Name: In vitro Coltura per cellule T di anatra specifiche per H5N1 e rilevamento delle risposte immunitarie utilizzando il metodo di colorazione delle citochine intracellulari (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-30T14:50:00.000+00:00
Duration: 6 min 57 s
Description: Scopri la coltura in vitro di cellule T specifiche per H5N1 nell'anatra e il rilevamento delle citochine intracellulari per quantificare IFN-γ. Questo metodo standardizzato consente di studiare l'immunità aviaria contro le infezioni virali.

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<ol><li>Almeida, L., Lochner, M., Berod, L., Sparwasser, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+pathways+in+T+cell+activation+and+lineage+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Metabolic pathways in T cell activation and lineage differentiation.</a> Semin Immunol. 28 (5), 514-524 (2016).</li>
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<li>Zanker, D., Waithman, J., Yewdell, J. W., Chen, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mixed+proteasomes+function+to+increase+viral+peptide+diversity+and+broaden+antiviral+CD8%2B+T+cell+responses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Mixed proteasomes function to increase viral peptide diversity and broaden antiviral CD8+ T cell responses.</a> J Immunol. 191 (1), 52-59 (2013).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>Provette da 1,5 mL per MICRO-Centrifuga</td><td>Biosharp</td><td>Cat#BS-15-M</td><td></td></tr><tr><td>Provette da centrifuga da 15 mL</td><td>Labselect</td><td>Cat#CT-002-15A</td><td></td></tr><tr><td>2-mercaptoetanolo (55 mM)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Cat#M6250-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Piastra per coltura tissutale a 48 pozzetti (non trattata, fondo piatto)</td><td>Biofil</td><td>Cat#TCP000048</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Provette da centrifuga</td><td>Labselect</td><td>Cat#CT-002-50A</td><td></td></tr><tr><td>Piastre qPCR a 96 pozzetti senza gonna Labselect</td><td></td><td>Cat#PP-96-NS-0100</td><td></td></tr><tr><td>BD Kit Cytofix/Cytoperm</td><td>BD Bioscience</td><td>Cat#BD 554714</td><td></td></tr><tr><td>Brefeldin A (BFA)</td><td>BD Bioscience</td><td>Cat#347688</td><td></td></tr><tr><td>Incubatore CO2</td><td>Thermo Fisher</td><td>Heracell 150i GP</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga</td><td>Kit</td> di marcatura CFSE Eppendorf <td>5810R</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Abcam</td><td>Cat#ab113853</td><td></td></tr><tr><td>ChamQ SYBR qPCR Master Mix</td><td>Vazyme</td><td>Cat#Q341-02</td><td></td></tr><tr><td>Kit di isolamento dei linfociti del sangue periferico dell'anatra</td><td>Tbdscience</td><td>Cat#LTS1090D</td><td></td></tr><tr><td>Evo M-MLV RT Premix</td><td>Accurate Biotechnology</td><td>Cat#AG11706</td><td></td></tr><tr><td>Isolamento dell'RNA totale di cellule/tessuti FastPure Kit V2</td><td>Vazyme</td><td>Cat#RC112-01</td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale bovino</td><td>Gibco</td><td>Cat#10437-028</td><td></td></tr><tr><td>Citometro a flusso</td><td>Beckman Coulter</td><td>BA43347</td><td></td></tr><tr><td>Tubo di flusso</td><td>Beyotime</td><td>Cat#FFC005</td><td></td></tr><tr><td>FlowJo v10.8.1</td><td>Tree Star</td><td>https://www.flowjo.com</td><td></td></tr><tr><td>Goat Anti-Mouse 488, diluizione 1:50</td><td>Abbkine</td><td>Cat#A23210</td><td></td></tr><tr><td>Capra Anti-Topo IgG2b, FITC, diluizione 1:50</td><td>Southern Biotech</td><td>Cat#1091-31</td><td></td></tr><tr><td>Capra Anti-Topo IgG3, PE, diluizione 1:250</td><td>Southern Biotech&nbsp;</td><td>Cat#1100-09S</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad prism 8.0.2</td><td>GraphPad Software</td><td>https://www.graphpad-prism.cn</td><td></td></tr><tr><td>H5N1 AIV ceppo DK383</td><td>Laboratorio di ingegneria congiunto nazionale e regionale per la prevenzione e il controllo delle zoonosi</td><td>A/Duck/Guangdong/383/2008</td><td></td></tr><tr><td>L-glutammina (200 mM)</td><td>Gibco</td><td>Cat#25030081</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio</td><td>Motic</td><td>AE2000</td><td></td></tr><tr><td>Topo Anti-Anatra CD4, diluizione 1:50</td><td>Bio-Rad</td><td>Cat#MCA2478</td><td></td></tr><tr><td>Topo Anti-Anatra CD8&alfa;, diluizione 1:50</td><td>GeneTex&nbsp;</td><td>Cat#GTX41834</td><td></td></tr><tr><td>Mouse Anti-Anatra IFN-&gamma; mAb, diluizione 1:10</td><td>Preparato nel nostro laboratorio&nbsp;</td><td></td><td></td>NA</tr><tr><td>NanoDrop One Spettrofotometro</td><td>Thermo Fisher</td><td>AZY1603209</td><td></td></tr><tr><td>NEAA (non essenziale</td><td>Gibco</td><td>Cat#11140-050</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>Cat#10010023</td><td></td></tr><tr><td>PCR Termociclatore</td><td>Biometra</td><td>Biometra Tone 96G</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di penicillina-streptomicina</td><td>Gibco</td><td>Cat#15070063</td><td></td></tr><tr><td>Sistema di PCR in tempo reale</td><td>Applied Biosystems</td><td>ABI7500</td><td></td></tr><tr><td>IL-2 umana ricombinante (10 &mu; g)</td><td>USCNK</td><td>Cat#RPA111Ga01</td><td></td></tr><tr><td>Tampone per lisi dei globuli rossi</td><td>Tbdscience</td><td>Cat#NH4CL2009</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Gibco</td><td>Cat#11875-119</td><td></td></tr><tr><td>Piruvato di sodio (100 mM)</td><td>Gibco</td><td>Cat#11360-070</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Cat#93595</td><td></td></tr><tr><td>Anatre domestiche di due settimane (Sheldrake)</td><td>un allevamento di anatre in Guangzhou</td><td>NA</td><td></td></tr></tbody></table>

