Name: Mappatura spaziale migliorata degli strati muscolari gastrici del topo utilizzando una tecnica modificata dello Swiss Roll (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-25T14:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 18 s
Description: Impara la tecnica Swiss Roll modificata per l'immunostaining dello stomaco intero nel topo. Questo metodo consente di visualizzare tutte le regioni gastriche in un'unica sezione criogenica mantenendo l'orientamento spaziale e la qualità dell'immagine per studi istologici avanzati.

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<ol><li>Chaudhry, S. R., Liman, M. N. P., Omole, A. E., Peterson, D. C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aChaudhry%2C+SR+%22Anatomy%2C+abdomen+and+pelvis%3A+Stomach%22">Anatomy, abdomen and pelvis: Stomach</a>. , StatPearls. (2025).</li>
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<li>Hayashi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperglycemia+increases+interstitial+cells+of+Cajal+via+MAPK1+and+MAPK3+signaling+to+ETV1+and+KIT%2C+leading+to+rapid+gastric+emptying%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Hyperglycemia increases interstitial cells of Cajal via MAPK1 and MAPK3 signaling to ETV1 and KIT, leading to rapid gastric emptying.</a> Gastroenterology. 153 (2), 521-535.e20 (2017).</li>
<li>Gao, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia-inducible+factor+1alpha+stabilization+restores+epigenetic+control+of+nitric+oxide+synthase+1+expression+and+reverses+gastroparesis+in+female+diabetic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Hypoxia-inducible factor 1alpha stabilization restores epigenetic control of nitric oxide synthase 1 expression and reverses gastroparesis in female diabetic mice.</a> Gastroenterology. 165 (6), 1458-1474 (2023).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>#5SF Pinza</td><td>STRUMENTI SCIENTIFICI DI FINE QUALITÀ</td><td>11252-00</td><td></td></tr><tr><td>albumina sierica bovina &nbsp;</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>A7906</td><td></td></tr><tr><td>Sorgente luminosa LED ColdVision MC-LS</td><td>SCHOTT</td><td>MC-LS</td><td></td></tr><tr><td>Software Confocal&nbsp;</td><td>Nikon</td><td>Nikon NIS-Elements Imaging Software</td><td></td></tr><tr><td>Cryoseal XYL</td><td>Epredida</td><td>9312-4</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (4',6-diamidino-2-fenilindolo, dilattato)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D3571</td><td></td></tr><tr><td>Vasi per la dissezione, grandi</td><td>Sistemi Viventi &nbsp; Strumentazione</td><td>SKU: DD-90</td><td></td></tr><tr><td>Anti-capra per asini AF647 pAb</td><td>Life Technologies</td><td>A21447</td><td>Lot: 1739289 RRID:AB_2535864</td></tr><tr><td>Anti-topo Donkey AF555 pAb</td><td>Life Technologies</td><td>A31570</td><td>Lotto: 1774719 RRID:AB_2536180</td></tr><tr><td>Anti-coniglio per asini AF488 pAb</td><td>Life Technologies</td><td>A21206</td><td>Lot: 2668665 RRID:AB_2535792</td></tr><tr><td>E-cadharina (diluizione 1:400)</td><td>BD in Biologia</td><td>610181</td><td>lotto: 25510 RRID:AB_397580</td></tr><tr><td>Eosina</td><td>ELITechGroup</td><td>$SS-071C</td><td></td></tr><tr><td>Pinze rivestite in epossidica</td><td>STRUMENTI SCIENTIFICI DI FINE QUALITÀ</td><td>11210-10</td><td></td></tr><tr><td>Etanolo</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>459828-4L</td><td></td></tr><tr><td>TUBO FLESSIBILE 1,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>22364111</td><td></td></tr><tr><td>Spugne di garza</td><td>Fisherscientific</td><td>22-362-178</td><td></td></tr><tr><td>Forbici Fine Indurite</td><td>STRUMENTI SCIENTIFICI DI FINE QUALITÀ</td><td>14090-09</td><td></td></tr><tr><td>Ematossilina</td><td>Epredia</td><td>7211</td><td></td></tr><tr><td>KIT (0.2 & micro; g/mL; diluizione 1:1000)</td><td>R& Sistemi D</td><td>AF1356</td><td>Lotto: IEO0217101 RRID: AB_354750</td></tr><tr><td>SPRAY SPRAY SPRAY SOLUZIONE PER LA PULIZIA DELLE LENTI DA 1OZ</td><td>Nikon</td><td>77013066</td><td></td></tr><tr><td>Vetro di copertura per microscopio</td><td>Fisher Scientific</td><td>12541016</td><td></td></tr><tr><td>Vetri per microscopio</td><td>CardinalHealth</td><td>M6133A</td><td></td></tr><tr><td>Puntini Minutien</td><td>STRUMENTI SCIENTIFICI DI FINE QUALITÀ</td><td>26002-20</td><td></td></tr><tr><td>MYH11 (diluizione 1:400)</td><td>Tecnologie biomediche</td><td>BT-562</td><td>RRID:AB_10013421</td></tr><tr><td>Smalto per unghie</td><td>COLORI PECCAMINOSI</td><td>7.33855E+11</td><td></td></tr><tr><td>Ago 30 G x 1/2 in. &nbsp;</td><td>BD in Biologia</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeide</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>158127-500G</td><td></td></tr><tr><td>Lame a filo singolo Personna</td><td>La Scaror Blade Co.</td><td>76247-652</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di blocco IgG per mouse ReadyProbes (30x)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>R37621</td><td>Lot: 3226230</td></tr><tr><td>Montante antifade SlowFade Diamond (Supporto di montaggio)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>S36972</td><td></td></tr><tr><td>Sistema di colorazione StainTray a 10 venature</td><td>Simport Scientific</td><td>M918-2</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio stereo 0,8x-5x</td><td>Nikon</td><td>SMZ645</td><td></td></tr><tr><td>Sucrosio&nbsp;</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>S9378-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Surface-Amps X-100 (Triton X)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>28314</td><td></td></tr><tr><td>TMEM16A (ANO1: diluizione 1:400)</td><td>Abcam</td><td>ab53212&nbsp;</td><td>Lotto: GP3295656-1 RRID: AB_883075</td></tr><tr><td>Pipetta di trasferimento</td><td>Falcon</td><td>357575</td><td></td></tr><tr><td>TUBB3 (diluizione 1:400)</td><td>Tecnologia di segnalazione cellulare</td><td>4466</td><td>Lotto: 5 RRID: AB_1904176</td></tr><tr><td>Xileni&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>X3P-1GAL</td><td>MOLTO 206238</td></tr></tbody></table>

