Name: Analisi completa delle piastrine procoagulanti che presentano caratteristiche di necrosi, apoptosi e attivazione piastrinica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 37 s
Description: Scopri l'analisi delle piastrine procoagulanti con caratteristiche di necrosi, apoptosi e attivazione. Questo metodo identifica biomarcatori e target terapeutici per lo studio della trombosi.

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<ol><li>Munnix, I., Cosemans, J., Auger, J., Heemskerk, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+response+heterogeneity+in+thrombus+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Platelet response heterogeneity in thrombus formation.</a> Thromb Haemost. 102 (12), 1149-1156 (2009).</li>
<li>Heemskerk, J. W. M., Mattheij, N. J. A., Cosemans, J. M. E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet-based+coagulation%3A+Different+populations%2C+different+functions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Platelet-based coagulation: Different populations, different functions.</a> J Thromb Haemost. 11 (1), 2-16 (2013).</li>
<li>Podoplelova, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coagulation+factors+bound+to+procoagulant+platelets+concentrate+in+cap+structures+to+promote+clotting%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Coagulation factors bound to procoagulant platelets concentrate in cap structures to promote clotting.</a> Blood. 128 (13), 1745-1755 (2016).</li>
<li>Mann, K. G., Butenas, S., Brummel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dynamics+of+thrombin+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">The dynamics of thrombin formation.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 23 (1), 17-25 (2003).</li>
<li>Jackson, S. P., Schoenwaelder, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procoagulant+platelets%3A+Are+they+necrotic%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Procoagulant platelets: Are they necrotic.</a> Blood. 116 (12), 2011-2018 (2010).</li>
<li>Hua Vivien Mun Yee, V. M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procoagulant+platelets+and+the+pathways+leading+to+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Thromb+Hemost%22%5BJournal%5D)">Procoagulant platelets and the pathways leading to cell death.</a> Semin Thromb Hemost. 41 (04), 405-412 (2015).</li>
<li>Dale, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coated-platelets%3A+An+emerging+component+of+the+procoagulant+response%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Coated-platelets: An emerging component of the procoagulant response.</a> J Thromb Haemost. 3 (10), 2185-2192 (2005).</li>
<li>Vulliamy, P., Armstrong, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelets+in+hemostasis%2C+thrombosis%2C+and+inflammation+after+major+trauma%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Platelets in hemostasis, thrombosis, and inflammation after major trauma.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 44 (3), 545-557 (2024).</li>
<li>Vulliamy, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histone+H4+induces+platelet+ballooning+and+microparticle+release+during+trauma+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Histone H4 induces platelet ballooning and microparticle release during trauma hemorrhage.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 116 (35), 17444-17449 (2019).</li>
<li>Aliotta, A., Bertaggia Calderara, D., Zermatten, M. G., Marchetti, M., Alberio, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombocytopathies%3A+Not+just+aggregation+defects-the+clinical+relevance+of+procoagulant+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Med%22%5BJournal%5D)">Thrombocytopathies: Not just aggregation defects-the clinical relevance of procoagulant platelets.</a> J Clin Med. 10 (5), 894(2021).</li>
<li>Kirkpatrick, A. C., Vincent, A. S., Dale, G. L., Prodan, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coated+platelets+predict+stroke+at+30+days+following+TIA%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Coated platelets predict stroke at 30 days following TIA.</a> Neurology. 89 (2), 125-128 (2017).</li>
<li>Kirkpatrick, A. C., Tafur, A. J., Vincent, A. S., Dale, G. L., Prodan, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coated+platelets+improve+prediction+of+stroke+and+transient+ischemic+attack+in+asymptomatic+internal+carotid+artery+stenosis%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Coated platelets improve prediction of stroke and transient ischemic attack in asymptomatic internal carotid artery stenosis.</a> Stroke. 45 (10), 2995-3001 (2014).</li>
<li>Suzuki, J., Umeda, M., Sims, P. J., Nagata, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium-dependent+phospholipid+scrambling+by+TMEM16F%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Calcium-dependent phospholipid scrambling by TMEM16F.</a> Nature. 468 (7325), 834-838 (2010).</li>
<li>Prodan, C. I., Vincent, A. S., Dale, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coated+platelet+levels+correlate+with+bleed+volume+in+patients+with+spontaneous+intracerebral+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Coated platelet levels correlate with bleed volume in patients with spontaneous intracerebral hemorrhage.</a> Stroke. 41 (6), 1301-1303 (2010).</li>