in vitro coltura per cellule t di anatra specifiche per h5n1 e rilevamento delle risposte immunitarie utilizzando il metodo di colorazione delle citochine intracellulari

In Vitro Culture for H5N1-Specific Duck T Cells and Detection of Immune Responses Using Intracellular Cytokine Staining Method

Questo protocollo è stato sviluppato sulla base di uno studio precedente sul rilevamento delle risposte effettrici delle cellule T antigene-specifiche nelle anatre20. La prima fase dell'esperimento prevede la coltura in vitro di cellule T virus-specifiche, che fungono da base per i successivi studi sulla risposta effettrice. Inizialmente, le APC sono state incubate e co-coltivate con cellule effettrici. Le osservazioni morfologiche hanno rivelato che dopo la proliferazione, le cellule mos...

In vitro Coltura per cellule T di anatra specifiche per H5N1 e rilevamento delle risposte immunitarie utilizzando il metodo di colorazione delle citochine intracellulari

The in vitro culture of T cells is a critical method for studying immune responses, viral infections, and potential therapeutic strategies. However, no ...

in-vitro-culture-for-h5n1-specific-duck-t-cells-detection-immune

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Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

Abbiamo sviluppato un test in vitro per studiare il ruolo delle vie immunomodulanti nella regolazione della secrezione di citochine da HIV-specifiche cellule T CD4.

In vitro per valutare l&#39;impatto di immunoregolatorio Pathways su HIV-specifica CD4 T effettrici delle cellule di funzione

A differenza privi di cellule HIV-1 particelle, cellule T CD4 + infetti siano effettivamente rilevati dalle cellule dendritiche plasmacitoidi (PDC). Questo manoscritto descrive un metodo in cui le cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC) o pDCs isolate sono co-coltura con HIV-1 le cellule T infette di valutare sensing innato da pDCs valutata dal rilascio di tipo I IFN.

Valutare l&#39;innato rilevamento dell&#39;infezione da HIV-1 CD4 infetti<sup&gt; +</sup&gt; Cellule T dalle cellule dendritiche plasmacitoidi Utilizzando un<em&gt; Ex vivo</em&gt; Sistema di co-coltura.

