Name: Visualizzazione precisa dei recettori dellinsulina A e B nel cervello murino con un test di ibridazione in situ dellRNA (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 34 s
Description: Scopri l'ibridazione in situ Duplex per mappare i recettori dell'insulina IR-A e IR-B nel plesso corioideo murino. Questo metodo ad alta risoluzione rivela pattern di espressione specifici per isoforma e apre nuove prospettive per terapie neurologiche mirate.

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<ol><li>Häring, H. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+insulin+receptor%3A+signalling+mechanism+and+contribution+to+the+pathogenesis+of+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">The insulin receptor: signalling mechanism and contribution to the pathogenesis of insulin resistance.</a> Diabetologia. 34 (12), 848-861 (1991).</li>
<li>Benecke, H., Flier, J. S., Moller, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternatively+spliced+variants+of+the+insulin+receptor+protein%3A+expression+in+normal+and+diabetic+human+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Alternatively spliced variants of the insulin receptor protein: expression in normal and diabetic human tissues.</a> J Clin Invest. 89 (6), 2066-2070 (1992).</li>
<li>Vella, V., Malaguarnera, R., Nicolosi, M. L., Morrione, A., Belfiore, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin%2FIGF+signalling+and+discoidin+domain+receptors%3A+an+emerging+functional+connection%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta+Mol+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Insulin/IGF signalling and discoidin domain receptors: an emerging functional connection.</a> Biochim Biophys Acta Mol Cell Res. 1866 (11), 118522(2019).</li>
<li>Galal, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+receptor+isoforms+and+insulin+growth+factor-like+receptors%3A+implications+in+cell+signaling%2C+carcinogenesis%2C+and+chemoresistance%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Insulin receptor isoforms and insulin growth factor-like receptors: implications in cell signaling, carcinogenesis, and chemoresistance.</a> Int J Mol Sci. 24 (19), 15006(2023).</li>
<li>Starks, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+resistance+is+associated+with+higher+cerebrospinal+fluid+tau+levels+in+asymptomatic+APOE%C9%9B4+carriers%5BTitle%5D)+AND+%22J+Alzheimers+Dis%22%5BJournal%5D)">Insulin resistance is associated with higher cerebrospinal fluid tau levels in asymptomatic APOEɛ4 carriers.</a> J Alzheimers Dis. 46 (2), 525-533 (2015).</li>
<li>Belfiore, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+receptor+isoforms+in+physiology+and+disease%3A+an+updated+view%5BTitle%5D)+AND+%22Endocr+Rev%22%5BJournal%5D)">Insulin receptor isoforms in physiology and disease: an updated view.</a> Endocr Rev. 38 (5), 379-431 (2017).</li>
<li>Wang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNAscope%3A+a+novel+in+situ+RNA+analysis+platform+for+formalin-fixed%2C+paraffin-embedded+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Diagn%22%5BJournal%5D)">RNAscope: a novel in situ RNA analysis platform for formalin-fixed, paraffin-embedded tissues.</a> J Mol Diagn. 14 (1), 22-29 (2012).</li>
<li>BaseScope assays. , Advanced Cell Diagnostics, Inc. 
 <a target="_blank" href="https://acdbio.com/basescope-duplex-assay">https://acdbio.com/basescope-duplex-assay</a> (2025).</li>
<li>Dani, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cellular+and+spatial+map+of+the+choroid+plexus+across+brain+ventricles+and+ages%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A cellular and spatial map of the choroid plexus across brain ventricles and ages.</a> Cell. 184 (11), 3056-3074.e21 (2021).</li>
<li>Schulingkamp, R. J., Pagano, T. C., Hung, D., Raffa, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+receptors+and+insulin+action+in+the+brain%3A+review+and+clinical+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Biobehav+Rev%22%5BJournal%5D)">Insulin receptors and insulin action in the brain: review and clinical implications.</a> Neurosci Biobehav Rev. 24 (8), 855-872 (2000).</li>
<li>Milstein, J. L., Ferris, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+brain+as+an+insulin-sensitive+metabolic+organ%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Metab%22%5BJournal%5D)">The brain as an insulin-sensitive metabolic organ.</a> Mol Metab. 52, 101234(2021).</li>
<li>Moruzzi, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-specific+expression+of+insulin+receptor+isoforms+in+obesity%2Ftype+2+diabetes+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Tissue-specific expression of insulin receptor isoforms in obesity/type 2 diabetes mouse models.</a> J Cell Mol Med. 25 (10), 4800-4813 (2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Acqua di ammonio</td><td>Scienza del microscopio elettronico&nbsp;</td><td>Codice 26754-4A</td><td></td></tr><tr><td>Kit di reagenti per la rilevazione BaseScope Dulplex</td><td>ACD Bio</td><td>323810</td><td></td></tr><tr><td>BaseScope Dulplex Duplex Sonda a Controllo Positivo - Mouse (mm)-C1-PPIB-1ZZ/C2-POLR2A-1ZZ</td><td>ACD Bio</td><td>700121</td><td></td></tr><tr><td>Sonda a controllo positivo duplex BaseScope Dulplex-C1-DAPB-1ZZ/C2-DAPB-1ZZ</td><td>ACD Bio</td><td>700141</td><td></td></tr><tr><td>Ematossilina I di Gill</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>GHS132-1L</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo secondario anti-coniglio di capra IgG (H+L) altamente adsorbito, Alexa Fluor Plus 488</td><td>Invitrogen</td><td>Codice: A32731</td><td></td></tr><tr><td>HybEZ OVEN, teglia, griglia e teglia di lavaggio</td><td>ACD Bio</td><td>321721, 310012, 321716, 321717</td><td></td></tr><tr><td>Penna barriera idrofobica ImmEdge</td><td>Laboratorio Vettoriale</td><td>H-4000</td><td></td></tr><tr><td>Sonde INSR isoforma A e B: BA-Mm-Insr-tv1-E10E11, BA-Mm-Insr-tv2-E11E12-C2</td><td>ACD Bio</td><td>717411, 717421-C2</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo del recettore dell'insulina</td><td>Segnalazione cellulare&nbsp;</td><td>23413</td><td></td></tr><tr><td>RNAscope 10x Target Retrival</td><td>ACD Bio</td><td>322000</td><td></td></tr><tr><td>RNAscope Perossido di idrogeno, proteasi Plus</td><td>ACD Bio</td><td>322381</td><td></td></tr><tr><td>Citrato salino-sodio (SSC) 20x</td><td>Fisher Scientifico</td><td>BP1325-1</td><td></td></tr><tr><td>Vetrini SuperFrost Plus</td><td>Fisher Scientifico</td><td>12-550-18</td><td></td></tr><tr><td>Supporto di montaggio permanente VectaMount</td><td>Laboratorio Vettoriale</td><td>H-5000</td><td></td></tr></tbody></table>