<li>Josefsson, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consensus+report+on+markers+to+distinguish+procoagulant+platelets+from+apoptotic+platelets%3A+Communication+from+the+Scientific+and+Standardization+Committee+of+the+ISTH%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Consensus report on markers to distinguish procoagulant platelets from apoptotic platelets: Communication from the Scientific and Standardization Committee of the ISTH.</a> J Thromb Haemost. 21 (8), 2291-2299 (2023).</li>
<li>Kulkarni, P. P., Sonkar, V. K., Gautam, D., Dash, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AMPK+inhibition+protects+against+arterial+thrombosis+while+sparing+hemostasis+through+differential+modulation+of+platelet+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">AMPK inhibition protects against arterial thrombosis while sparing hemostasis through differential modulation of platelet responses.</a> Thromb Res. 196, 175-185 (2020).</li>
<li>Ekhlak, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Necroptosis+executioner+MLKL+plays+pivotal+roles+in+agonist-induced+platelet+prothrombotic+responses+and+lytic+cell+death+in+a+temporal+order%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Necroptosis executioner MLKL plays pivotal roles in agonist-induced platelet prothrombotic responses and lytic cell death in a temporal order.</a> Cell Death Differ. 30 (8), 1886-1899 (2023).</li>
<li>Kholmukhamedov, A., Janecke, R., Choo, H. -J., Jobe, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mitochondrial+calcium+uniporter+regulates+procoagulant+platelet+formation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">The mitochondrial calcium uniporter regulates procoagulant platelet formation.</a> J Thromb Haemost. 16 (11), 2315-2321 (2018).</li>
<li>Choo, H. -J., Saafir, T. B., Mkumba, L., Wagner, M. B., Jobe, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+calcium+and+reactive+oxygen+species+regulate+agonist-initiated+platelet+phosphatidylserine+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial calcium and reactive oxygen species regulate agonist-initiated platelet phosphatidylserine exposure.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (12), 2946-2955 (2012).</li>
<li>Jobe, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+role+for+the+mitochondrial+permeability+transition+pore+and+cyclophilin+D+in+platelet+activation+and+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Critical role for the mitochondrial permeability transition pore and cyclophilin D in platelet activation and thrombosis.</a> Blood. 111 (3), 1257-1265 (2008).</li>
<li>Leytin, V., Allen, D. J., Mykhaylov, S., Lyubimov, E., Freedman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombin-triggered+platelet+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Thrombin-triggered platelet apoptosis.</a> J Thromb Haemost. 4 (12), 2656-2663 (2006).</li>
<li>Lopez, J. J., Salido, G. M., Pariente, J. A., Rosado, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombin+induces+activation+and+translocation+of+Bid%2C+Bax+and+Bak+to+the+mitochondria+in+human+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Thrombin induces activation and translocation of Bid, Bax and Bak to the mitochondria in human platelets.</a> J Thromb Haemost. 6 (10), 1780-1788 (2008).</li>
<li>Wolf, B. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calpain+functions+in+a+caspase-independent+manner+to+promote+apoptosis-like+events+during+platelet+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Calpain functions in a caspase-independent manner to promote apoptosis-like events during platelet activation.</a> Blood. 94 (5), 1683-1692 (1999).</li>
<li>Kim, O. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatal+dysfunction+and+disintegration+of+thrombin-stimulated+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22Haematologica%22%5BJournal%5D)">Fatal dysfunction and disintegration of thrombin-stimulated platelets.</a> Haematologica. 104 (9), 1866-1878 (2019).</li>
<li>Schoenwaelder, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+distinct+pathways+regulate+platelet+phosphatidylserine+exposure+and+procoagulant+function%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Two distinct pathways regulate platelet phosphatidylserine exposure and procoagulant function.</a> Blood. 114 (3), 663-666 (2009).</li>
<li>Abbasian, N., Millington-Burgess, S. L., Chabra, S., Malcor, J. -D., Harper, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supramaximal+calcium+signaling+triggers+procoagulant+platelet+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Adv%22%5BJournal%5D)">Supramaximal calcium signaling triggers procoagulant platelet formation.</a> Blood Adv. 4 (1), 154-164 (2020).</li>
<li>Le, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+inner+activation+gate+controls+TMEM16F+phospholipid+scrambling%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">An inner activation gate controls TMEM16F phospholipid scrambling.</a> Nat Commun. 10 (1), 1846(2019).</li>
<li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TMEM16F+forms+a+Ca2%2B-activated+cation+channel+required+for+lipid+scrambling+in+platelets+during+blood+coagulation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">TMEM16F forms a Ca2+-activated cation channel required for lipid scrambling in platelets during blood coagulation.</a> Cell. 151 (1), 111-122 (2012).</li>
<li>Mattheij, N. J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual+mechanism+of+integrin+closure+in+procoagulant+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Dual mechanism of integrin closure in procoagulant platelets.</a> J Biol Chem. 288 (19), 13325-13336 (2013).</li>