La capacità di monitorare le risposte delle cellule T in dettaglio in vivo è importante per lo sviluppo della nostra comprensione della risposta immunitaria. Qui si descrive l'uso di array di destinazione fluorescenti (ALS) in un test in vivo di cellule T in che valuta&gt; 250 parametri contemporaneamente mediante citometria a flusso.

L&#39;uso di fluorescenti target matrici per la valutazione delle cellule T risposte<em&gt; In vivo</em

Due metodi basati sulla citometria a flusso, un test di priming delle cellule T in vitro e la colorazione intracellulare delle citochine, sono stati utilizzati per misurare la capacità di presentazione dell'antigene delle cellule dendritiche e le risposte delle cellule T antigene-specifiche a un'infezione mutante del virus del Nilo occidentale nei topi.

In Analisi Vitro di Myd88 mediata Cellular Immune Response to West Nile virus mutante Strain Infezione

C'è una generale mancanza di conoscenza su come funzionano i vaccini. Qui proponiamo l'uso combinato della genetica inversa e dei topi chimerici del midollo osseo per ottenere informazioni sulle risposte immunitarie precoci dell'ospite ai vaccini, con particolare attenzione alle cellule dendritiche e all'immunità delle cellule T.

Intranasale somministrazione di ricombinante Influenza vaccini nei modelli chimerico topo per studiare immunità delle mucose

Influenza A virus (IAVs) è importanti patogeni respiratori umani. Per capire la patogenicità di IAVs e per eseguire test preclinici di approcci vaccinali romanzo, modelli animali che imita la fisiologia umana sono necessari. Qui, descriviamo le tecniche per valutare IAV patogenesi, le risposte umorali e l'efficacia del vaccino utilizzando un modello murino di infezione.

Studi del Virus di riossidazione A in un modello murino di infezione

Descriviamo un metodo per misurare l'attivazione di funzioni effettrici Fc-mediata dagli anticorpi che hanno come destinazione l'emagglutinina del virus dell'influenza. Questo dosaggio può essere adattato anche per valutare la capacità di anticorpi monoclonali o policlonali sieri altre glicoproteine di superficie virale di targeting di indurre immunità Fc.

Un metodo per valutare le funzioni effettrici Fc-mediata indotte dagli anticorpi specifici di Hemagglutinin di riossidazione

Lo sviluppo del test ELISpot interferone per la cavia PBMCs permette la caratterizzazione delle risposte delle cellule T in questo modello altamente rilevante per lo studio delle malattie infettive. Abbiamo applicato il test per misurare le risposte delle cellule T associate intradermica consegna di vaccini a DNA.

Ottimizzazione del interferone-gamma ELISpot analisi di risposte a cellula T misura nel modello cavia dopo la vaccinazione

Questo documento descrive i protocolli di valutazione della risposta Tfh e GC B nel modello di topo di infezione da virus influenzale.

Valutazione delle cellule di aiuto follicolare T e della risposta del centro germinale durante l'infezione da virus influenzale A nei topi

Questo protocollo descrive un processo sperimentale per produrre particelle pseudotimi virali infettive ad alto tipo (pp) con glicoproteine da due ceppi influenzali A e come determinarne l'infettività. Questo protocollo è altamente adattabile per sviluppare pps di qualsiasi altro tipo di virus avvolto con diversi glicoproteine busta.

Produzione di particelle pseudotioniche di influenza ad alto livello con le legiole di busta dei virus altamente patogeni H5N1 e Avian H7N9

Qui descriviamo un protocollo per il confezionamento di pseudovirus e la misurazione dell'attività neutralizzante degli anticorpi.

Preparazione di virus dell'influenza aviaria H5 pseudo-tipizzati con metodo di trasfezione del fosfato di calcio e misurazione dell'attività neutralizzante degli anticorpi

Scopri la coltura in vitro di cellule T specifiche per H5N1 nell'anatra e il rilevamento delle citochine intracellulari per quantificare IFN-γ. Questo metodo standardizzato consente di studiare l'immunità aviaria contro le infezioni virali.

In vitro Coltura per cellule T di anatra specifiche per H5N1 e rilevamento delle risposte immunitarie utilizzando il metodo di colorazione delle citochine intracellulari (Video) | JoVE Journal

In vitro Coltura per cellule T di anatra specifiche per H5N1 e rilevamento delle risposte immunitarie utilizzando il metodo di colorazione delle citochine intracellulari

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