr><tr><td>Costar 12 mm transwell, 0,4 &micro; Inserti</td><td>Stemcell Technologies</td><td>38023</td><td></td></tr><tr><td>Kit di rilevamento della citotossicità (LDH)</td><td>Roche</td><td>11644793001</td><td></td></tr><tr><td>Davinci MIQRO-C vaporizzatore per erbe secche</td><td>DAVINCI</td><td>https://davincivaporizer.com/products/davinci-miqro-c</td><td></td></tr><tr><td>Dimetil solfossido</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>34869</td><td></td></tr><tr><td>DMEM medium</td><td>Wisent</td><td>319-005-CL</td><td></td></tr><tr><td>Fiore di cannabis essiccato</td><td>Soci&eacute; t&eacute; qu&eacute; b&eacute; coise du cannabis</td><td>https://www.sqdc.ca/en-CA/dried-cannabis?&fn1=CannabinoidBalanceLookup Valore&fv1=THC</td><td>Contenuto di cannabinoidi: 17&ndash; 23% di THC < 0,1% di CBD&nbsp;</td></tr><tr><td>Siero fetale bovino</td><td>Wisent</td><td>080-150</td><td>FBS</td></tr><tr><td>flexiWare</td><td>SCIREQ</td><td>https://www.scireq.com/downloads/</td> <td>Versione 8.4.1</td></tr><tr><td>Gentamicina</td><td>Wisent</td><td>450-134-XL</td><td></td></tr><tr><td>Acido acetico glaciale</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>100063&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>pacchetto di esposizione in vitro Expose expoCube&nbsp; &nbsp;</td><td>SCIREQ</td><td>IX-XCP&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Infinite 200 PRO</td><td>TECAN</td><td>30125944</td><td></td></tr><tr><td>Metanolo di grado LC/MS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>106035</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>T175 EasYFlask, TC Surface, Tappo filtro</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>159910</td><td></td></tr><tr><td>T75 EasYFlask, TC Surface, Tappo filtro</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td></td><td></td>156499</tr><tr><td>Tiazolo blu tetrazolio bromuro</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M 2128</td><td>MTT</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>108603</td><td></td></tr><tr><td>Bagno pulitore ad ultrasuoni</td><td>VWR</td><td>18303</td><td>Bagno sonicatore</td></tr><tr><td>Organizzatore settimanale di pillole</td><td>HealthSmart</td><td>640-8223-0000</td><td></td></tr></tbody></table>

in vitro esposizioni alla cannabis delle cellule epiteliali polmonari all'interfaccia aria-liquido