visualizzazione precisa dei recettori dell'insulina a e b nel cervello murino con un test di ibridazione in situ dell'rna

Precise Visualization of Insulin Receptors A and B in Murine Brain with an RNA In Situ Hybridization Assay

Il recettore dell'insulina (IR) è un recettore tirosin-chinasico transmembrana composto da due subunità α extracellulari e due β-subunità transmembrana, che formano un eterotetramero funzionale. Le subunità α mediano il legame con l'insulina, mentre le subunità β possiedono un'attività tirosin-chinasica intrinseca che avvia la segnalazione a valle. Lo splicing alternativo dell'mRNA IR dell'esone 11 genera due isoforme dell'IR, IR-A e IR-B. In quanto tale, IR-B include un segmento di 12-am...

Visualizzazione precisa dei recettori dell'insulina A e B nel cervello murino con un test di ibridazione in situ dell'RNA

Insulin receptors (IRs) are widely expressed across all tissues and all cell types. It exists in two functionally distinct isoforms -- IR-A and IR-B -- ...

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Neuroscience

Neuroscienze

Questo protocollo è utilizzato con successo per rilevare quantitativamente i livelli e dei modelli spaziali di espressione di mRNA in diversi tipi di tessuto in tutta specie di vertebrati. Il metodo può rilevare trascrizioni poco abbondanti e permette l'elaborazione di centinaia di diapositive simultaneamente. Vi presentiamo questo protocollo con profilo di espressione di aviaria formazione del cervello dell'embrione come esempio.

Radioattivo In situ Ibridazione per il rilevamento Diversi schemi di espressione genica nei tessuti

Questo video mostra il rilevamento della sintesi dell'RNA del recettore della serotonina utilizzando sonde oligonucleotidiche nel tessuto cerebrale di ratto affetto da sindrome serotoninergica. Il protocollo include il pretrattamento tissutale, l'ibridazione della sonda e il rilevamento enzimatico per visualizzare e quantificare l'espressione dell'RNA del recettore della serotonina al microscopio.

