Name: Test Dot Blot per Rilevare i Livelli Globali di Modifica dellRNAN 6-metiladenosina (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 40 s
Description: Impara a valutare i livelli globali di m6A nell'RNA usando il dot blot con cellule 143B. Questo metodo semi-quantitativo permette screening rapidi e studi preliminari sulle modifiche epitrascrittomiche.

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<ol><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N6-methyladenosine-dependent+regulation+of+messenger+RNA+stability%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">N6-methyladenosine-dependent regulation of messenger RNA stability.</a> Nature. 505 (7481), 117-120 (2014).</li>
<li>Zhang, Z., Wei, W., Wang, H., Dong, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N6-methyladenosine-sculpted+regulatory+landscape+of+noncoding+RNA%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">N6-methyladenosine-sculpted regulatory landscape of noncoding RNA.</a> Front Oncol. 11 (1), 743990(2021).</li>
<li>Hsu, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+RNA-binding+protein+FMRP+facilitates+the+nuclear+export+of+N6-methyladenosine-containing+mRNAs%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">The RNA-binding protein FMRP facilitates the nuclear export of N6-methyladenosine-containing mRNAs.</a> J Biol Chem. 294 (52), 19889-19895 (2019).</li>
<li>Chen, X. -Y., Zhang, J., Zhu, J. -S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+m6A+RNA+methylation+in+human+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer%22%5BJournal%5D)">The role of m6A RNA methylation in human cancer.</a> Mol Cancer. 18 (1), 103(2019).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+characterization+and+clinical+relevance+of+m6A+regulators+across+33+cancer+types%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer%22%5BJournal%5D)">Molecular characterization and clinical relevance of m6A regulators across 33 cancer types.</a> Mol Cancer. 18 (1), 137(2019).</li>
<li>Hu, Y., Zhao, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+m6A+in+osteoporosis%2C+arthritis+and+osteosarcoma+%28review%29%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Ther+Med%22%5BJournal%5D)">Role of m6A in osteoporosis, arthritis and osteosarcoma (review).</a> Exp Ther Med. 22 (3), 926(2021).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N6-methyladenosine+%28m6A%29+modification+in+osteosarcoma%3A+expression%2C+function+and+interaction+with+noncoding+RNAs-an+updated+review%5BTitle%5D)+AND+%22Epigenetics%22%5BJournal%5D)">N6-methyladenosine (m6A) modification in osteosarcoma: expression, function and interaction with noncoding RNAs-an updated review.</a> Epigenetics. 18 (1), 2260213(2023).</li>
<li>Zhu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+N6methyladenosine+modification+residues+%28review%29%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Detection of N6methyladenosine modification residues (review).</a> Int J Mol Med. 43 (6), 2267-2278 (2019).</li>
<li>Wang, Y., Jia, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+methods+of+epitranscriptomic+mark+N6-methyladenosine%5BTitle%5D)+AND+%22Essays+Biochem%22%5BJournal%5D)">Detection methods of epitranscriptomic mark N6-methyladenosine.</a> Essays Biochem. 64 (6), 967-979 (2020).</li>
<li>Stejskal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+analysis+by+LC-MS%2FMS+of+N6-methyladenosine+and+inosine+in+mRNA+reveal+complex+incidence%5BTitle%5D)+AND+%22RNA%22%5BJournal%5D)">Global analysis by LC-MS/MS of N6-methyladenosine and inosine in mRNA reveal complex incidence.</a> RNA. 31 (4), 514-528 (2025).</li>