In vitro Cannabis Exposures of Lung Epithelial Cells at the Air-Liquid Interface

Durante gli esperimenti con il sistema expoCube, quattro pozzetti ricevono l'esposizione ai vapori di cannabis, quattro pozzetti sono esposti all'aria condizionata come controlli del veicolo e i restanti quattro pozzetti sono completamente chiusi come controlli negativi (Figura 1C)17. Questa configurazione consente un confronto preciso tra condizioni trattate, del veicolo e negative. Il sistema è umidificato per creare un ambiente adatto alle colture cellulari (Figura 2) e la regolazione della temperatura all'interno del sistema migliora la deposizione di particelle attraverso la termoforesi, consentendo una consegna efficiente dei composti vaporizzati alle cellule18. Per quantificare l'esposizione, misuriamo la quantità di Δ9-THC come marcatore della deposizione da vapore di cannabis nel sito di esposizione cellulare. Questa quantificazione è fondamentale per ottimizzare i tempi di esposizione e le dosi, consentendo ai ricercatori di regolare i periodi di esposizione attiva per raggiungere le dosi desiderate negli esperimenti di coltura cellulare (Figura 3). Calcolando il rapporto tra il Δ9-THC raccolto nel filtro di flusso di esposizione e la quantità depositata nei singoli pozzetti, possiamo stimare la dose effettiva erogata alle cellule (Tabella 1). Questa dose calcolata informa l'intervallo di esposizione desiderato, aiutando a determinare i parametri ottimali per studiare le risposte cellulari al vapore di cannabis in modo coerente e misurabile. Questo può essere eseguito per altri cannabinoidi, a seconda del profilo cannabinoide della varietà di cannabis selezionata. Inoltre, l'analisi QCM può essere eseguita per misurare la deposizione di vapori di cannabis in tempo reale. La Figura 4 mostra la deposizione da vapore di cannabis in un corso di 30 minuti in cui il vaporizzatore e il materiale di cannabis sono stati cambiati ogni 5 minuti. Ogni pozzetto ha mostrato un aumento costante della massa nel tempo, indicando un'efficace e continua deposizione di intere particelle di vapore di cannabis.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68102/68102fig01.jpg"> 
Figura 1: Schema del sistema di esposizione ALI/Transwell in vitro/ex vivo per l'esposizione ai vapori di cannabis presso l'ALI. (A) Il vaporizzatore DaVinci MIQRO è stato utilizzato per generare vapore di cannabis. Questo campione viene umidificato e trasportato attraverso il campionatore isocinetico e nel sito di esposizione. L'unità di controllo consente di regolare le uscite del flusso d'aria e i gradienti di temperatura. (B) Fotografie della configurazione del sistema di esposizione. (C) L'interno dell'expoCube è suddiviso in tre file: una fila di prova per l'esposizione ai vapori di cannabis, una fila di controllo del veicolo di aria condizionata e la fila di controllo negativa chiusa che rimane intatta da qualsiasi flusso d'aria. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68102/68102fig01large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68102/68102fig02.jpg"> 
Figura 2: Profilo di umidità relativa (%) registrato nel tempo. Questi dati mostrano i livelli di umidità relativa quando gli Aeronebs vengono attivati, raggiungendo e mantenendo un'umidità media del 75%. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68102/68102fig02large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68102/68102fig03.jpg"> 
Figura 3: Quantificazione della deposizione di Δ 9-THC tramite analisi LC/MS dopo esposizioni di 30 minuti al vapore di cannabis. (A-C) La deposizione di Δ9-THC è stata misurata in ciascun pozzetto dopo tre esposizioni indipendenti al vapore di 30 minuti, ciascuna utilizzando 1,5 g di una cultivar di cannabis ad alto contenuto di THC. I livelli di Δ9-THC sono stati quantificati mediante LC/MS. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68102/68102fig03large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa cifra.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68102/68102fig04.jpg"> 
Figura 4: Misurazioni QCM della deposizione di vapore di cannabis nel sistema di esposizione ALI/Transwell in vitro/ex vivo in un regime di esposizione di 30 minuti. (A-D)Ogni grafico rappresenta la deposizione cumulativa di particelle di vapore di cannabis nei pozzetti 1-4, con massa misurata in microgrammi (μg) nel tempo. Il tasso di deposizione dimostra un accumulo costante in tutti i pozzi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68102/68102fig04large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Deposizione del filtro del flusso primario (μg)</td>
			<td>Deposizioni di pozzetti (μg)</td>
			<td>Percentuale del flusso primario depositato nel pozzo (%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="4">Esposizione 1</td>
			<td rowspan="4">2142.3</td>
			<td>4.7</td>
			<td>0.22</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4.4</td>
			<td>0.2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4.6</td>
			<td>0.22</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4.4</td>
			<td>0.21</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="4">Esposizione 2</td>
			<td rowspan="4">2726.5</td>
			<td>4.1</td>
			<td>0.15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3.9</td>
			<td>0.14</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4.4</td>
			<td>0.16</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4.6</td>
			<td>0.17</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="4">Esposizione 3</td>
			<td rowspan="4">2400</td>
			<td>3.6</td>
			<td>0.15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3.8</td>
			<td>0.16</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5</td>
			<td>0.21</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4</td>
			<td>0.17</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nella media</td>
			<td>2422.9</td>
			<td>4.3</td>
			<td>0.18</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deviazione standard</td>
			<td>292.8</td>
			<td>0.4</td>
			<td>0.03</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabella 1. Confronto della deposizione di Δ9-THC nel sistema di esposizione ALI/Transwell in vitro/ex vivo tra il filtro di flusso di esposizione e il sito di esposizione cellulare.

In vitro Esposizioni alla cannabis delle cellule epiteliali polmonari all'interfaccia aria-liquido

Cannabis is used by an estimated 192 million people around the world. Most people use cannabis through the inhalation of cannabis smoke, which contains ...

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Le cellule epiteliali polmonari può essere isolato dal tratto respiratorio dei topi e colto in aria-liquido come un modello di differenziazione dell'epitelio respiratorio. Un protocollo è descritto per l'isolamento, la coltura e l'esposizione di queste cellule al fumo di sigaretta tradizionale, al fine di studiare le risposte molecolari di questa tossina ambientale.

Isolamento di mouse cellule epiteliali delle vie respiratorie ed esposizione al fumo di sigaretta Sperimentale interfaccia Air Liquid

Questo protocollo è progettato per dimostrare metodo di esposizione di colture cellulari a sostanze chimiche tossiche inalate. Esposizione di differenziata interfaccia aria-liquido (ALI) colture di cellule epiteliali delle vie aeree fornisce un modello unico di esposizione vie aeree per gas tossici quali cloro. In questo manoscritto descriviamo effetto dell'esposizione cloro su colture di interfaccia aria-liquido di cellule epiteliali e coltura sommersa di cardiomiociti. Sistemi di esposizione...

