Name: Produzione riproducibile di SPOT come piattaforma di coltura basata su scaffold ad alta produttività (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 22 s
Description: Scopri la produzione della piattaforma SPOT per colture su scaffold ad alta produttività in formato 96 e 384 pozzetti. Questo metodo automatizzato migliora i flussi di lavoro per lo screening farmacologico e la modellazione avanzata delle malattie.

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<ol><li>Antoni, D., Burckel, H., Josset, E., Noel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-Dimensional+Cell+Culture%3A+A+Breakthrough+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Three-Dimensional Cell Culture: A Breakthrough in vivo.</a> Int J Mol Sci. 16 (3), 5517-5527 (2015).</li>
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<li>Bozal, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+automated+3D+high+content+cell+screening+platform+for+organoid+phenotyping%5BTitle%5D)+AND+%22SLAS+Disc%22%5BJournal%5D)">Development of an automated 3D high content cell screening platform for organoid phenotyping.</a> SLAS Disc. 29 (7), 100182(2024).</li>
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<li>Hofer, M., Lutolf, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mater%22%5BJournal%5D)">Engineering organoids.</a> Nat Rev Mater. 6 (5), 402-420 (2021).</li>
<li>Landon-Brace, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Engineered+Patient-Derived+Tumor+Organoid+Model+That+Can+Be+Disassembled+to+Study+Cellular+Responses+in+a+Graded+3D+Microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Func+Mater%22%5BJournal%5D)">An Engineered Patient-Derived Tumor Organoid Model That Can Be Disassembled to Study Cellular Responses in a Graded 3D Microenvironment.</a> Adv Func Mater. 31 (41), 2105349(2021).</li>
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<li>Rodenhizer, D., Dean, T., Xu, B., Cojocari, D., McGuigan, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+three-dimensional+engineered+heterogeneous+tumor+model+for+assessing+cellular+environment+and+response%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">A three-dimensional engineered heterogeneous tumor model for assessing cellular environment and response.</a> Nat Protoc. 13 (9), 1917-1957 (2018).</li>
<li>Young, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+TRACER+3D+Co-Culture+tumour+model+for+head+and+neck+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">A TRACER 3D Co-Culture tumour model for head and neck cancer.</a> Biomaterials. 164, 54-69 (2018).</li>
<li>Dean, T., Li, N. T., Cadavid, J. L., Ailles, L., McGuigan, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+TRACER+culture+invasion+assay+to+probe+the+impact+of+cancer+associated+fibroblasts+on+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma+cell+invasiveness%5BTitle%5D)+AND+%22Biomater+Sci%22%5BJournal%5D)">A TRACER culture invasion assay to probe the impact of cancer associated fibroblasts on head and neck squamous cell carcinoma cell invasiveness.</a> Biomater Sci. 8 (11), 3078-3094 (2020).</li>
<li>Du, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+miniaturized+3D+organoid+culture+platform+for+ultra-high-throughput+screening%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Development of a miniaturized 3D organoid culture platform for ultra-high-throughput screening.</a> J Mol Cell Biol. 12 (8), 630-643 (2020).</li>
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</ol>