<li>Ensinck, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((m6A-ELISA%2C+a+simple+method+for+quantifying+N6-methyladenosine+from+mRNA+populations%5BTitle%5D)+AND+%22RNA%22%5BJournal%5D)">m6A-ELISA, a simple method for quantifying N6-methyladenosine from mRNA populations.</a> RNA. 29 (5), 705-712 (2023).</li>
<li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((m6A+mRNA+methylation+regulates+AKT+activity+to+promote+the+proliferation+and+tumorigenicity+of+endometrial+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">m6A mRNA methylation regulates AKT activity to promote the proliferation and tumorigenicity of endometrial cancer.</a> Nat Cell Biol. 20 (9), 1074-1083 (2018).</li>
<li>Zhang, M., Li, Q., Xie, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Bayesian+hierarchical+model+for+analyzing+methylated+RNA+immunoprecipitation+sequencing+data%5BTitle%5D)+AND+%22Quant+Biol+%28Beijing%29%22%5BJournal%5D)">A Bayesian hierarchical model for analyzing methylated RNA immunoprecipitation sequencing data.</a> Quant Biol (Beijing). 6 (3), 275-286 (2018).</li>
<li>Dominissini, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topology+of+the+human+and+mouse+m6A+RNA+methylomes+revealed+by+m6A-seq%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Topology of the human and mouse m6A RNA methylomes revealed by m6A-seq.</a> Nature. 485 (7397), 201-206 (2012).</li>
<li>Mishra, T., Phillips, S., Zhao, Y., Wilms, B., He, C., Wu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epitranscriptomic+m6A+modifications+during+reactivation+of+HIV-1+latency+in+CD4%2B+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">Epitranscriptomic m6A modifications during reactivation of HIV-1 latency in CD4+ T cells.</a> mBio. 15 (11), e0221424(2024).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((METTL16+promotes+lipid+metabolic+reprogramming+and+colorectal+cancer+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">METTL16 promotes lipid metabolic reprogramming and colorectal cancer progression.</a> Int J Biol Sci. 21 (11), 4782-4797 (2025).</li>
<li>Ren, F., Cai, Y., Song, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OTUD7B+stabilization+by+METTL14-mediated+m6A+methylation+drives+HIF-1%CE%B1+expression+in+esophageal+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Oncol+Res%22%5BJournal%5D)">OTUD7B stabilization by METTL14-mediated m6A methylation drives HIF-1α expression in esophageal squamous cell carcinoma.</a> Oncol Res. 33 (8), 2055-2074 (2025).</li>
<li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((WTAP+facilitates+progression+of+hepatocellular+carcinoma+via+m6A-HuR-dependent+epigenetic+silencing+of+ETS1%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer%22%5BJournal%5D)">WTAP facilitates progression of hepatocellular carcinoma via m6A-HuR-dependent epigenetic silencing of ETS1.</a> Mol Cancer. 18 (1), 127(2019).</li>
<li>Gu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Upregulation+of+circGDI2+inhibits+tumorigenesis+by+stabilizing+the+expression+of+RNA+m6A+demethylase+FTO+in+oral+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Noncoding+RNA+Res%22%5BJournal%5D)">Upregulation of circGDI2 inhibits tumorigenesis by stabilizing the expression of RNA m6A demethylase FTO in oral squamous cell carcinoma.</a> Noncoding RNA Res. 10 (1), 140-152 (2025).</li>
<li>Ura, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+dot+blot+analyses+of+blood-group-related+antigens+in+paired+normal+and+malignant+human+breast+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Quantitative dot blot analyses of blood-group-related antigens in paired normal and malignant human breast tissues.</a> Int J Cancer. 50 (1), 57-63 (1992).</li>