<li>Liu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrially+mediated+integrin+%CE%B1iIb%CE%B23+protein+inactivation+limits+thrombus+growth%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Mitochondrially mediated integrin αiIbβ3 protein inactivation limits thrombus growth.</a> J Biol Chem. 288 (42), 30672-30681 (2013).</li>
<li>van Kruchten, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Both+TMEM16F-dependent+and+TMEM16F-independent+pathways+contribute+to+phosphatidylserine+exposure+in+platelet+apoptosis+and+platelet+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Both TMEM16F-dependent and TMEM16F-independent pathways contribute to phosphatidylserine exposure in platelet apoptosis and platelet activation.</a> Blood. 121 (10), 1850-1857 (2013).</li>
<li>Goelz, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelets+express+adaptor+proteins+of+the+extrinsic+apoptosis+pathway+and+can+activate+caspase-8%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">Platelets express adaptor proteins of the extrinsic apoptosis pathway and can activate caspase-8.</a> PLOS ONE. 16 (1), e0244848(2021).</li>
<li>Shlomovitz, I., Speir, M., Gerlic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flipping+the+dogma+-+phosphatidylserine+in+non-apoptotic+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Commun+Signal%22%5BJournal%5D)">Flipping the dogma - phosphatidylserine in non-apoptotic cell death.</a> Cell Commun Signal. 17 (1), 139(2019).</li>
<li>Nadine, J. A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coated+platelets+function+in+platelet-dependent+fibrin+formation+via+integrin+%CE%B1IIb%CE%B23+and+transglutaminase+factor+XIII%5BTitle%5D)+AND+%22Haematologica%22%5BJournal%5D)">Coated platelets function in platelet-dependent fibrin formation via integrin αIIbβ3 and transglutaminase factor XIII.</a> Haematologica. 101 (4), 427-436 (2016).</li>
<li>Michelson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+activation+by+thrombin+can+be+directly+measured+in+whole+blood+through+the+use+of+the+peptide+GPRP+and+flow+cytometry%3A+Methods+and+clinical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Coagul+Fibrinolysis%22%5BJournal%5D)">Platelet activation by thrombin can be directly measured in whole blood through the use of the peptide GPRP and flow cytometry: Methods and clinical applications.</a> Blood Coagul Fibrinolysis. 5 (1), 121-131 (1994).</li>
<li>Taylor, M. R., Couto, J. R., Scallan, C. D., Ceriani, R. L., Peterson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lactadherin+%28formerly+BA46%29%2C+a+membrane-associated+glycoprotein+expressed+in+human+milk+and+breast+carcinomas%2C+promotes+Arg-Gly-Asp+%28RGD%29-dependent+cell+adhesion%5BTitle%5D)+AND+%22DNA+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Lactadherin (formerly BA46), a membrane-associated glycoprotein expressed in human milk and breast carcinomas, promotes Arg-Gly-Asp (RGD)-dependent cell adhesion.</a> DNA Cell Biol. 16 (7), 861-869 (1997).</li>
<li>Andersen, M. H., Graversen, H., Fedosov, S. N., Petersen, T. E., Rasmussen, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+analyses+of+two+cellular+binding+domains+of+bovine+lactadherin%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Functional analyses of two cellular binding domains of bovine lactadherin.</a> Biochemistry. 39 (20), 6200-6206 (2000).</li>
<li>Tan, C. W., Bourcy, M., Pasalic, L., Chen, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+assessment+of+procoagulant+platelets+using+a+dithiol-reactive+probe+functional+disulfide+bonds%3A+Methods+and+protocols%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry assessment of procoagulant platelets using a dithiol-reactive probe functional disulfide bonds: Methods and protocols.</a> Methods Mol Biol. 1967, 305-321 (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Soluzione di destrosio citrato acido (ACD) (per 1000 mL)</td><td></td><td></td><td>Tri- Citrato di sodio- &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 22 g Acido Citrico-&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 8 g Destrosio-&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 24,5 g Acqua-&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Volume di reintegro fino a 1000 ml&nbsp;</td></tr><tr><td>Kit di etichettatura delle proteine Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen</td><td>A10235</td><td></td></tr><tr><td>APC Topo Anti-Umano CD62P</td><td>BD Pharmingen</td><td>550888</td><td></td></tr><tr><td>Protrombina Bovina</td><td>Prolytix</td><td>BCP-1010</td><td></td></tr><tr><td>Tampone A (Preparazione</td><td></td><td></td> Piastrinica<td>)&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; M.W&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Conc. in 1X&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Per 100 mL di soluzione 10X HEPES&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 238,30&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 20 mM&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 4.766 g NaCl&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 58,44&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 134 mM&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 7,83 g KCl&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 74,55&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 2,9 mM&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 216,19 mg MgCl2&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 203,30&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 