Nonostante i progressi nella ricerca biomedica, lo sviluppo di saggi in vitro fisiologicamente rilevanti rimane una sfida. Un test ideale dovrebbe adattarsi a una vasta gamma di tipi di cellule, formulazioni di trattamento, tempistiche, strumentazione commerciale e letture analitiche per soddisfare le esigenze dei ricercatori di varie discipline. Tuttavia, a causa della mancanza di strumenti adeguati, i ricercatori si affidano spesso a modelli semplicistici, come i monostrati 2D di linee cellulari immortalizzate, che non riescono a ricapitolare la complessità e la rilevanza clinica, in particolare nella ricerca sul cancro 1,2. Per affrontare questo problema, la biobanca dei tumori su larga scala e la collaborazione tra i medici hanno guidato lo sviluppo di modelli in vitro ad alta fedeltà come gli organoidi tumorali derivati da pazienti (PDO), che conservano profili genetici e terapeutici più specifici per il paziente rispetto alle linee cellulari 3,4,5. Nel frattempo, i progressi nell'automazione di laboratorio e nella scoperta di farmaci richiedono piattaforme che si integrino perfettamente nei flussi di lavoro ad alta produttività. Sebbene le piattaforme esistenti affrontino la fedeltà biologica o la scalabilità, poche sono state in grado di risolvere entrambe le sfide contemporaneamente 6,7,8. Lo sviluppo di modelli automatizzati e ad alto rendimento che replicano le caratteristiche chiave della malattia è fondamentale per far progredire la ricerca biomedica e accelerare la generazione di dati per le applicazioni traslazionali.
Numerosi modelli emergenti mirano ad affrontare le sfide associate alla coltura di tipi cellulari specializzati, come le PDO, con un'elevata produttività (Figura 1). Le piattaforme standard, in cui gli organoidi vengono miscelati con idrogel in piastre da 96 o 384 pozzetti, presentano diverse limitazioni: (i) un elevato volume di cellule-gel porta a un accesso incoerente ai nutrienti, (ii) la curvatura del menisco del pozzetto crea artefatti di imaging e gradienti cellulari, (iii) la semina dell'idrogel manca di uniformità tra i lotti e il personale, (iv) incompatibilità con la fabbricazione automatizzata e la microscopia automatizzata e (v) l'uso di matrice extracellulare (ECM) che è tipicamente un campione di rischi morbido e fragile distruzione a densità tissutali fisiologiche o incorporazione di tipi cellulari contrattili 1,9. Attualmente, la maggior parte degli studi PDO basati su piastra sono condotti seminando manualmente il gel cellulare nella piastra10,11 o con un metodo di sovrapposizione di gel, in cui l'idrogel viene diluito con un mezzo meno viscoso e le cellule vengono centrifugate sul fondo del pozzetto per posizionarle nel piano ottico appropriato 12,13. Entrambi gli approcci non riescono a fornire un supporto meccanico per la cultura a lungo termine. Sulla base delle nostre precedenti osservazioni (dati non pubblicati), l'idrogel commerciale mescolato con le cellule nelle piastre standard dei pozzetti si contrae dalle superfici del pozzetto per 9 pozzetti su 12 nell'arco di 12 giorni, mentre il metodo gel-overlay manca di interazioni fisiologiche cellula-matrice. Inoltre, le colture risultanti non possono essere mantenute per lunghi periodi a causa delle limitazioni di spazio all'interno del pozzetto e sono incompatibili con i saggi che richiedono un elevato rapporto reagente/mezzo cellulare 14,15,16. Queste barriere pratiche ostacolano l'adozione di modelli 3D e limitano la riproducibilità sperimentale sul campo.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68405/68405fig1.jpg"> 
Figura 1: Valutazione dei modelli colturali basati sulla scalabilità e sulla rilevanza biologica. Il posizionamento relativo di vari sistemi di coltura in vitro e in vivo lungo la scalabilità (asse y), definita dalla produttività su piastra, e la rilevanza biologica (asse x), evidenziando i compromessi tra potenziale di rendimento e fedeltà fisiologica. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68405/68405fig1large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
Motivati da queste sfide, l'elevata porosità e il rinforzo meccanico di un sottile scaffold in cellulosa sono stati sfruttati per sviluppare la piattaforma supportata da scaffold per tessuti a base di organoidi (SPOT), disponibile in entrambi i formati a 96 e 384 pozzetti. SPOT incorpora uno scaffold polimerico pre-modellato utilizzando un metodo di infiltrazione17 precedentemente sviluppato che corrisponde al layout della piastra, consentendo un posizionamento preciso delle goccioline di cellule-gel e fornendo supporto strutturale per la fase di idrogel (Figura 2A). L'assorbimento capillare nell'impalcatura guida la soluzione cellula-gel, formando una rete di biocompositi forzata meccanicamente (Figura 2B). A causa della struttura porosa dell'impalcatura, il cell-gel si infiltra e forma uno strato sottile (circa 70 μm di spessore), richiedendo