Linfodenectomia renale bilaterale murina

Studiamo il traffico delle cellule immunitarie dal linfonodo renale al rene e dell'antigene renale verso il linfonodo che drena. Il nostro approccio chirurgico offre il vantaggio unico di poter selettivamente interrompere i linfonodi renali lasciando tutti gli altri linfonodi intatti in un modello di sopravvivenza a lungo termine ben tollerato. Ora che questo modello è stato sviluppato, possiamo esplorare i contributi delle risposte dei linfonodi renali e delle risposte immunitarie e come la rimozione di questi linfonodi contribuisca alla lesione renale correlata al sistema immunitario.

Per cominciare, posiziona l'animale anestetizzato sul tavolo operatorio e applica la pomata. Usa del nastro adesivo per fissare il braccio sinistro dell'animale in una direzione superiore e la coda in una direzione inferiore per creare una postura rilassata ma allungata. Rade il pelo e disinfetta l'area chirurgica tre volte.

Dopo aver confermato la profondità dell'anestesia con un pizzicolio al dito del piede, eseguire un'incisione obliqua di un centimetro attraverso la pelle appena sotto la milza, circa un centimetro sotto l'ultima costola. Utilizzando la dissezione contusiva, separare la pelle dalla parete addominale e toracica e identificare la milza all'interno dell'addome. Poi, eseguire un'incisione di un centimetro attraverso la muscolatura della parete addominale appena inferiore alla milza per entrare nella cavità peritoneale.

Identifica il rene sinistro come un organo liscio situato lungo la parete addominale posteriore appena sotto la milza. Utilizzando due pinze angolate, seziona in modo diretto dietro il rene sinistro per accedere al retroperitoneo e rifletti delicatamente il rene sinistro in direzione anteromediale. Individua il cuscinetto adiposo che circonda il linfonodo renale sinistro, che si trova dietro al rene e superiore ai vasi renali.

Identificare ed evitare la ghiandola surrenale situata superiormente, l'aorta posteriormente e la cisterna chili anteromedialmente. Utilizzando pinze a punta fine, seziona in modo diretto intorno alla capsula linfonodicale per separarla dai vasi adiacenti, fornendo una delicata controtensione con le pinze angolate. Usa pinze dritte con punta fine per ritrarre il linfonodo superiormente.

Poi usa forbici a punta fine per tagliare nettamente gli attacchi posteromediali. Esamina l'area per confermare l'emostasi. Successivamente, riporta il rene alla sua posizione anatomica normale.

Chiudi la parete addominale e poi la pelle usando una sutura monofilamento in polipropilene 6-0 in un punto di sutura scorrevole. Applica una colla chirurgica sterile per sigillare la ferita. Opzionalmente, per una migliore identificazione dei linfonodi renali, iniettare da 10 a 20 microlitri di colorante Evans sterile e filtrato in PBS in entrambi i cuscinetti posteriori del piede prima della linfadenectomia renale.

Entro cinque minuti dall'iniezione, il colorante raggiunge i linfonodi renali tramite drenaggio lungo il tratto linfatico iliaco. Riposiziona l'animale nella posizione del decubito laterale sinistro con il lato sinistro rivolto verso il basso. Usa del nastro adesivo per fissare il braccio destro dell'animale in una direzione superiore e la coda in una direzione inferiore per mantenere una postura rilassata ma allungata.

Ora, fai un'incisione cutanea obliqua di un centimetro appena sotto l'ultima costola, che sarà posizionata leggermente più in alto rispetto al lato sinistro. Con la dissezione contusiva, separare la pelle dalla parete addominale e toracica. Poi fai un'incisione di un centimetro attraverso la muscolatura della parete addominale per accedere alla cavità peritoneale.

Identifica il rene destro, che è un organo liscio situato lungo la parete addominale posteriore e appena sotto il fegato. Utilizzando due pinze angolate, seziona in modo diretto dietro il rene destro per entrare nello spazio retroperitoneale e riflettere il rene destro in direzione anteromediale. Identifica il cuscinetto adiposo che circonda il linfonodo renale destro, che si trova a posteriore al rene e sopra i vasi renali.

Identificare ed evitare la ghiandola surrenale situata sopra il linfonodo. Ora, usando una pinza a punta fine, seziona in modo diretto intorno alla capsula del linfonodo per separarla dai vasi vicini applicando una delicata controtrazione con pinze inclinate. Poi, con una pinza dritta a punta fine, tira i linfonodi verso l'alto e taglia nettamente gli attacchi posteromediali con forbici a punta fine.

Ispeziona l'area per assicurarti dell'emostasi. Infine, riporta il rene destro alla sua posizione anatomica. Chiudi la parete addominale e la pelle in due strati utilizzando una sutura monofilament in polipropilene 6-0 seguendo un pattern di corsa e applica una colla chirurgica sterile sul sito dell'incisione.

La citometria di flusso ha confermato l'estrazione riuscita dei linfonodi, in tutti e cinque i campioni di linfodenectomia renale sinistra e cinque destra, ciascuno con oltre il 50% di cellule vive positive a CD45, rispetto a meno del 2% nei controlli viscerali adiposi. La quantificazione delle cellule CD45-positive ha mostrato una differenza altamente significativa sia tra i campioni di linfadenectomia renale sinistra che destra rispetto al tessuto adiposo viscerale, senza differenze significative tra sinistro e destro.