1 mM&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 203,30 mg NaH2PO4&nbsp; &nbsp; &nbsp; 156,01&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 0,34 mM&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 53,04 mg NaHCO3&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 84 01&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 12 mM &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 1,01 g Acqua a 100 mL dopo aver regolato il pH a 6,2 Diluire la soluzione 10X 1:10 (v/v) con acqua Milli Q appena prima della preparazione piastrinica per ottenere la soluzione 1X che deve essere integrata con i seguenti &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Conc. in 1X&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Per 1 ml di soluzione 1X EGTA &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 1 mM &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Aggiungi 10 &mu; L (1:100 v/v) 100 mM EGTA&nbsp; Glucosio &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 5 mM &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Aggiungi 5 &mu; L (1:200 v/v) 1 M glucosio PGE1 &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 3 &mu; M &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Aggiungi 3 &mu; L (1:333 v/v) 1 mM Soluzione PGE1</td></tr><tr><td>Tampone B (preparazione piastrinica)</td><td></td><td></td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; M.W&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Conc. in 1X&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Per 100 mL di soluzione 10X HEPES&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 238,30&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 20 mM&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 4.766 g NaCl&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 58,44&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 134 mM&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 7,83 g KCl&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 74,55&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 2,9 mM&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 216,19 mg MgCl2&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 203,30&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 1 mM&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 203,30 mg NaH2PO4&nbsp; &nbsp; &nbsp; 156,01&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 0,34 mM&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 53,04 mg NaHCO3&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 84 01&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 12 mM &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 1,01 g Acqua a 100 mL dopo aver regolato il pH a 7,4 Diluire la soluzione 10X 1:10 (v/v) con acqua Milli Q appena prima della preparazione piastrinica per ottenere la soluzione 1X che deve essere integrata con i seguenti &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Conc. in 1X&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Per 1 ml 1X soluzione Glucosio &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 5 mM &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Aggiungi 5 &mu; L (1:200 v/v) 1 M di glucosio&nbsp;</td></tr><tr><td>CaCl2 (0,5 M) (per 50 ml)</td><td></td><td></td><td>Peso molecolare di CaCl2.2H2O = 147,02 Sciogliere 3,675 g di CaCl2.2H2O in 50 ml di acqua Milli Q</td></tr><tr><td>CellEvent Caspase-3/7 Reagenti di rilevamento Verde</td><td>Invitrogen</td><td>C10423</td><td>Reagente per la rilevazione dell'apoptosi</td></tr><tr><td>Convulxin</td><td>Enzo Life Sciences</td><td>ALX-350-100</td><td></td></tr><tr><td>EDTA (0,5 M; pH 8) (per 100 mL)</td><td></td><td></td><td>Peso molecolare di EDTA Na2.2H2 O: 372.24g Pesare 18.612 g e sospendere in 50 ml di acqua Milli Q e controllare il pH (pH~4) Aggiungere lentamente 10N NaOH agitando e monitorare il pH. L'EDTA inizia a solubilizzarsi a circa pH 7 ed è completamente solubile a pH 8. Portare il volume a 100 ml con acqua Milli Q.</td></tr><tr><td>EGTA (100 mM; pH 7,4) (per 100 mL)</td><td></td><td></td><td>Peso molecolare: 380,4 Aggiungere 3,804 g di EGTA in 50 ml di acqua Milli Q e controllare il pH (pH~3) Aggiungere 10 N di NaOH goccia a goccia mescolando e monitorare il pH EGTA diventa solubile a pH 7,0 (circa) Regolare il pH a 7,4 Portare il volume a 100 ml con acqua</td></tr> <tr><td>Milli QFITC Mouse Anti-Human PAC-1</td><td>BD</td><td>340507</td><td></td></tr><tr><td>FITC-IETD-FMK Kit di colorazione Caspasi 8 (attivo)</td><td>Abcam</td><td>ab65614</td><td></td></tr><tr><td>Mitotracker Rosso CMXRos (colorante per marcatura mitochinaria)</td><td>Invitrogen</td><td>M7512</td><td>Stock= 1 mM (50 &micro; g disciolto in 90 &micro; l DMSO) Sub-stock= 100 &micro; M (10 &micro; l Magazzino + 90 &micro; l DMSO) Concentrazione di lavoro= 500nM (0,5 &micro; l in 100 &micro; l)</td></tr><tr><td>PE Annessina V</td><td>BD Pharmingen</td><td>560930</td><td></td></tr><tr><td>Prostaglandina E1</td><td>Sigma</td><td>P5515</td><td>Stock = 20 mM (1 mg disciolto in 141 &micro; L DMSO) Sub-stock= 1 mM (10 &micro; l Magazzino + 190 &micro; L DMSO) Concentrazione di lavoro= 3 &micro; M (3 &micro; L in 1 mL)</td></tr><tr><td>Rhod-2 AM</td><td>Invitrogen</td><td>R1244</td><td>Stock = 5 mM (1 mg disciolto in 178 &micro; L DMSO) Sub-stock= 100 &micro; M (10 &micro; L Stock + 90 &micro; L DMSO) Concentrazione di lavoro= 500 nM (0,5 &micro; L su 100 &micro; L)</td></tr><tr><td>Trombina da plasma umano</td><td>Sigma</td><td>T7572</td><td></td></tr></tbody></table>