mappatura spaziale migliorata degli strati muscolari gastrici del topo utilizzando una tecnica modificata dello swiss roll

Enhanced Spatial Mapping of Mouse Gastric Muscle Layers Using a Modified Swiss Roll Technique

Utilizzando il nuovo metodo, i rotoli svizzeri gastrici murini includevano tutte e tre le principali regioni dello stomaco: fundus, corpus e antro, insieme a una piccola porzione dell'esofago e del duodeno in un'unica sezione. Includere l'intero stomaco in un'unica sezione consente un'analisi regionale completa (Figura 1). La colorazione di ematossilina ed eosina (H&amp;E) di immagini intere dei rotoli svizzeri dello stomaco ha dimostrato un'architettura gastrica ben conservata in tutte le regioni, permettendo una chiara visualizzazione degli strati mucosale, submucosale e muscolare (Figura 3). La Figura 4 mostra una colorazione immunofluorescente rappresentativa delle cellule interstiziali di Cajal (ICC; cellule pacemaker che generano onde lente ritmiche alla base della motilità intestinale fasica; identificate da KIT e ANO1), neuroni enteici (neuroni del sistema nervoso enterico che coordinano la motilità gastrointestinale; identificati tramite immunocolorazione TUBB3) e nuclei (DAPI). Nella mucosa gastrica, la KIT è anche espressa nelle cellule Paneth e goblet, come precedentementeriportato 9,10,11. ANO1 è inoltre fortemente espresso nell'epitelio gastrico, in particolare nelle cellule epiteliali colonnari del fondo di terra, coerente con il suo ruolo nel trasporto del cloruro e nella secrezionemucosa 11. Inoltre, TUBB3 è espresso in alcune cellule endocrine gastriche e cellule secretrici di muco, secondo i dati dell'Human ProteinAtlas 12,13. La Figura 5 mostra una colorazione immunofluorescente rappresentativa delle cellule muscolari lisce marcate da MYH11, delle cellule epiteliali della mucosa gastrica marcate da E-cadherin e ICC marcate da KIT. MYH11 è espressa anche in miofibroblasti nella mucosa gastrica, come riportato inprecedenza in 14. Insieme, questi risultati di immunofluorescenza confermano che il nostro protocollo preserva l'architettura tissutale.
<img alt="Figura 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig1.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 1"> 
Figura 1: Preparazione del "rotolo svizzero" dello stomaco del topo per la criosezionazione. (A) Subito dopo la rimozione tutto lo stomaco viene posto in una ciotola di dissezione rivestita di silicone nero, riempita con soluzione salina fredda tamponata con fosfato (PBS) per preservare l'integrità dei tessuti. (B) Lo stomaco si apre lungo il punto medio del duodeno. (C) Lo stomaco viene delicatamente allungato e bloccato nel piatto per rimanere piatto senza applicare una tensione eccessiva. Una linea tratteggiata rossa è delineata lungo il fazzoletto per indicare dove deve essere tagliata e facilitare il rotolamento. (D) Lo stomaco aperto e fisso viene posizionato su carta filtrante inumidita con PBS in preparazione all'arrotolamento in una configurazione compatta. La freccia rossa indica la direzione del movimento dello stomaco. (E) I pezzi di tessuto vengono incorporati in un composto a temperatura di taglio ottimale (O.C.T.) e congelati su ghiaccio secco in preparazione alla criosezionazione. (F) I blocchi congelati vengono conservati a −80 °C e criosezionati a 5 μm di spessore per l'analisi a valle. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig1large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figura 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig2.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 2"> 