Ibridazione in situ mediante sonde oligonucleotidiche per studiare l'espressione dell'RNA in sezioni cerebrali di ratto

Fonte: Baleriola, J., et. al., Rilevamento di mRNA localizzati assonalmente in sezioni cerebrali utilizzando l'ibridazione in situ ad alta risoluzione.  J. Vis. Exp. (2015)Questo video dimostra il rilevamento dell'mRNA all'interno degli assoni colinergici in fette fisse di ippocampo di topo utilizzando l'ibridazione fluorescente in situ e la colorazione degli anticorpi. La microscopia a fluorescenza rivela la localizzazione spaziale degli mRNA marcati con sonda e della colina acetiltransferasi...

Immunocolorazione dei neuroni in fette di cervello di topo dopo ibridazione in situ a fluorescenza

L'ibridazione in situ dell'RNA (ISH) consente la visualizzazione degli RNA nelle cellule e nei tessuti. Qui mostriamo come la combinazione di RNAscope ISH con immunoistochimica o coloranti istologici possa essere utilizzata con successo per rilevare mRNA localizzati negli assoni in sezioni di cervelli di topo e umani.

Rilevazione di assoni localizzato mRNA nelle sezioni del cervello Utilizzando ad alta risoluzione<em&gt; In Situ</em&gt; Ibridazione

Localizzare l'espressione genica in specifici tipi di cellule può essere difficile a causa della mancanza di anticorpi specifici. Qui descriviamo un protocollo per la tripla rilevazione simultanea dell'espressione genica combinando l'ibridazione in situ a doppia fluorescenza con l'immunocolorazione.

La combinazione di doppio Fluorescenza<em&gt; In Situ</em&gt; Ibridazione con Immunolabelling per il rilevamento della Manifestazione di tre geni nel cervello di topo Sezioni

È descritto un in situ (ISH) protocollo di ibridazione che utilizza brevi oligonucleotidi antisenso per rilevare modelli d'impionbatura alternativa pre-mRNA nelle sezioni del cervello del mouse.

Analisi quantitativa di impionbatura alternativo Pre-mRNA nelle sezioni del cervello del Mouse usando analisi di RNA In Situ di ibridazione

Nuove tecniche di sgombero dei tessuti immunostaining come l'ultima imaging 3D di organi autorizzati dai solventi consentono la visualizzazione 3D dell'infezione cerebrale da virus del virus della rabbia e del suo complesso ambiente cellulare. Le fette spesse di tessuto cerebrale etichettate con anticorpi sono rese otticamente trasparenti per aumentare la profondità di imaging e consentire l'analisi 3D mediante microscopia a scansione laser confocale.

Imaging 3D ad alta risoluzione dell'infezione da virus della rabbia nel tessuto cerebrale con la rimozione del solvente

Qui, presentiamo un protocollo che utilizza coloranti Near-Infrared in combinazione con immunoistochimica e scansione ad alta risoluzione per analisi proteine nelle regioni cerebrali.

Utilizzo della fluorescenza Near-Infrared e scansione ad alta risoluzione per misurare l'espressione proteica nel cervello del roditore

Questo protocollo descrive un flusso di lavoro passo-passo per la costaintura immunofluorescente di IBA1 e TMEM119, oltre all'analisi della densità microgliale, della distribuzione e della morfologia, nonché dell'infiltrazione delle cellule mieloidi periferiche nel tessuto cerebrale del topo.

Immunofluorescenza Colorazione utilizzando IBA1 e TMEM119 per densità microgliale, morfologia e infiltrazione delle cellule mieloidi periferiche nel cervello del mouse

Questo protocollo descrive un metodo per combinare l'ibridazione in situ a fluorescenza (FISH) e l'immunoistochimica a fluorescenza (IHC) in sezioni cerebrali di topo sia fresche congelate che fisse, con l'obiettivo di ottenere FISH multimarca e segnale IHC di fluorescenza. IHC ha preso di mira le proteine citoplasmatiche e attaccate alla membrana.

Combinazione dell'ibridazione in situ a fluorescenza multiplex con immunoistochimica fluorescente su sezioni cerebrali di topo fresche, congelate o fisse

Scopri l'ibridazione in situ Duplex per mappare i recettori dell'insulina IR-A e IR-B nel plesso corioideo murino. Questo metodo ad alta risoluzione rivela pattern di espressione specifici per isoforma e apre nuove prospettive per terapie neurologiche mirate.

Visualizzazione precisa dei recettori dell'insulina A e B nel cervello murino con un test di ibridazione in situ dell'RNA

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