analisi completa delle piastrine procoagulanti che presentano caratteristiche di necrosi, apoptosi e attivazione piastrinica

Comprehensive Analysis of Procoagulant Platelets Exhibiting Features of Necrosis, Apoptosis and Platelet Activation

Una percentuale di piastrine attivate diventa "procoagulante" con un caratteristico aumento dell'espressione superficiale sia della fosfatidilserina (PS) che della P-selectina, che le distingue dalle piastrine "apoptotiche" che sono positive solo per l'esposizione al PS e dalle piastrine "proaggregatorie" che sono positive per l'espressione della P-selectina. Abbiamo scoperto che la trombina induce un aumento dose-dipendente della proporzione di piastrine procoagulanti positive sia per l'espressione di P-selectina che di...

Analisi completa delle piastrine procoagulanti che presentano caratteristiche di necrosi, apoptosi e attivazione piastrinica

Platelets circulating in the bloodstream are relatively quiescent but become "activated" upon encountering stimulants or "agonists" at the site of blood ...

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Qui riportiamo una tecnica sperimentale di fluorescenza microscopia intravitale di visualizzare eterotipiche piastrine-neutrofili interazioni sul endotelio attivato durante l'infiammazione vascolare e la formazione di trombi nei topi vivi. Questa tecnologia microscopica sarà prezioso per studiare il meccanismo molecolare della malattia vascolare e per testare agenti farmacologici in condizioni fisiopatologiche.