Figura 2: Configurazione dell'acquisizione ND e visualizzazione della saturazione durante l'imaging Z-stack. (A) Impostazioni del laser e del rivelatore configurate nel software di imaging confocale per l'imaging spettrale multicanale. Sono utilizzati quattro fluorofori: 4′,6-diamidino-2-fenilindolo (DAPI), Alexa Fluor 488 (AF488), Alexa Fluor 555 (AF555) e Alexa Fluor 647 (AF647), ciascuno abbinato a laser di eccitazione e rivelatori di emissione corrispondenti. Il grafico spettrale mostra le curve di eccitazione ed emissione, permettendo di aggiustare per minimizzare la diafonia e ottimizzare il rilevamento del segnale. (B) Le impostazioni di esposizione vengono regolate individualmente per ciascun fluoroferano per evitare la saturazione dei pixel e preservare i dettagli nelle regioni ad alta intensità. (C) Ampia impostazione per acquisizione dell'immagine (ad esempio, 6 × 6 campi) consente la visualizzazione dell'intero rotolo svizzero gastrico; La dimensione del campo dell'immagine deve essere regolata in base alla dimensione e alla compattezza del tessuto arrotolato. (D) Finestra di acquisizione ND che mostra le impostazioni dei parametri dello stack Z. L'intervallo Z è definito selezionando le posizioni superiore e inferiore del muscolo gastrico, con otto passaggi configurati per catturare l'intera profondità del tessuto per un'analisi tridimensionale (3D). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figura 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig3.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 3"> 
Figura 3: Immagine di un rotolo svizzero di topo con ematossilina ed eosina colorato con ematossilina ed eosina. La scansione delle piastrelle dimostra la capacità di visualizzare l'intero rotolo svizzero gastrico di una femmina di 8 settimane di topo C57BL/6J. Sono indicate le principali regioni anatomiche, tra cui l'esofago (linea tratteggiata rossa), lo sfintere esofageo inferiore (linea tratteggiata viola), il fondo di fondo (linea tratteggiata nera), il corpo (linea tratteggiata blu), l'antro (linea tratteggiata verde) e il duodeno (linea tratteggiata arancione). Barra della scala: 1000 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig3large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figura 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig4.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 4"> 
Figura 4: Immagini confocali di un rotolo svizzero di un intero stomaco murino: ANO1, KIT, TUBB3. Pannelli superiori: Immagini rappresentative confocali cucite di un rotolo svizzero gastrico di una femmina di 8 settimane di topo C57BL/6J, che mostrano immunocolorazione per ANO1 (verde), KIT (ciano), TUBB3 (giallo) e nuclei (blu). Viene visualizzato l'intero stomaco piegato, inclusi fondo di fondo, corpus e antrum. Barre di scala: 1000 μm. Pannelli inferiori: Vedute ingrandite della regione delimitata dalla casella tratteggiata bianca nei pannelli superiori, che evidenziano i dettagli cellulari delle cellule interstiziali di Cajal (ANO1+ e KIT+; frecce gialle) e dei neuroni enteici (TUBB3⁺; frecce rosse). Barre di scala: 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig4large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figura 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig5.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 5"> 
Figura 5: Immagini confocali di un rotolo svizzero di uno stomaco murino intero: MYH11, KIT, E-cadherin. Pannelli superiori: Immagini confocali cucite rappresentative di un rotolo svizzero gastrico di una topo femmina C57BL/6J di 8 settimane, che mostrano immunocolorazione per MYH11 (verde), KIT (ciano), E-cadherin (giallo) e nuclei (blu). Viene visualizzato l'intero stomaco piegato, inclusi fondo di fondo, corpus e antrum. Barre di scala: 1000 μm. Pannelli inferiori: Viste ingrandite della regione delimitate dalla scatola bianca tratteggiata nei pannelli superiori. Linee bianche tratteggiate delimitano l'epitelio mucoso (E-cadherina) e lo strato muscolare (MYH11). Le frecce bianche indicano le cellule interstiziali KIT+ del Cajal (ICC). Barre di scala: 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig5large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>

Mappatura spaziale migliorata degli strati muscolari gastrici del topo utilizzando una tecnica modificata dello Swiss Roll

Spatial "omics" technologies provide unprecedented opportunities to study the biology and interactions of individual cells of the gastric neuromuscular ...

