Name: Saggio di isolamento a fibra singola per la valutazione del comportamento ossidativo delle miofibre (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-03-31T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 1 s
Description: Scopri l'isolamento di miofibre singole intatte dal muscolo soleo murino con questo protocollo ottimizzato. La tecnica preserva la viabilità e riduce la contaminazione per analisi accurate in biologia muscolare.

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<ol><li>Janssen, I., Heymsfield, S. B., Wang, Z. M., Ross, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skeletal+muscle+mass+and+distribution+in+468+men+and+women+aged+18%E2%80%9388+yr%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Skeletal muscle mass and distribution in 468 men and women aged 18–88 yr.</a> J Appl Physiol. 89 (1), 81-88 (2000).</li>
<li>Mauro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Satellite+cell+of+skeletal+muscle+fibers%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biophys+Biochem+Cytol%22%5BJournal%5D)">Satellite cell of skeletal muscle fibers.</a> J Biophys Biochem Cytol. 9 (2), 493-495 (1961).</li>
<li>Zammit, P. S., Partridge, T. A., Yablonka-Reuveni, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+skeletal+muscle+satellite+cell%3A+The+stem+cell+that+came+in+from+the+cold%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">The skeletal muscle satellite cell: The stem cell that came in from the cold.</a> J Histochem Cytochem. 54 (11), 1177-1191 (2006).</li>
<li>Zammit, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pax7+and+myogenic+progression+in+skeletal+muscle+satellite+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Pax7 and myogenic progression in skeletal muscle satellite cells.</a> J Cell Sci. 119 (9), 1824-1832 (2006).</li>
<li>Seale, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pax7+is+required+for+the+specification+of+myogenic+satellite+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Pax7 is required for the specification of myogenic satellite cells.</a> Cell. 102 (6), 777-786 (2000).</li>
<li>Günther, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myf5-positive+satellite+cells+contribute+to+Pax7-dependent+long-term+maintenance+of+adult+muscle+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Myf5-positive satellite cells contribute to Pax7-dependent long-term maintenance of adult muscle stem cells.</a> Cell Stem Cell. 13 (5), 590-601 (2013).</li>
<li>Gnocchi, V. F., White, R. B., Ono, Y., Ellis, J. A., Zammit, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Further+characterisation+of+the+molecular+signature+of+quiescent+and+activated+mouse+muscle+satellite+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Further characterisation of the molecular signature of quiescent and activated mouse muscle satellite cells.</a> PLoS One. 4 (4), e5205(2009).</li>
<li>Halevy, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pattern+of+Pax7+expression+during+myogenesis+in+the+posthatch+chicken+establishes+a+model+for+satellite+cell+differentiation+and+renewal%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Pattern of Pax7 expression during myogenesis in the posthatch chicken establishes a model for satellite cell differentiation and renewal.</a> Dev Dyn. 231 (3), 489-502 (2004).</li>
<li>Biressi, S., Rando, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneity+in+the+muscle+satellite+cell+population%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Heterogeneity in the muscle satellite cell population.</a> Semin Cell Dev Biol. 21 (8), 845-854 (2010).</li>
<li>Zammit, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((All+muscle+satellite+cells+are+equal%2C+but+are+some+more+equal+than+others%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">All muscle satellite cells are equal, but are some more equal than others.</a> J Cell Sci. 121 (18), 2975-2982 (2008).</li>
<li>Ortuste Quiroga, H. P., Fujimaki, S., Ono, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pax7+reporter+mouse+models%3A+A+pocket+guide+for+satellite+cell+research%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Transl+Myol%22%5BJournal%5D)">Pax7 reporter mouse models: A pocket guide for satellite cell research.</a> Eur J Transl Myol. 33 (4), (2023).</li>
<li>Schiaffino, S., Reggiani, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiber+types+in+mammalian+skeletal+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Fiber types in mammalian skeletal muscles.</a> Physiol Rev. 91 (4), 1447-1531 (2011).</li>