una quantità dieci volte inferiore di cellule-gel per coprire il fondo del pozzetto14. La compatibilità di SPOT con i PDO dell'adenocarcinoma duttale pancreatico (PDAC) è stata dimostrata anche valutando la loro crescita utilizzando saggi metabolici e misurazioni basate su immagini. Sin dal suo sviluppo, SPOT ha dimostrato una notevole versatilità e usabilità per i ricercatori impegnati nella coltura di organoidi. Inoltre, il design di SPOT offre una scalabilità di facile utilizzo, con volumi di reagenti ridotti e capacità di imaging migliorate grazie alla sua geometria in microgel piatta e priva di menisco, garantendo una penetrazione uniforme della luce e un imaging accurato ad alto contenuto14 (Figura 2C, D). SPOT supporta anche la co-coltura con altri tipi di cellule rilevanti, come i fibroblasti, per ricapitolare meglio il microambiente tumorale18.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68405/68405fig2.jpg"> 
Figura 2: Panoramica del dispositivo 96-SPOT e del flusso di lavoro di analisi delle immagini. (A) Rappresentazione schematica della fabbricazione di piastre SPOT: il dispositivo viene assemblato raccogliendo una piastra commerciale a pozzetti senza fondo (in alto), un'impalcatura con motivo in PMMA (mostrata in blu) e una pellicola in policarbonato (in basso) utilizzando strati di adesivo poliacrilico biadesivo (mostrato in giallo). (B) Semina cellulare in un pozzetto di scafffold: le cellule vengono sospese in un idrogel non polimerizzato (mostrato in rosa) e pipettate in ciascun pozzetto dove si infiltrano nello scaffold. L'idrogel viene quindi lasciato gelificare per incapsulare le cellule all'interno dell'idrogel supportato da scaffold. (C) Microscopia: il microtessuto risultante può essere visualizzato utilizzando la microscopia automatizzata a campo largo. (D) Analisi basata su immagini: le immagini acquisite di cellule fluorescenti (verdi) sospese in gel possono essere analizzate utilizzando pipeline standard di analisi delle immagini. Immagine rappresentativa al microscopio a epifluorescenza di cellule KP4 che esprimono GFP in un pozzetto 96-SPOT. La barra della scala è di 500 μm. Questa cifra è stata modificata da14. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68405/68405fig2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
Un altro vantaggio di SPOT è che il sistema può essere integrato con un gestore di liquidi open source, facilitando la fabbricazione automatizzata e riproducibile di colture DOP. Questo progresso riduce la variabilità dell'utente e supporta disegni sperimentali complessi, tra cui lo screening dei farmaci ad alto rendimento e gli approcci di medicina personalizzata18. In precedenza, SPOT si era anche dimostrato compatibile con la caratterizzazione multiplexata basata su singole cellule di fenotipi cellulari in ambienti tumorali eterogenei e con il recupero delle cellule su richiesta da SPOT mediante digestione18. Queste caratteristiche posizionano SPOT come uno strumento versatile per le applicazioni di screening, in cui i dati longitudinali ad alta risoluzione sono essenziali per valutare l'efficacia dei farmaci e il comportamento cellulare in condizioni fisiologicamente rilevanti14,18. Combinando queste innovazioni tecniche, SPOT affronta i limiti critici dei tradizionali sistemi di coltura 3D.
Questo protocollo fornisce una guida completa per la fabbricazione di componenti SPOT, l'assemblaggio di piastre e i metodi di semina per colture di organoidi 3D robuste e riproducibili. Include istruzioni dettagliate per la semina manuale su piastra utilizzando una micropipetta e flussi di lavoro di semina automatizzati con un gestore di liquidi, che supporta sia il formato a 96 che a 384 pozzetti. Inoltre, questo protocollo delinea le misure essenziali di controllo della qualità, come la verifica della distribuzione uniforme del gel e dell'integrità dello scaffold, per mantenere elevati standard sperimentali. Vengono inoltre fornite strategie di risoluzione dei problemi per affrontare problemi comuni, come l'infiltrazione incompleta di gel, l'evaporazione durante la semina e il distacco dell'impalcatura, fornendo ai ricercatori soluzioni pratiche per ottimizzare i loro flussi di lavoro e ottenere risultati affidabili.
SPOT è progettato per colmare le lacune che i saggi tradizionali degli organoidi devono affrontare, comprese le sfide relative all'esecuzione dei saggi e al cambio dei terreni, preservando l'integrità del gel 10,11,12,13. L'obiettivo generale di questo metodo è quello di produrre una piattaforma supportata da scaffold che supporti la coltura di organoidi per un periodo di 12 giorni. Inoltre, questo metodo copre anche la generazione di array di tessuti in SPOT attraverso la semina manuale o assistita dal gestore di liquidi per consentire agli utenti di eseguire qualsiasi perturbazione a valle, compresi i saggi IC50 dei farmaci e lo screening di piccole molecole.

