Name: Produzione e utilizzo di stampi di agarosio personalizzabili per la coltura di follicoli ovarici di topo senza scaffold (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-24T13:10:00.000+00:00
Duration: 9 min 50 s
Description: Impara a coltivare follicoli ovarici di topo senza scaffold utilizzando stampi di agarosio personalizzabili e stampati in 3D. Questo metodo migliora la crescita follicolare e le percentuali di ovulazione rispetto alle tecniche tradizionali con idrogel.

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<table><tbody><tr><td><resistente>Materiali e Sostanze Chimiche</Resistente></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Tubi centrifughe in polistirene da 50 mL</td><td>Globe Scientific</td><td>941-11017-CS</td><td></td></tr><tr><td>Tubi microcentrifughe da 1,5 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>MCT-150</td><td>Per bloccare e conservare i media</td></tr><tr><td>Disco da 100 mm, non trattato</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-100D&nbsp;</td><td>Per realizzare e conservare microstampi di agarosio</td></tr><tr><td>100% etanolo</td><td>Mercedes Scientific</td><td>1200</td><td>Lavorazione dei tessuti</td></tr><tr><td>1000 & micro; L&nbsp; Punte per pipette, bassa ritenzione</td><td>MIDSCI</td><td>PR-1000BK</td><td>Consigli culturali&nbsp;</td></tr><tr><td>200 & micro; L&nbsp; Punte per pipette, bassa ritenzione</td><td>MIDSCI</td><td>PR-200BK</td><td>Consigli culturali&nbsp;</td></tr><tr><td>Piastra a 24 pozzi</td><td>Corning</td><td>353047</td><td>Cultura</td></tr><tr><td>Antenne da 35 mm</td><td>Falcone</td><td>351008</td><td>Isolare ovaie e incubare in mezzi enizzatici</td></tr><tr><td>95% etanolo</td><td>Mercedes Scientific</td><td>1210</td><td>Lavorazione dei tessuti</td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Hoefer</td><td>GR140</td><td>Micromodelli</td></tr><tr><td>Olio Minerale BioXtra, Olio Leggero, Adatto per la coltura di cellule embrionali di topo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5310-500ML</td><td>Utilizzato come agente biocompatibile per lo smoldaggio</td></tr><tr><td>Albumina Sieroica Bovina &nbsp;</td><td>MP Biomedici</td><td>103700</td><td>Media di crescita</td></tr><tr><td>Spolverini per la pulizia, 10 oz., confezione da 6</td><td>Deposito Uffici &nbsp;</td><td>110284</td><td>Aria compressa</td></tr><tr><td>Resina V4 trasparente 1 L</td><td>Formlabs, Inc</td><td>RS-F2-GPCL-04</td><td>Stampa 3D in resina</td></tr><tr><td>Becher Corning in plastica riutilizzabile a bassa forma da 100 mL, polipropilene, graduato</td><td>Corning</td><td>1000P-100</td><td>Becher per miscelare componenti in silicone & nbsp;</td></tr><tr><td>DNAse I</td><td>Qiagen</td><td>79254</td><td>Media enzimatici</td></tr><tr><td>Ecoflex 00-45 Quasi Libero</td><td>Smooth-On, Inc</td><td>B09M8Y9PTV</td><td>Materiale in silicone</td></tr><tr><td>F-12 + GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>31765-035</td><td>Media di crescita</td></tr><tr><td>Feto bovino fetale</td><td>Sigma</td><td>F-3385</td><td>Media di crescita</td></tr><tr><td>Siero Fetale Bovino (FBS)</td><td>Siero di picco</td><td>PS-FB2</td><td>Media di dissezione e media enzimatica, &nbsp; Media di Manutenzione e Supporto Media di maturazione</td></tr><tr><td>Fisherbrand&nbsp; Sacche di sterilizzazione</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-812-50&nbsp;</td><td>Sacche di sterilizzazione</td></tr><tr><td>Ormone follicolo-stimolante (FSH)</td><td>EMD Serono, Inc.</td><td>Solo Gonal-F Rx&nbsp;</td><td>Media di crescita e Media di maturazione</td></tr><tr><td>Gibco & nbsp; DPBS, calcio, magnesio</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-040-182&nbsp;</td><td>Soluzione salina tamponata fosfato di Dulbecco</td></tr><tr><td>Gonadotropina corionica umana (hCG)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C1063-1VL</td><td>Media di maturazione</td></tr><tr><td>Insulina-transferrina-selenio (ITS)</td><td>ThermoFisher</td><td>41400045</td><td>Media di crescita</td></tr><tr><td>Sonde molecolari di Invitrogen Rhodamine Phalloidin</td><td>Fisher Scientific</td><td>R415</td><td>Colorazione