<li>Pette, D., Staron, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myosin+isoforms%2C+muscle+fiber+types%2C+and+transitions%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Res+Tech%22%5BJournal%5D)">Myosin isoforms, muscle fiber types, and transitions.</a> Microsc Res Tech. 50 (6), 500-509 (2000).</li>
<li>Ahmetov, I. I., Vinogradova, O. L., Williams, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+polymorphisms+and+fiber-type+composition+of+human+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Sport+Nutr+Exerc+Metab%22%5BJournal%5D)">Gene polymorphisms and fiber-type composition of human skeletal muscle.</a> Int J Sport Nutr Exerc Metab. 22 (4), 292-303 (2012).</li>
<li>Guth, L., Samaha, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Qualitative+differences+between+actomyosin+ATPase+of+slow+and+fast+mammalian+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Qualitative differences between actomyosin ATPase of slow and fast mammalian muscle.</a> Exp Neurol. 25 (1), 138-152 (1969).</li>
<li>Aguilera-Alcala, N., Morales-Reyes, Z., Martin-Lopez, B., Moleon, M., Sanchez-Zapata, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+scavengers+in+providing+non-material+contributions+to+people%5BTitle%5D)+AND+%22Ecol+Indic%22%5BJournal%5D)">Role of scavengers in providing non-material contributions to people.</a> Ecol Indic. 117, 11(2020).</li>
<li>Sullivan, S. M., Pittman, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+between+mitochondrial+volume+density+and+capillarity+in+hamster+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Relationship between mitochondrial volume density and capillarity in hamster muscles.</a> Am J Physiol. 252 (1), H149-H155 (1987).</li>
<li>Fujita, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+lipid+metabolism+and+capillary+density+of+the+skeletal+muscle+following+low-intensity+exercise+training+in+a+rat+model+of+obesity+with+hyperinsulinemia%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Changes in lipid metabolism and capillary density of the skeletal muscle following low-intensity exercise training in a rat model of obesity with hyperinsulinemia.</a> PLoS One. 13 (5), e0196895(2018).</li>
<li>Narusawa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Slow+myosin+in+developing+rat+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Slow myosin in developing rat skeletal muscle.</a> J Cell Biol. 104 (3), 447-459 (1987).</li>
<li>Faerman, A., Shani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+expression+of+the+regulatory+myosin+light+chain+2+gene+during+mouse+embryogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The expression of the regulatory myosin light chain 2 gene during mouse embryogenesis.</a> Development. 118 (3), 919-929 (1993).</li>
<li>Denardi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+2x-myosin+heavy+chain+is+coded+by+a+muscle+fiber+type-specific+and+developmentally+regulated+gene%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Type 2x-myosin heavy chain is coded by a muscle fiber type-specific and developmentally regulated gene.</a> J Cell Biol. 123 (4), 823-835 (1993).</li>
<li>Ciciliot, S., Rossi, A. C., Dyar, K. A., Blaauw, B., Schiaffino, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+type+and+fiber+type+specificity+in+muscle+wasting%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Muscle type and fiber type specificity in muscle wasting.</a> Int J Biochem Cell Biol. 45 (10), 2191-2199 (2013).</li>
<li>Talbot, J., Maves, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skeletal+muscle+fiber+type%3A+Using+insights+from+muscle+developmental+biology+to+dissect+targets+for+susceptibility+and+resistance+to+muscle+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdiscip+Rev+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Skeletal muscle fiber type: Using insights from muscle developmental biology to dissect targets for susceptibility and resistance to muscle disease.</a> Wiley Interdiscip Rev Dev Biol. 5 (4), 518-534 (2016).</li>
<li>Celegato, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallel+protein+and+transcript+profiles+of+FSHD+patient+muscles+correlate+to+the+D4Z4+arrangement+and+reveal+a+common+impairment+of+slow+to+fast+fibre+differentiation+and+a+general+deregulation+of+MyoD-dependent+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">Parallel protein and transcript profiles of FSHD patient muscles correlate to the D4Z4 arrangement and reveal a common impairment of slow to fast fibre differentiation and a general deregulation of MyoD-dependent genes.</a> Proteomics. 6 (19), 5303-5321 (2006).</li>