<table><tbody><tr><td>Provette PCR da 0,2 ml (strisce da 8)&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>72.985.002</td><td></td></tr><tr><td>Provetta da centrifuga da 1,5 ml</td><td>FroggaBio</td><td>LMCT1.7B</td><td></td></tr><tr><td>1000-&mu; L puntali per pipette</td><td>Eclissi</td><td>4-1019-260-000</td><td></td></tr><tr><td>Pipette sierologiche da 10 mL</td><td>FroggaBio</td><td>394010</td><td></td></tr><tr><td>Siringa da 10 ml</td><td>BD, Canada</td><td>302995</td><td></td></tr><tr><td>10x Medium essenziale minimo (MEM 10x)</td><td>Gibco</td><td>11430030</td><td></td></tr><tr><td>Piatto da 150 mm</td><td>Corning</td><td>430599</td><td></td></tr><tr><td>Puntali di erogazione calibro 16 con connessione Luer lock</td><td>McMaster-Carr, Illinois, Stati Uniti</td><td>Codice 6699A2</td><td></td></tr><tr><td>20&micro; L rack per puntali filtranti</td><td>Opentrons</td><td>999-00099</td><td></td></tr><tr><td>200&micro; L rack per puntali filtranti</td><td>Opentrons</td><td>999-00081</td><td></td></tr><tr><td>200-&mu; L puntali per pipette</td><td>Eclissi</td><td>4-1030-260-000</td><td></td></tr><tr><td>Puntali di erogazione calibro 20 con connessione Luer lock</td><td>McMaster-Carr, Illinois, Stati Uniti</td><td>Codice 6699A4</td><td></td></tr><tr><td>Piastra a 384 pozzetti senza pozzetto (nera)</td><td>Greiner</td><td>82051-544</td><td></td></tr><tr><td>Siringa da 3 ml&nbsp;</td><td>BD, Canada</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>Provetta da centrifuga conica in polipropilene da 50 mL</td><td>VWR</td><td>CA21008-940</td><td></td></tr><tr><td>Provetta da centrifuga conica in polipropilene da 50 mL</td><td>VWR</td><td>CA21008-940</td><td></td></tr><tr><td>Piastra a 96 pozzetti senza pozzetti (nera)</td><td>Greiner</td><td>82050-714</td><td></td></tr><tr><td>Acetone</td><td>Fisher Scientifico</td><td>A18-1</td><td></td></tr><tr><td>Bilancia analitica</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Estensione AxiDraw per Inkscape (https://wiki.evilmadscientist.com/Axidraw_Software_Installation)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>API Python di AxiDraw (https://axidraw.com/doc/py_api/#installation)&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>AxiDraw V3 Macchina per scrivere e disegnare personale ad alte prestazioni</td><td>Scienziati pazzi malvagi, Stati Uniti</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Collagene bovino (PureCol 3 mg/ml)</td><td>BioMatrix avanzato</td><td>5005</td><td></td></tr><tr><td>Linea cellulare di scelta</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Cavalletto a clip (incluso nella confezione AxiDraw V3)</td><td>Scienziati pazzi malvagi, Stati Uniti</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Terreni colturali di scelta</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Nastro di protezione antisporco</td><td>3M</td><td>6851 PN36851</td><td></td></tr><tr><td>Nastro biadesivo poliacrilico (800 mm x 1200 mm)</td><td>Ricerca adesiva, ARcare</td><td>Codice 90106NB</td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale bovino (FBS)</td><td>Gibco</td><td>12483-020</td><td></td></tr><tr><td>Filtri per tè Finum XL&nbsp;</td><td>Riensch & Held GmbH & Co. KG, Amburgo, Germania</td><td>420.69.00</td><td></td></tr><tr><td>Tappi piatti per provette PCR da 0,2 ml (strisce da 8)</td><td>Sarstedt</td><td>65.989.002</td><td></td></tr><tr><td>Morsetti a molla in plastica per impieghi gravosi</td><td>BENCHMARK</td><td>1024-554</td><td></td></tr><tr><td>Modulo HEPA &ndash; Modello 110-130V 60Hz</td><td>Opentrons</td><td>999-00109</td><td></td></tr><tr><td>Impacco di ghiaccio (congelato, 1400 mm x 1800 mm)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Software Inkscape</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Taglio laser</td><td>Sistema laser universale</td><td>VLS3.75</td><td></td></tr><tr><td>Tubo miniaturizzato in acetato di etile vinile (EVA) con diametro esterno di 0,07 pollici</td><td>McMaster-Carr, Illinois, Stati Uniti</td><td>1883T3</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta elettronica multicanale P20 (Gen2)</td><td>Opentrons</td><td>999-00005</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta elettronica multicanale P300 (Gen2)</td><td>Opentrons</td><td>999-00006</td><td></td></tr><tr><td>Smalto per unghie</td><td>Sally Hansen</td><td>SBS-006861</td><td>Opzionale, per la pigmentazione dell'inchiostro PMMA</td></tr><tr><td>Opentrons OT-2</td><td>Opentrons</td><td>999-00111</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta P1000</td><td>Gilson</td><td>FA10006M</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta a 8 canali P200</td><td>Gilson</td><td>F144072</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta P200</td><td>Gilson</td><td>FA10005M</td><td></td></tr><tr><td>Asciugamani di carta</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Azienda Bemis, Inc.</td><td>52859-079</td><td></td></tr><tr><td>Carta pergamena&nbsp; &nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Pipette Pasteur</td><td>VWR</td><td>14672-380</td><td></td></tr><tr><td>Penicillina-streptomicina (P/S)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>Poli(metacrilato di metile) (PMMA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>182230</td><td></td></tr><tr><td>Pellicola in policarbonato (760 mm x 1300 mm)</td><td>McMaster-Carr</td><td>Codice 85585K102</td><td></td></tr><tr><td>Polidimetilsilossano monomero e reticolante (PDMS, 1500 mm x 2700 mm)</td><td>Adesivi Ellsworth</td><td>4019862</td><td></td></tr><tr><td>Coltello di precisione</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Supporto acrilico rigido (dimensioni adattate al fondo della piastra a pozzetti)</td><td>McMaster-Carr</td><td>Codice 8560K239</td><td></td></tr><tr><td>Supporto in cartone rigido</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Righello</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Forbici&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Bicarbonato di sodio (0,8 M in acqua distillata)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S6014</td><td></td></tr><tr><td>Deck di temperatura con blocchi di alluminio (Gen2)</td><td>Opentrons</td><td>999-00097</td><td></td></tr><tr><td>Ruota di tracciamento&nbsp;</td><td>HEEPDD (Amazon)</td><td>B07YQWB284</td><td></td></tr><tr><td>Nastro trasparente&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Tripan blu</td><td>Gibco</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>Pinzetta</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Miscelatore a vortice&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr></tbody></table>