del citoscheletro dell'uovo</td></tr><tr><td>Piatti per la FIV</td><td>Thermo Scientific</td><td>150260</td><td>Isolare, selezionare e pre-equilibrare i follicoli</td></tr><tr><td>Leibovit'z 15 (L15)</td><td>Gibco</td><td>11415-064</td><td>Media di dissezione e dissezione Media enzimatici</td></tr><tr><td>Liberase</td><td>Sigma Aldrich</td><td>5401119001</td><td>Media enzimatici</td></tr><tr><td>MEM? + GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>32561-037</td><td>Media di Manutenzione, &nbsp; Media di crescita e Media di maturazione</td></tr><tr><td>Fattore di crescita epidermica del topo (EGF)</td><td>BD in Biologia</td><td>354010</td><td>Media di maturazione</td></tr><tr><td>Essiccatore Nalgene Garden Polycarbonate Classic Design</td><td>Thermo Scientific</td><td>5311-0250</td><td>Essiccatore a vuoto&nbsp;</td></tr><tr><td>Paraffina</td><td>Fisher Scientific</td><td>83-30</td><td>Lavorazione dei tessuti e lavorazione Incorporamento</td></tr><tr><td>Penicillina-streptomicina</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>Media di dissezione, mezzi enzimatici e Media di Manutenzione</td></tr><tr><td>Punte per spogliarelliste</td><td>Origio</td><td>MXL3-200</td><td>Cultura</td></tr><tr><td>Mezzo di montaggio antifade VECTASHIELD PLUS con DAPI</td><td>Laboratori Vector</td><td>H-2000</td><td>Colorazione del nucleo dell'uovo</td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Mercedes Scientific</td><td>9840</td><td>Lavorazione dei tessuti</td></tr><tr><td>&alpha;-Tubulina (11H10) Rabbit mAb (Alexa Fluor 488 Coniugato)</td><td>Tecnologia di segnalazione cellulare</td><td>5063S</td><td>Colorazione con tubulina dell'uovo</td></tr><tr><td><forte>Equipaggiamento</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Build Platform 2</td><td>Formlabs, Inc</td><td>BP-F3-02-01&nbsp;</td><td>Componente della stampante 3D</td></tr><tr><td>Dino-Lite Edge AF4915ZTL, USB 2.0</td><td>Dino-Lite</td><td>AF4915ZTL</td><td>Imager per l'impostazione timelapse</td></tr><tr><td>Forma 3 Serbatoio in resina V2.1&nbsp;</td><td>Formlabs, Inc</td><td>RT-F3-02-01</td><td>Componente della stampante 3D</td></tr><tr><td>Stampante 3D Form 3B+</td><td>Formlabs, Inc</td><td>F3B-P Stampante</td><td>Stampante 3D stereolitografia (SLA) di Formlabs</td></tr><tr><td>Cura della forma&nbsp;</td><td>Formlabs, Inc</td><td>FH-CU-01</td><td>Piattaforma di polimerizzazione &nbsp;</td></tr><tr><td>Lavaggio di forma</td><td>Formlabs, Inc</td><td>FH-WA-01</td><td>Piattaforma per il lavaggio</td></tr><tr><td>Bottiglia spray con vaporizzatore a pompa</td><td>VWR</td><td>0309-3005</td><td>Per applicare l'agente smoldante</td></tr><tr><td>Focatore/condensatore per luce per la serie Edge (esclusi i modelli T5, T8)</td><td>Dino-Lite</td><td>N3C-R</td><td>Componente dell'imager per l'impostazione del timelapse</td></tr><tr><td>Bundle Mount Holder che combina il rack RK-10 e l'estensione del braccio RK-10-EX</td><td>Dino-Lite</td><td>RK-10A</td><td>Componente dell'imager per l'impostazione del timelapse</td></tr><tr><td>Incorporatore di tessuti</td><td>Leica</td><td>HistoCore Arcadia</td><td>Per incorporare micromodelli</td></tr><tr><td>Processore di tessuti</td><td>Leica</td><td>TP1020</td><td>Per processare i microstampi</td></tr><tr><td>Incubatore Scuotente 211DS (Scuotendo Orbitale)</td><td>Labnet International</td><td>I-5211-DS</td><td>Incubare ovaie in mezzi enzimatici per il rilascio dei follicoli</td></tr><tr><td>Software&nbsp; </forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Autodesk Fusion</td><td>Autodesk, Inc</td><td></td><td>Software di progettazione assistita da computer (CAD). Autodesk offre accesso educativo gratuito tramite il programma Autodesk Education.</td></tr><tr><td>DinoCapture 3.0 versione 1.1.1.3&nbsp;</td><td>Dino-Lite</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>Istituti Nazionali di Salute</td><td></td><td>Analizzare immagini OCT e misurare i follicoli</td></tr><tr><td>PreForm</td><td>Formlabs, Inc</td><td></td><td>Software gratuito di preparazione alla stampa progettato per funzionare con le stampanti stereolitografia (SLA) di Formlabs.</td></tr></tbody></table>

