Mappatura spaziale migliorata degli strati muscolari gastrici del topo utilizzando una tecnica modificata dello Swiss Roll

La nostra ricerca si concentra sul miglioramento del modo in cui prepariamo e analizziamo lo stomaco delicato per l'imaging di esperienza. Abbiamo adattato la Tecnica Swiss Roll originariamente sviluppata per l'intestino murino in modo che tutte le principali regioni gastriche, inclusi il fondo di fondo, il corpo e l'antrum, possano essere incorporate insieme in un'unica sezione criogenica. Questo ci permette di visualizzare la struttura dello stomaco e la composizione cellulare fianco a fianco, mantenendo un orientamento spaziale accurato e un'alta qualità dell'immagine.

Lo stomaco è un organo complesso con tessuti delicati. Piccoli errori possono danneggiare le cellule o distorcerne la composizione, rendendo incoerenti l'imaging ad alta risoluzione e la colorazione immunitaria. La nostra tecnica Swiss roll risolve questo problema mantenendo tutte le regioni, inclusi duodeno ed esofago, intatte in un unico blocco criogenico, rendendo gli esperimenti più affidabili e riproducibili.

Per cominciare, usa forbici per tagliare lungo il mesenterio ventrale del duodeno e lo stomaco fino al perno al corpus. Utilizzando una pipetta di trasferimento riempita di PBS, elimina eventuali residui di cibo dal lumen gastrico. Allunga delicatamente la pancia aperta per ottenere un'orientazione piatta.

Fissa di nuovo il fazzoletto con i perni piatti dopo la breve fissazione. Usando delle forbici, ritaglia la pancia lungo il contorno tratteggiato per creare una forma uniforme adatta al rotolamento. Posiziona il tessuto gastrico ritagliato su carta filtrante inumidita con PBS.

Arrotola il fazzoletto in una configurazione Swiss Roll e fissalo inserendo uno stuzzicadenti al centro. Una volta arrotolato, inserire un ago calibro 30 per assicurarne la forma. Poi piega l'ago a 90 gradi per stabilizzare lo stomaco piegato.

Fissare il tessuto arrotolato nel paraformaldeide al 4% a quattro gradi Celsius per sei ore. Poi rimuovi delicatamente l'ago stabilizzante. Immergere il tessuto in un composto a temperatura di taglio ottimale utilizzando stampi di base usa e getta.

Poi congela la muffa su ghiaccio secco. Una volta completamente congelato, conserva la muffa a meno 80 gradi Celsius. Il nuovo metodo ha permesso l'inclusione del fondo di fondo, del corpus, dell'antrum, di una porzione dell'esofago e del duodeno all'interno di una singola sezione murina di rotolo svizzero gastrico.

La colorazione di ematossilina ed eosina del rotolo svizzero gastrico ha rivelato un'architettura ben conservata nel fondo di fondo, corpus, antrum, esofago e duodeno con strati chiaramente visibili di mucosa, submucosa e muscolore. La colorazione immunofluorescente ha mostrato l'espressione di KIT e ANO1 nelle cellule interstiziali di Cajal e l'espressione della beta tubulina tre nei neuroni enteici, confermando la conservazione cellulare nel rotolo svizzero gastrico. L'espressione di KIT è stata rilevata anche nelle cellule paneth e goblet nella mucosa gastrica, mentre ANO1 è stata fortemente espressa nelle cellule epiteliali colonnari fondiche.

L'espressione della beta tubulina 3 è stata osservata nelle cellule gastriche, endocrine e secretrici di muco, oltre che nei neuroni enterici. La colorazione con catena pesante miosina 11 ha confermato la presenza di cellule muscolari lisce e miofibroblasti nella mucosa gastrica, mentre la colorazione con E-cadherina ha mostrato cellule epiteliali e la colorazione KIT ha nuovamente segnato cellule interstiziali di Cajal. La tecnica della strada svizzera può far avanzare la ricerca sui cambiamenti regionali specifici nel tessuto gastrico.

A differenza degli approcci tradizionali che incorporano le regioni separatamente, la Tecnica Svizzera Roll processa tutte le regioni gastriche in condizioni identiche, risparmiando sia tempo che reagenti. Questo la rende una piattaforma pratica e scalabile per un'analisi completa del tessuto gastrico sia nella salute che nella malattia.