produzione riproducibile di spot come piattaforma di coltura basata su scaffold ad alta produttività

Reproducible Manufacturing of SPOT as a High-throughput Scaffold-based Culture Platform

Il modello in PMMA dell'impalcatura di carta funge da barriera fisica per impedire lo scambio di contenuti tra i pozzi. Questo design è fondamentale per garantire che i pozzetti adiacenti rimangano chimicamente e biologicamente isolati, impedendo la diffusione involontaria di terreni, farmaci, fattori secreti o persino cellule14. L'incorporazione del PMMA consente una compartimentazione precisa, rendendo SPOT una piattaforma affidabile per lo screening ad alto rendimento e gli studi di co-coltura ...

Produzione riproducibile di SPOT come piattaforma di coltura basata su scaffold ad alta produttività

Patient-derived organoids (PDOs) are becoming increasingly used in the field of cancer research to model tumors. They combine the benefits of in vivo and ...

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In passato in molti sistemi di coltura in vitro - principalmente colture monostrato - spesso sofferto lo svantaggio che le cellule differenziate primarie ha avuto un relativamente breve durata e de-differenziato durante cultura. Come conseguenza, la maggior parte del loro organo-specifiche funzioni sono state perse rapidamente. Pertanto, al fine di riprodurre condizioni migliori per queste cellule in vitro, le modifiche e gli adattamenti sono stati fatti per colture monostrato convenzionale.

Intervista: Bioreattori e nobilitati-Modified 3D-Ponteggi per la ricerca sulle cellule staminali

Un elevato throughput, piattaforma automatizzata di sviluppo delle cellule linea di produzione per la produzione di proteine ​​terapeutiche è descritto. Implementazione di Cell BD FACS sorter Aria, CloneSelect Imager e TECAN Libertà sistema di movimentazione EVO liquido ha dimostrato capacità di elaborazione significativamente aumentata in linea con lo sviluppo delle cellule migliore qualità linea cellulare e alta riproducibilità.