<li>Ganassi, M., Muntoni, F., Zammit, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+and+identifying+satellite+cell-opathies+within+muscular+dystrophies+and+myopathies%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Defining and identifying satellite cell-opathies within muscular dystrophies and myopathies.</a> Exp Cell Res. 411 (1), 112906(2022).</li>
<li>Gallagher, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+84-days+of+bedrest+and+resistance+training+on+single+muscle+fibre+myosin+heavy+chain+distribution+in+human+vastus+lateralis+and+soleus+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol+Scand%22%5BJournal%5D)">Effects of 84-days of bedrest and resistance training on single muscle fibre myosin heavy chain distribution in human vastus lateralis and soleus muscles.</a> Acta Physiol Scand. 185 (1), 61-69 (2005).</li>
<li>Grimby, G., Broberg, C., Krotkiewska, I., Krotkiewski, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+fiber+composition+in+patients+with+traumatic+cord+lesion%5BTitle%5D)+AND+%22Scand+J+Rehabil+Med%22%5BJournal%5D)">Muscle fiber composition in patients with traumatic cord lesion.</a> Scand J Rehabil Med. 8 (1), 37-42 (1976).</li>
<li>Shenkman, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+slow+to+fast%3A+Hypogravity-induced+remodeling+of+muscle+fiber+myosin+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Naturae%22%5BJournal%5D)">From slow to fast: Hypogravity-induced remodeling of muscle fiber myosin phenotype.</a> Acta Naturae. 8 (4), 47-59 (2016).</li>
<li>Ohira, T., Kawano, F., Goto, K., Ohira, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Responses+of+skeletal+muscles+to+gravitational+unloading+and%2For+reloading%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol+Sci%22%5BJournal%5D)">Responses of skeletal muscles to gravitational unloading and/or reloading.</a> J Physiol Sci. 65 (4), 293-310 (2015).</li>
<li>Higashino, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+changes+in+muscle+atrophy+and+muscle+fiber+type+conversion+after+spinal+cord+transection+and+peripheral+nerve+transection+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroeng+Rehabil%22%5BJournal%5D)">Early changes in muscle atrophy and muscle fiber type conversion after spinal cord transection and peripheral nerve transection in rats.</a> J Neuroeng Rehabil. 10, 46(2013).</li>
<li>Webster, C., Silberstein, L., Hays, A. P., Blau, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fast+muscle+fibers+are+preferentially+affected+in+Duchenne+muscular+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Fast muscle fibers are preferentially affected in Duchenne muscular dystrophy.</a> Cell. 52 (4), 503-513 (1988).</li>
<li>Pedemonte, M., Sandri, C., Schiaffino, S., Minetti, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+decrease+of+IIx+myosin+heavy+chain+transcripts+in+Duchenne+muscular+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Early decrease of IIx myosin heavy chain transcripts in Duchenne muscular dystrophy.</a> Biochem Biophys Res Commun. 255 (2), 466-469 (1999).</li>
<li>Rafael, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dystrophin+and+utrophin+influence+fiber+type+composition+and+post-synaptic+membrane+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Dystrophin and utrophin influence fiber type composition and post-synaptic membrane structure.</a> Hum Mol Genet. 9 (9), 1357-1367 (2000).</li>
<li>Kotelnikova, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+approach+to+meta-analysis+of+microarray+datasets+reveals+muscle+remodeling-related+drug+targets+and+biomarkers+in+Duchenne+muscular+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Comput+Biol%22%5BJournal%5D)">Novel approach to meta-analysis of microarray datasets reveals muscle remodeling-related drug targets and biomarkers in Duchenne muscular dystrophy.</a> PLoS Comput Biol. 8 (2), e1002365(2012).</li>
<li>Banerji, C. R. S., Zammit, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathomechanisms+and+biomarkers+in+facioscapulohumeral+muscular+dystrophy%3A+Roles+of+DUX4+and+Pax7%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Pathomechanisms and biomarkers in facioscapulohumeral muscular dystrophy: Roles of DUX4 and Pax7.</a> EMBO Mol Med. 13 (8), e13695(2021).</li>