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Le cellule interstiziali di Cajal (ICC) sono le cellule pacemaker del tratto gastrointestinale (GI). Essi formano reti complesse tra le cellule muscolari lisce e fibre neuronali post-gangliari per regolare contrattilità gastrointestinale. Qui vi presentiamo metodi di immunofluorescenza trasversale e con tutto il supporto di visualizzazione murini reti ICC.

Visualizzazione delle cellule interstiziali di Cajal (ICC) di rete in topi

La misurazione in vivo delle contrazioni della muscolatura liscia lungo il tratto gastrointestinale degli animali da laboratorio rimane una tecnica potente, anche se sottoutilizzata. Gli estensimetri flessibili a doppio elemento non sono disponibili in commercio e richiedono la fabbricazione. Questo protocollo descrive la costruzione di estensimetri affidabili ed economici per l'impianto acuto o cronico nei roditori.

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Questo articolo dimostra procedure chirurgiche di reflusso gastroesofageo con topi. Questi modelli sono strumenti utili per la ricerca sui meccanismi e il trattamento del reflusso gastroesofageo e potenzialmente dell'esofago di Barrett e dell'adenocarcinoma esofageo.

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Viene descritto l'uso di un semplice dispositivo per tagliare e 'arrotolare' gli intestini di topo per preparare rapidamente preparazioni di montature intere.

Un dispositivo semplice da preparare rapidamente intere Monti della Intestino mouse

Le tecniche di registrazione video e mappatura spaziotemporale (STmap) recentemente disponibili consentono di visualizzare e quantificare sia i modelli di propagazione che quelli di miscelazione della motilità intestinale. L'obiettivo di questo protocollo è quello di spiegare la generazione e l'analisi di STmap utilizzando il sistema di monitoraggio della motilità gastrointestinale (GIMM).

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Questo articolo descrive una tecnica di imaging video e una mappatura spazio-temporale ad alta risoluzione per identificare i cambiamenti nella regolazione neurale della motilità del colon nei topi adulti. Effetti sottili sulla funzione gastrointestinale (GI) possono essere rilevati utilizzando questo approccio in preparati tissutali isolati per migliorare la nostra comprensione della malattia gastrointestinale.

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accurata identificazione e localizzazione delle cellule epiteliali lungo il rivestimento della mucosa intestinale sono essenziali per definire diverse linee cellulari. Corretta l'imaging dei tessuti intestinali è di fondamentale importanza per l'identificazione dei pattern di espressione della proteina con la massima risoluzione. Questo studio si propone di delineare i metodi e le condizioni ottimali per i tessuti intestinali lavorazione del mouse.

Miglioramento Tecnica Swiss-laminazione per intestinale Preparazione del tessuto per immunoistochimica e analisi immunofluorescenza

Quanto segue descrive le prestazioni della gastrectomia verticale nei topi. Si tratta di un tipo di chirurgia di perdita di peso che comporta l'asportazione di circa il 70% dello stomaco.

Un modello murino di gastrectomia verticale

L'intestino è vitale per la digestione e l'assorbimento. Ogni regione - duodeno, digiuno, ileo, colon - svolge funzioni distinte a causa di strutture cellulari uniche. Lo studio della fisiologia intestinale richiede un'analisi meticolosa dei tessuti. Questo protocollo delinea la fissazione e la lavorazione dei tessuti utilizzando la tecnica del rullo svizzero, garantendo un'immunocolorazione accurata attraverso un'adeguata conservazione e orientamento dei tessuti.

Protocollo ottimizzato per Swiss Rolls intestinali e colorazione in immunofluorescenza di tessuto incluso in paraffina

Questo studio presenta un metodo di imaging 3D che utilizza tessuti intestinali a montaggio intero e microscopia multi-fotone per quantificare il muco secreto, consentendo un'analisi volumetrica precisa e la visualizzazione della dinamica del muco in risposta a stimoli come il cloruro di carbamilcolina.

Quantificazione tridimensionale del muco intestinale mediante imaging tissutale a montaggio intero

Impara la tecnica Swiss Roll modificata per l'immunostaining dello stomaco intero nel topo. Questo metodo consente di visualizzare tutte le regioni gastriche in un'unica sezione criogenica mantenendo l'orientamento spaziale e la qualità dell'immagine per studi istologici avanzati.

Mappatura spaziale migliorata degli strati muscolari gastrici del topo utilizzando una tecnica modificata dello Swiss Roll

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