produzione e utilizzo di stampi di agarosio personalizzabili per la coltura di follicoli ovarici di topo senza scaffold

Production and Use of Customizable Agarose Molds for Scaffold-Free Mouse Ovarian Follicle Culture

Produzione e utilizzo di stampi di agarosio personalizzabili per la coltura di follicoli ovarici di topo senza scaffold

The ovarian follicle is the functional unit of the ovary that produces hormones and gametes needed to sustain female reproductive function and health. The ...

production-use-customizable-agarose-molds-for-scaffold-free-mouse

Research

Ricerca

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia dello sviluppo

Un nuovo metodo per l'incapsulamento follicolo ovarico in una rete di fibrina-alginato 3D compenetrano è descritto. Questo sistema combina un sostegno strutturale con degradazione proteolitica per sostenere lo sviluppo dei follicoli immaturi per la produzione di ovociti maturi. Questo metodo può essere applicato agli aggregati di coltura cellulare per mantenere la cellula-cellula contatti senza limitare l'espansione.

Un metodo per l&#39;incapsulamento follicolo ovarico e la cultura in un proteoliticamente degradabile 3 Sistema dimensionale

Coltura di cellule normali in loro contesto tridimensionale rappresenta un metodo alternativo per studiare eventi precoci necessari per la trasformazione cellulare e tumorigenesi. Questo metodo è utilizzato per la coltivazione ovarici normali e cellule oviductal per studiare eventi precoci nella formazione del cancro ovarico.

Idrogeli di alginato per tridimensionale Cultura Organo di ovaie e tube

Questo protocollo descrive la coltura primaria / co-coltura di topo tessuto ovarico, con ovaie di topi neonati e singoli follicoli ovarici di topi prepuberi. Le tecniche di coltura supportano sviluppo in modo altamente fisiologico, consentendo studio dell'effetto di agenti estrinseci sulla ovaio, e di interazioni tra follicoli ovarici.

Cultura e co-coltura di mouse ovaie e follicoli ovarici

Questo protocollo descrive una piattaforma per la realizzazione di anelli di tessuto auto-assemblati usando una muffa di plastica su misura 3D-stampato di dimensioni variabili. PDMS negativi sono curati nello stampo 3D-stampato; quindi dell'agarosi sono nel cast i negativi PDMS polimerizzati. Le cellule sono seminate nei pozzetti risultante dell'agarosi dove si aggregano in anelli di tessuto.

Fabbricazione di pozzi di agarosio personalizzato per la semina delle cellule e tessuto anello auto-assemblaggio utilizzando stampi 3D-stampato

Qui presentati sono presentati due protocolli per l'incapsulamento di oociti di porcina in condizioni di coltura 3D. Nel primo, i complessi cumuli-oocici (COC) sono incapsulati in perline fibrin-alginate. Nel secondo, sono racchiusi con particelle di polvere di propilene di etilene fluorrinate (microbioreattori). Entrambi i sistemi garantiscono condizioni ottimali per mantenere la propria organizzazione 3D.

Idrogel alginato degradati proteolylylylyd e microbioreattori idrofobici per l'incapsulamento dell'Oocito Porcine

Qui vengono descritti quattro metodi per generare organoidi testicolari da cellule testicolari murine neonatale primarie, cioè matrice extracellulare (ECM) e ambienti di coltura 2D e 3D senza ECM. Queste tecniche hanno molteplici applicazioni di ricerca e sono particolarmente utili per studiare lo sviluppo testicolare e la fisiologia in vitro.

Generazione extra di organoidi testicolari murini basati su matrice cellulare ed extra cellulare

Il presente protocollo descrive una tecnica per produrre sferoidi tissutali su larga scala in modo economico utilizzando un dispositivo simile a un timbro stampato in 3D.

Generazione di sferoidi tissutali tramite un dispositivo simile a un timbro stampato in 3D

Questo protocollo descrive un nuovo modello di coltura tridimensionale (3D) che utilizza un idrogel di acido ialuronico legato alla tiramina per incapsulare e coltivare follicoli preantrali dall'ovaio di topo. Descriviamo anche due approcci alla crioconservazione del follicolo ovarico mediante vitrificazione.

Applicazione di un nuovo idrogel di acido ialuronico per la coltura tridimensionale dei follicoli e metodologia per la crioconservazione dei follicoli ovarici di topo

Questo studio presenta una metodologia economica ed efficiente per generare strutture cellulari 3D utilizzando un sistema basato su timbri per creare micropozzetti in stampi di agarosio. Il sistema promuove la formazione di sferoidi/organoidi uniformi, migliorando così le interazioni cellulari. Questo approccio riduce la variabilità sperimentale e supporta le applicazioni nei test sui farmaci e nell'ingegneria tissutale.

Generazione di sferoidi/organoidi tridimensionali da colture cellulari bidimensionali utilizzando un nuovo dispositivo di timbro

Descriviamo metodi per isolare cellule somatiche ovariche di topo da una frazione arricchita di stroma dell'ovaio e per generare organoidi somatici ovaricos di topo utilizzando un approccio senza impalcatura.

Indagine del microambiente ovarico: metodi per l'isolamento, la coltura 2D e la coltura organoide delle cellule somatiche ovariche del topo

Impara a coltivare follicoli ovarici di topo senza scaffold utilizzando stampi di agarosio personalizzabili e stampati in 3D. Questo metodo migliora la crescita follicolare e le percentuali di ovulazione rispetto alle tecniche tradizionali con idrogel.

Produzione e utilizzo di stampi di agarosio personalizzabili per la coltura di follicoli ovarici di topo senza scaffold

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