<li>Lassche, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sarcomeric+dysfunction+contributes+to+muscle+weakness+in+facioscapulohumeral+muscular+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Sarcomeric dysfunction contributes to muscle weakness in facioscapulohumeral muscular dystrophy.</a> Neurology. 80 (8), 733-737 (2013).</li>
<li>Bischoff, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proliferation+of+muscle+satellite+cells+on+intact+myofibers+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Proliferation of muscle satellite cells on intact myofibers in culture.</a> Dev Biol. 115 (1), 129-139 (1986).</li>
<li>Rosenblatt, J. D., Lunt, A. I., Parry, D. J., Partridge, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culturing+satellite+cells+from+living+single+muscle+fiber+explants%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cell+Dev+Biol+Anim%22%5BJournal%5D)">Culturing satellite cells from living single muscle fiber explants.</a> In Vitro Cell Dev Biol Anim. 31 (10), 773-779 (1995).</li>
<li>Collins, C. A., Zammit, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+grafting+of+single+muscle+fibres%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and grafting of single muscle fibres.</a> Methods Mol Biol. 482, 319-330 (2009).</li>
<li>Ravenscroft, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissociated+flexor+digitorum+brevis+myofiber+culture+system%E2%80%94a+more+mature+muscle+culture+system%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Motil+Cytoskeleton%22%5BJournal%5D)">Dissociated flexor digitorum brevis myofiber culture system—a more mature muscle culture system.</a> Cell Motil Cytoskeleton. 64 (10), 727-738 (2007).</li>
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<li>Smith, L. R., Meyer, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skeletal+muscle+explants%3A+Ex-vivo+models+to+study+cellular+behavior+in+a+complex+tissue+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Connect+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Skeletal muscle explants: Ex-vivo models to study cellular behavior in a complex tissue environment.</a> Connect Tissue Res. 61 (3-4), 248-261 (2020).</li>
<li>Tarpey, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+and+utilization+of+the+flexor+digitorum+brevis+for+assessing+skeletal+muscle+function%5BTitle%5D)+AND+%22Skeletal+Muscle%22%5BJournal%5D)">Characterization and utilization of the flexor digitorum brevis for assessing skeletal muscle function.</a> Skeletal Muscle. 8 (1), 14(2018).</li>
<li>Omairi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+the+dystrophin-associated+glycoprotein+complex+composition+by+the+metabolic+properties+of+muscle+fibres%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Regulation of the dystrophin-associated glycoprotein complex composition by the metabolic properties of muscle fibres.</a> Sci Rep. 9 (1), 2770(2019).</li>
<li>Moyle, L. A., Zammit, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+culture+and+immunostaining+of+skeletal+muscle+fibres+to+study+myogenic+progression+in+satellite+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation, culture and immunostaining of skeletal muscle fibres to study myogenic progression in satellite cells.</a> Methods Mol Biol. 1210, 63-78 (2014).</li>
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<li>Blackburn, D. M., Lazure, F., Soleimani, V. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+sequencing+of+single+myofibers+from+Mus+musculus%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">RNA sequencing of single myofibers from Mus musculus.</a> Bio Protoc. 10 (4), e3525(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Accutase</td><td>Innovative Cell Technologies</td><td>AT104</td><td></td></tr><tr><td>Basic fibroblast growth factor</td><td>Peprotech</td><td>450-33</td><td></td></tr><tr><td>Bovine serum albumin</td><td>Sigma</td><td>A9418</td><td></td></tr><tr><td>Butorphanol tartrate</td><td>Meiji Yakuka Co., Ltd</td><td>711-12</td><td>Nome del prodotto: Vetorphale iniezione</td></tr><tr><td>Chicken Embryo Extract</td><td>US Biological</td><td>C3999</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase type I</td><td>Worthington</td><td>M9B2717</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9542</td><td></td></tr><tr><td>Fetal bovine serum</td><td>Gibco</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>Glucose-free DMEM</td><td>Gibco</td><td>A14430-01</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>10569</td><td></td></tr><tr><td>High-glucose DMEM+GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>10569-010</td><td></td></tr><tr><td>Horse serum</td><td>Life