In vitro delle cellule Cultura modello per Tossico per inalazione Chemical Testing

Lo scopo di questo protocollo è quello di esporre modelli organotipici di tessuto bronchiale e nasale 3D umano al fumo di sigaretta (CS) tradizionale all'interfaccia aria-liquido. L'impatto della CS sui tessuti viene quindi studiato utilizzando un saggio di attività del citocromo P450, una misurazione del battito delle ciglia e un approccio di biologia dei sistemi.

Valutazione dell&#39;impatto di esposizione ripetuta di organotipica 3D bronchiali e nasali coltura tissutale modelli di Whole fumo di sigaretta

Descriviamo un protocollo facile specificamente progettato per raggiungere le concentrazioni precise e controllate del sevoflurano o isoflurano in vitro al fine di migliorare la nostra comprensione dei meccanismi coinvolti nel danno epiteliale polmonare e per testare il romanzo terapie per la sindrome da distress respiratorio.

In Vitro Metodo di controllo delle concentrazioni di gas alogenati in cellule epiteliali alveolari coltivate

Qui, presentiamo un protocollo per eseguire le esposizioni portatile cellulare aerosol e misurare la risposta cellulare. Il metodo utilizza cellule, coltivate all'interfaccia aria-liquido, che imita in vivo fisiologia. Risposta cellulare agli aerosol di rame delle nanoparticelle è stato osservato come lo stress ossidativo attraverso la generazione di specie reattive dell'ossigeno e citotossicità come rilascio del lattato deidrogenasi.

Una nuovo portatile In Vitro l'esposizione Cassette per il campionamento di Aerosol

Presentiamo un sistema di esposizione in vitro robusto, trasferibile e predittivo per lo screening e il monitoraggio delle particelle trasportate dall'aria sulla loro citotossicità polmonare acuta esponendo le cellule polmonari umane coltivate all'interfaccia aria-liquido (ALI).

Valutazione della tossicità dell'inalazione acuta delle particelle aerotrasportate esponendo cellule polmonari umane coltivate all'interfaccia aria-liquida

Descritto qui è un protocollo per studiare come l'estratto di fumo di sigaretta influisce sulla colonizzazione batterica nelle cellule epiteliali polmonari.

Studiare gli effetti del fumo di sigaretta sull'infezione da pseudomona nelle cellule epiteliali polmonari

Descritto è il metodo di coltura cellulare e di esposizione di un modello bronchiale in vitro per un'esposizione realistica e ripetuta all'inalazione alle particelle per le prove di tossicità.

Un modello epiteliale bronchiale interfaccia aria-liquido per un'esposizione realistica e ripetuta all'inalazione alle particelle trasportate dall'aria per i test di tossicità

Il presente protocollo descrive le cellule staminali pluripotenti derivate dall'uomo di tipo 2 alveolari epiteliali (iAT2s). Queste cellule possono essere coltivate come sfere auto-rinnovanti in coltura 3D o adattate alla coltura di interfaccia aria-liquido (ALI).

Generazione di sfere 3D e colture di interfaccia aria-liquido 2D di cellule epiteliali alveolari di tipo 2 derivate da cellule staminali pluripotenti indotte dall'uomo

Qui, descriviamo un modello in vitro per isolare e differenziare le cellule epiteliali delle vie aeree murine, concentrandosi sulla loro acclimatazione all'estratto di fumo di sigaretta cronico (CSE). Il modello potrebbe essere utilizzato per caratterizzare in modo completo l'impatto multi-omico della CSE, che potrebbe fornire informazioni sulle risposte cellulari in condizioni di esposizione cronica al fumo.

Modello in vitro per lo studio del differenziamento e dei cambiamenti di multi-omiche su cellule epiteliali delle vie aeree murine stimolate con estratto di fumo di sigaretta

Le cartucce per vaporizzatori di distillato di cannabis sono dispositivi alimentati a batteria che aerosolizzano estratti contenenti alte concentrazioni di cannabinoidi. L'assenza di modelli preclinici consolidati per questi prodotti crea sfide nello studio dei loro effetti fisiologici. Per colmare questa lacuna, è stato sviluppato un modello murino standardizzato di inalazione preclinica per distillati di cannabis vaporizzati.

Sviluppo di un modello di inalazione preclinica per testare i distillati di cannabis vaporizzati

Scopri un modello standardizzato per esporre cellule epiteliali polmonari al vapore di cannabis all'interfaccia aria-liquido. Questo protocollo utilizza microbilance a cristallo di quarzo per dosimetria in tempo reale, migliorando la riproducibilità nella ricerca tossicologica.

In vitro Esposizioni alla cannabis delle cellule epiteliali polmonari all'interfaccia aria-liquido

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