A High-throughput piattaforma automatica per lo sviluppo di linee cellulari di produzione per Therapeutics Proteine

I protocolli descritti consentono ai laboratori di eseguire colture di cellule staminali scalabili e aderenti ad alta produttività con un costo minimo di manodopera, esperienza e investimento in attrezzature utilizzando un robot programmabile per la manipolazione dei liquidi e piastre da 96 pozzetti.  Le iPSC sono passate più di 20 volte su questo sistema, hanno mantenuto la pluripotenza, cariotipi normali e si sono differenziate in cardiomiociti.

Scalabile piastra a 96 pozzetti Based iPSC cultura e di produzione utilizzando un sistema robotico Liquid Handling

Questo articolo descrive la metodologia dettagliata per preparare una matrice Multiplexed artificiale microambiente cellulare (MACME) per manipolazione di alto-rendimento di fisica e chimica di stecche che imita in vivo cellulare microambienti e a identificare l'ambiente cellulare ottima per le cellule staminali pluripotenti umane (hPSCs) con l'analisi di singole cellule.

Fabbricazione di una matrice di multiplex artificiale microambiente cellulare

Questo protocollo funge da tutorial completo per la miscelazione standardizzata e riproducibile di materiali viscosi con una nuova tecnologia di automazione open source. Vengono fornite istruzioni dettagliate sul funzionamento di una workstation open source di nuova concezione, sull'utilizzo di un progettista di protocolli open source e sulla convalida e verifica per identificare miscele riproducibili.

Una piattaforma tecnologica open source per la produzione di modelli di cultura 3D basati su idrogel in modo automatizzato e standardizzato

I tessuti cardiaci tridimensionali bioingegnerizzati utilizzando cardiomiociti derivati da cellule staminali sono emersi come modelli promettenti per lo studio in vitro del miocardio umano sano e malato, ricapitolando gli aspetti chiave della nicchia cardiaca nativa. Questo manoscritto descrive un protocollo per la fabbricazione e l'analisi di tessuti cardiaci ingegnerizzati ad alto contenuto generati da cardiomiociti derivati da cellule staminali pluripotenti indotte umane.

Progettazione di un bioreattore per migliorare l'acquisizione dei dati e modellare la produttività dei tessuti cardiaci ingegnerizzati

Questo documento presenta un protocollo di fabbricazione per un nuovo tipo di substrato di coltura con centinaia di microcontenitori per mm2, in cui gli organoidi possono essere coltivati e osservati utilizzando la microscopia ad alta risoluzione. Anche i protocolli di semina cellulare e immunocolorazione sono dettagliati.

Una piattaforma ad alto rendimento per la coltura e l'imaging 3D di organoidi

Qui presentiamo un protocollo per un sistema di coltura cellulare automatizzato. Questo sistema di coltura automatizzato riduce il lavoro e avvantaggia gli utenti, compresi i ricercatori che non hanno familiarità con la manipolazione delle cellule staminali pluripotenti indotte (iPS), dal mantenimento delle cellule iPS alla differenziazione in vari tipi di cellule.

Un sistema di coltura automatizzato per il mantenimento e la differenziazione di cellule staminali pluripotenti indotte dall'uomo

Questo protocollo presenta un flusso di lavoro standard ad alta produttività per lo screening dei microrganismi industriali. Consiste nella costruzione di una libreria mutante tramite mutagenesi ARTP, nell'esecuzione di screening positivo delle gocce con microfluidica automatizzata, e successivamente nella verifica dei risultati. L'affidabilità del flusso di lavoro è stata convalidata tramite lo screening di ceppi ad alta resa di B. coagulans .

Screening ad alta produttività dei mutanti di Bacillo coagulante iperproduttore di acido lattico L-lattico utilizzando una piattaforma microfluidica automatica a gocce

Tradizionale, bidimensionale tecniche di coltura cellulare spesso sfociano in caratteristiche alterate rispetto ai marcatori di differenziazione, citochine e fattori di crescita. Tridimensionale di coltura cellulare nel sistema delle cellule di rotazione cultura (CCR) ristabilisce l'espressione di molti di questi fattori, come illustrato qui con una linea di cellule extravilloso trofoblasto.

Rotazione Cultura sistemi cellulari per colture cellulari umane: cellule del trofoblasto umano come modello

Scopri la produzione della piattaforma SPOT per colture su scaffold ad alta produttività in formato 96 e 384 pozzetti. Questo metodo automatizzato migliora i flussi di lavoro per lo screening farmacologico e la modellazione avanzata delle malattie.

Produzione riproducibile di SPOT come piattaforma di coltura basata su scaffold ad alta produttività

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