technology</td><td>16050-130</td><td></td></tr><tr><td>Low-protein binding filter</td><td>Millipore</td><td>SLGVR33RB</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>354230</td><td></td></tr><tr><td>Medetomidine hydrochloride</td><td>Kyoritsu Seiyaku Co., Ltd</td><td>8816</td><td>Nome del prodotto: Dorbene Iniezione</td></tr><tr><td>Midazolam</td><td>Maruishi Pharmaceutical Co., Ltd</td><td>4987211762100</td><td>Nome del prodotto: Dormicum Iniezione</td></tr><tr><td>Penicillin-streptomycin-amphotericin B suspension</td><td>Wako</td><td>161-23181</td><td></td></tr><tr><td>Ponceau S stain solution</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>24-3875-5</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red</td><td>Gibco</td><td>25200056</td><td></td></tr><tr><td>Attrezzature</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge tubes (25 mL)</td><td>IWAKI</td><td>2362-025</td><td></td></tr><tr><td>Fluorescence microscope</td><td>Keyence</td><td>BZ-X810</td><td></td></tr><tr><td>Pasteur pipettes</td><td>IWAKI</td><td>5 3/4 IK-PAS-5P</td><td></td></tr><tr><td>Stereomicroscope</td><td>Leica</td><td>M165C</td><td></td></tr><tr><td>Sterilin dishes (100-mm)</td><td>Thermo Scientific</td><td>3020-100</td><td>Riferito come piastra Petri nel manoscritto</td></tr><tr><td>Anticorpi per immunoetichettatura</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Goat anti-mouse (H+L), Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-32723</td><td>1:400</td></tr><tr><td>Goat anti-rabbit (H+L), Alexa Fluor 594</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11012</td><td>1:400</td></tr><tr><td>Mouse Anti-Myosin Heavy Chain</td><td>R&amp;D Systems</td><td>MAB4470</td><td>1:400</td></tr><tr><td>Mouse Anti-Pax7</td><td>DSHB</td><td>AB-528428</td><td>1:100</td></tr><tr><td>Rabbit Anti-MyoD</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-760</td><td>1:100</td></tr><tr><td>Anticorpi per immunoblotting</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>HRP-conjugated Anti-mouse IgG</td><td>Cytiva</td><td>NA931</td><td>1:1000/ horseradish peroxidase</td></tr><tr><td>HRP-conjugated Anti-Rabbit IgG</td><td>Cytiva</td><td>NA934</td><td>1:1000/ horseradish peroxidase</td></tr><tr><td>Mouse Anti-MyHC I</td><td>Sigma</td><td>M8421</td><td>1:1000/ Myosin Heavy Chain I</td></tr><tr><td>Mouse Anti-MyHC II</td><td>Sigma</td><td>M4276</td><td>1:1000/ Myosin Heavy Chain II</td></tr><tr><td>Mouse Anti-PGC-1&alpha;</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-517380</td><td>1:1000/ Pparg coactivator 1 alpha</td></tr><tr><td>Mouse Anti-&alpha;-tubulin</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>#3873</td><td>1:1000/ Alpha tubulin</td></tr><tr><td>Rabbit Anti-COXIV</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>#4850</td><td>1:1000/ Cytochrome c oxidase IV</td></tr><tr><td>Rabbit Anti-GAPDH</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>#2218</td><td>1:10000/ Glyceraldehyde-3-Phosphate Dehydrogenase</td></tr><tr><td>Rabbit Anti-GLUT4</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>#2213</td><td>1:1000/ Glucose Transporter 4</td></tr><tr><td>Rabbit Anti-&beta;-actin</td><td>Proteintech</td><td>20536-1-AP</td><td>1:2000/ Nonmuscle Beta-actin</td></tr></tbody></table>

saggio di isolamento a fibra singola per la valutazione del comportamento ossidativo delle miofibre

Single Fiber Isolation Assay for the Assessment of Oxidative Myofiber Behavior

La nostra tecnica dimostra che le fibre isolate dei muscoli del soleo (SOL) e dell'estensore lungo della dita (EDL) possono essere immunomarcate efficacemente contro Pax7 (Figura 3B). Queste fibre isolate possono essere conservate in un mezzo di coltura galleggiante (composto da DMEM + GlutaMAX con siero di cavallo al 10%, 1% AB, 0,5% CEE) per 3 giorni, seguiti da immunomarcatura (Figura 3B). Non è consigliato mantenere le fibre galleggianti per più di 4 giorni. Nelle condizioni descritte di fibre flottanti, le miofibre tendono ad aggregarsi dopo questo periodo, compromettendo l'analisi successiva di immunomarcatura.
La tecnica presentata può inoltre essere utilizzata per l'immunoblotting in tutto il programma miogenico (Figura 3C). Infatti, mioblasti derivati da SOL ed EDL sono stati placcati in piastre a 24 pozzi con una confluenza di circa il 70%. Le cellule sono state mantenute nel mezzo di crescita per 1 giorno (mioblasti) oppure indotte a differenziarsi per due o quattro giorni (miotube a formazione precoce e differenziazione, rispettivamente). Cinque μg di proteina sono stati caricati per l'analisi immunoblottante.