<li>Reed, K. C., Mann, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+transfer+of+DNA+from+agarose+gels+to+nylon+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Rapid transfer of DNA from agarose gels to nylon membranes.</a> Nucleic Acids Res. 13 (20), 7207-7221 (1985).</li>
<li>Herrin, D. L., Schmidt, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid%2C+reversible+staining+of+northern+blots+prior+to+hybridization%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Rapid, reversible staining of northern blots prior to hybridization.</a> Biotechniques. 6 (3), 196-200 (1988).</li>
<li>Rio, D. C., Ares, M., Hannon, G. J., Nilsen, T. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRio%2C+DC+%22RNA%3A+A+Laboratory+Manual%22">RNA: A Laboratory Manual</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor. NY. (2010).</li>
<li>Sambrook, J., Russell, D. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSambrook%2C+J+%22Molecular+Cloning%3A+A+Laboratory+Manual%22">Molecular Cloning: A Laboratory Manual</a>. , 3rd ed, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY. (2001).</li>
<li>Helm, M., Motorin, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detecting+RNA+modifications+in+the+epitranscriptome%3A+Predict+and+validate%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Detecting RNA modifications in the epitranscriptome: Predict and validate.</a> Nat Rev Genet. 18 (5), 275-291 (2017).</li>
<li>Meyer, K. D., Jaffrey, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dynamic+epitranscriptome%3A+N6-methyladenosine+and+gene+expression+control%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The dynamic epitranscriptome: N6-methyladenosine and gene expression control.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 15 (5), 313-326 (2014).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>3-deazaadenosina (3-DAA)</td><td>MCE</td><td>HY-W013332A</td><td>1 mg</td></tr><tr><td>Anticorpo monoclonale anti-m6A</td><td>Proteintech</td><td>68055-1-IG</td><td>50 & mu; L</td></tr><tr><td>Albumina sierica bovina (BSA, Frazione V)</td><td>BioFroxx</td><td>4240GR100&nbsp;</td><td>100 g</td></tr><tr><td>Sistema di imaging ChemiDoc MP</td><td>BIO RAD</td><td>12003154</td><td></td></tr><tr><td>DMEM Alto Glucosio</td><td>WISENT</td><td>319-005-CL</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>Spettrofotometro DS-11</td><td>DeNOVIX</td><td>DS-11</td><td></td></tr><tr><td>Kit di purificazione RNA EZ-press</td><td>EZB&nbsp;</td><td>B0004DP</td><td>100 Preparazioni</td></tr><tr><td>FBS - Qualità superiore</td><td>WISENT</td><td>086-150</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>IgG Anti-Topo per Capra (H+L) coniugato con HRP</td><td>Beyotime</td><td>A0216</td><td>1 mL</td></tr><tr><td>Substrato chemiluminescente occidentale HRP di Immobilon &nbsp;</td><td>Millipore</td><td>WBKLS0500</td><td>2 e volte; 250 mL</td></tr><tr><td>Acido meclofenamico (MA)</td><td>MCE</td><td>HY-117275</td><td>1 mg</td></tr><tr><td>Soluzione di colorazione al blu di metilene</td><td>Solarbio</td><td>G1300</td><td>0,1%, 100 mL</td></tr><tr><td>Membrana di trasferimento in nylon</td><td>LABSELECT</td><td>TM-NY-XS-45</td><td>7.4 e volte; 8,5 cm, 0,45 &mu; m, 10 PEZZI/BAG</td></tr><tr><td>PBS buffer (polvere secca pronta all'uso)</td><td>biosharp</td><td>BL601A</td><td>pH: 7,2-7,4, 2 L/borsa</td></tr><tr><td>Dodecile solfato di sodio (SDS)</td><td>Sigma</td><td>L5750-500G</td><td>500 g</td></tr><tr><td>Polvere premiscelata tampone TBS</td><td>Sangon</td><td>&nbsp; A510025-0001</td><td>1EA (243,9 g di polvere)</td></tr><tr><td>Enzima TrypLE Express</td><td>Gibco</td><td>12604-021</td><td>1 volte, 500 mL</td></tr><tr><td>Preadolescente-20</td><td>Sangon</td><td>A600560-0500</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>Crosslinker UV</td><td>UVP</td><td>CL-1000</td><td></td></tr></tbody></table>