In tempo reale di immagine degli eterotipica piastrine-neutrofili interazioni sull&#39;endotelio Attivato durante l&#39;infiammazione vascolare e la formazione di trombi in topi vivi

Questo lavoro descrive un metodo basato sulla microscopia a fluorescenza per lo studio dell'adesione piastrinica, della diffusione e della secrezione sotto flusso. Questa piattaforma versatile permette di studiare la funzione piastrinica per la ricerca meccanicistica sulla trombosi e sull'emostasi.

Imaging di cellule vive di degranulazione piastrinica e secrezione sotto flusso

La formazione di piastrine procoagulanti è stata correlata con un aumentato rischio di trombosi. Di seguito viene presentato un preciso protocollo per l'isolamento delle piastrine lavate dal sangue umano, volto a quantificare l'esposizione alla fosfatidilserina e al rilascio di microvescicole, caratteristiche distintive delle piastrine procoagulanti.

Caratterizzazione piastrinica procoagulante mediante misurazione dell'esposizione alla fosfatidilserina e del rilascio di microvescicole da piastrine purificate umane

La funzione piastrinica sotto flusso può essere valutata e la rianimazione emostatica simulata può essere modellata utilizzando un dispositivo microfluidico, che ha applicazioni nella medicina traumatologica e trasfusionale.

Microfluidica nella valutazione della funzione piastrinica

La citometria a flusso multicolore per le piastrine può identificare nuovi sottotipi piastrinici all'interno delle sottopopolazioni piastriniche classiche, come le piastrine a riposo, aggregatorie, procoagulanti e apoptotiche. Ciò consente il confronto di diversi modelli di sottopopolazione indotti da vari agonisti piastrinici. Qui, viene descritta in dettaglio una procedura per stabilire un pannello di citometria a flusso multicolore.

Analisi delle sottopopolazioni piastriniche mediante citometria a flusso multicolore

Questo lavoro descrive un saggio microfluidico che utilizza lo stress di taglio per innescare la formazione di trombo nel sangue e caratterizza il trombo tramite molteplici dimensioni di lettura. Il test può misurare la tendenza protrombotica dei campioni di sangue ed è quindi utile nella diagnosi di malattie, nella scoperta di farmaci e in studi meccanicistici di base relativi alla trombosi.

Saggio di profilazione trombonica: una piattaforma basata sulla microfluidica per caratterizzare in modo completo la trombogenesi biomeccanica

Un database di oncologia toracica è stato sviluppato per servire come un repository completo di dati clinici e di laboratorio ai fini della ricerca traslazionale. La banca dati servirà ricercatori traslazionale sul cancro nell'ambito del Programma di Ricerca Oncologia Toracica. Questo database è adattabile ad altri modelli di cancro, così come altre malattie umane.

Generazione di Comprehensive Database Oncologia Toracica - Strumento per la ricerca traslazionale

Valutazioni oggettive dei meccanismi fisiologici che sostengono discorso sono necessari per monitorare l'insorgenza e la progressione della malattia in persone con SLA e per quantificare gli effetti del trattamento negli studi clinici. In questo video, vi presentiamo un approccio globale, strumentazione protocollo basato su motore per quantificare le prestazioni discorso in popolazioni cliniche.

Un protocollo per la valutazione completa della disfunzione bulbare nella Sclerosi Laterale Amiotrofica (SLA)

Un tempo reale impedenza elettrica tecnica basata su Misura Invasione di cellule endoteliali monostrato dalle cellule tumorali

RNA interference (RNAi) possiede molti vantaggi rispetto knockout del gene ed è stato ampiamente utilizzato come strumento in studi di geni funzionali. L'invenzione di DNA vettoriale basata RNAi tecnologia ha fatto lungo termine e smontabile gene inducibile possibile, e anche aumentata la possibilità di silenziamento...

DNA Vector-based RNA Interference per studiare la funzione del gene in Cancro

Scopri l'analisi delle piastrine procoagulanti con caratteristiche di necrosi, apoptosi e attivazione. Questo metodo identifica biomarcatori e target terapeutici per lo studio della trombosi.

Analisi completa delle piastrine procoagulanti che presentano caratteristiche di necrosi, apoptosi e attivazione piastrinica

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