test dot blot per rilevare i livelli globali di modifica dell'rnan 6-metiladenosina

Dot Blot Assay for Detecting Global N6-Methyladenosine RNA Modification Levels

Test Dot Blot per Rilevare i Livelli Globali di Modifica dell'RNAN 6-metiladenosina

N6-methyladenosine (m&#8310;A) is the most abundant internal modification in eukaryotic messenger RNA (mRNA) and serves as a key regulator of ...

dot-blot-assay-for-detecting-global-n6-methyladenosine-rna

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Un metodo di blotting nord modificato per misurare N 6 -methyladenosine (m 6 a) delle modifiche in RNA è descritto. L'attuale metodo in grado di rilevare le modifiche in diversi RNA e controlli sotto vari disegni sperimentali.

Un metodo per l&#39;RNA di misura<em&gt; N</em<sup&gt; 6</sup&gt; -methyladenosine modifiche di cellule e tessuti

Qui, descriviamo un protocollo per la caratterizzazione biochimica dell'enzima modificante la RNA lievito, Mod5 e discutere come questo protocollo potrebbe essere applicato ad altri enzimi modificanti la RNA.

Un test In Vitro per rilevare attività di tRNA-Isopentenyl Transferase

Qui presentiamo un protocollo per la scissione dell'RNA dipendente da DNAzyme. Ciò consente un'analisi rapida e dipendente dal sito dell'RNA 2'-O-metilazione. Questo approccio può essere utilizzato per la valutazione preliminare o importante dell'attività dello snoRNA.

Analisi dipendente da DNAzyme del rRNA 2'-O-Metilazione

Qui, viene descritto un saggio in vitro privo di anticorpi per l'analisi diretta dell'attività di metiltransferasi sull'RNA transscritto sintetico o in vitro.

Analisi anticorp-free per l'analisi dell'attività di RNA methyltransferase

Vi presentiamo un piccolo protocollo di riparazione della libreria di RNA dettagliato con meno distorsione rispetto ai metodi standard e una maggiore sensibilità per 2'-O-metilRNA. Questo protocollo può essere seguito utilizzando reagenti fatti in casa per risparmiare sui costi o utilizzando kit per comodità.

Migliorare il piccolo RNA-seq: meno Bias e migliore rilevamento di 2'-O-Methyl RNA

Il saggio di immunoprecipitazione dell'RNA metilato è un metodo a base di anticorpi utilizzato per arricchire i frammenti di RNA metilati. Accoppiato con il sequenziamento profondo, porta all'identificazione di trascrizioni che trasportano la modifica m5C.

Test di immunoprecipitazione dell'RNA metilato per studiare m5C Modifica in Arabidopsis

Qui viene descritto un metodo preciso e riproducibile per la quantificazione in vivo dei nucleosidi/nucleotidi nelle piante. Questo metodo utilizza un HPLC-MS/MS.

Preparazione del campione dell'impianto per la misurazione del contenuto nucleoside/nucleotidico con hplc-MS/MS

Il ruolo delle modificazioni dell'RNA nelle infezioni virali sta appena iniziando ad essere esplorato e potrebbe evidenziare nuovi meccanismi di interazione virale-ospite. In questo lavoro, forniamo una pipeline per studiare le modifiche dell'RNA m6A e m5C nel contesto delle infezioni virali.

Esplorare gli epitrascrittomi m6A e m5C sull'infezione virale: un esempio di HIV

Le modificazioni post-trascrizionali dell'RNA rappresentano uno strato poco studiato di regolazione della traduzione che è stato recentemente collegato alla plasticità del sistema nervoso centrale. Qui, viene descritta la preparazione del campione e l'approccio di cromatografia liquida-spettrometria di massa tandem per la caratterizzazione simultanea di numerose modifiche dell'RNA in singoli neuroni.

Caratterizzazione delle modifiche dell'RNA in singoli neuroni utilizzando la spettrometria di massa

Il protocollo fornisce istruzioni per modificare l'RNA con dimetilsolfato per esperimenti di profilazione mutazionale. Include il sondaggio in vitro e in vivo con due metodi alternativi di preparazione della libreria.

Sondare la struttura dell'RNA con profilo mutazionale del dimetilsolfato con sequenziamento in vitro e nelle cellule

Questo protocollo fornisce un approccio dettagliato per valutare i livelli di modifica di m6Adi RNA specifico utilizzando MeRIP-qPCR.

Saggio MeRIP-qPCR per la rilevazione dei livelli di modifica m6A di RNA specifici nelle cellule dell'osteosarcoma

Impara a valutare i livelli globali di m6A nell'RNA usando il dot blot con cellule 143B. Questo metodo semi-quantitativo permette screening rapidi e studi preliminari sulle modifiche epitrascrittomiche.

Test Dot Blot per Rilevare i Livelli Globali di Modifica dell'RNA^N 6-metiladenosina

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