L'espressione di MyHC I è stata espressa quasi specificamente nelle fibre muscolari derivate da SOL, con espressione minima nei miotubi e trascurabile nei mioblasti (Figura 3C). MyHC II è stato espresso sia nelle fibre muscolari SOL che EDL. Questa espressione riflette il SOL, composto principalmente da tipi I e IIa, mentre l'EDL è composto principalmente da fibre IIx e IIb. I mioblasti non hanno espresso MyHC II, ma la sua espressione è aumentata progressivamente durante la differenziazione. Le proteine ossidative correlate PGC-1α e COXIV hanno dimostrato l'espressione attesa più alta nelle fibre derivate da SOL. Inoltre, è stata rilevata un'espressione più elevata di GLUT4 nelle fibre isolate di SOL rispetto a quelle di EDL. Un problema che i biologi muscolari scheletrici possono affrontare è che le proteine di mantenimento e i controlli di carico ampiamente utilizzati, come α-tubulina, β-actina, GAPDH e colorazioni proteiche totali come Ponceau S, non rimangono stabili su mioblasti, miotubi e fibre muscolari isolate, ognuna mostrano una variabilità distinta. L'intensità del segnale di α-tubulina e β-actina era più alta nei miotubi, mentre la colorazione con Ponceau S era relativamente debole nei mioblasti. Al contrario, il GAPDH ha mostrato una maggiore espressione nelle fibre muscolari EDL. Tuttavia, a seconda dello scopo sperimentale, una di queste proteine di mantenimento potrebbe ancora essere applicabile; in alternativa, si possono esplorare fattori di normalizzazione come la proteina dello shock termico 70 (HSP70).
<img alt="Figura 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/70637/70637fig1.jpg" data-altupdatedat="1784005267000" data-alt="Figure 1"> 
Figura 1. Dissezione del muscolo soleo. (A) Attrezzatura necessaria per la dissezione. 1: microforbici, 2: pinze sottili, 3: forbici sezionanti e 4: perni di dissezione. (B) Il tendine PLA è stato tagliato dai fasci tendini GAS e SOL (freccia gialla). Il tendine distale del PLA (freccia bianca) è stato sollevato con una pinza. (C) Un perno di dissezione è stato inserito nello spazio tra il tendine prossimale del SOL (freccia rossa) e il GAS (freccia verde). (D) SOL è stato separato dal GAS tramite un perno di dissezione. (E) I fasci tendinosi GAS e SOL sono stati quindi tagliati sul lato GAS. (F) Il tendine prossimale SOL è stato poi tagliato con microforbici. (G) Ulteriori fasci tendini distali sono stati rimossi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/70637/70637fig1large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figura 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/70637/70637fig2.jpg" data-altupdatedat="1784005267000" data-alt="Figure 2"> 
Figura 2. Isolamento delle fibre del soleo. (A) Attrezzatura necessaria per l'isolamento. 1: pipette a canna stretta e 2: pipette Pasteur a canna larga. (B) Stereomicroscopio usato per l'isolamento. (C) Il soleo digerito dalla collagenasi è stato trasferito al DMEM con AB dell'1%. (D) Le fibre del soleo si sono dissociate dal muscolo dopo le prime 10 sessioni di risciacquo. (E) Fibre singole trasferite al secondo piatto. (F) Immagine che mostra fibre pulite rimosse da detriti e fibre rimpicciolite. (G) Fibre singole senza detriti trasferite al terzo piatto. (H) Fibre singole intatte chiaramente visibili. Barra in scala = 10 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/70637/70637fig2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figura 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/70637/70637fig3.jpg" data-altupdatedat="1784005267000" data-alt="Figure 3"> 
Figura 3. Espansione della coltura cellulare e analisi di campioni derivati da EDL e SOL. (R) Dopo 6 giorni dall'isolamento, i campioni coltivati con il mezzo di proliferazione mostrano una coltura mioblastica pura ottenuta da fibre isolate del soleo. Barra di scala = 100 μm. (B) SOL e fibre singole derivate dall'EDL, immediatamente o 3 giorni dopo l'isolamento, mostrano cellule satelliti immunomarcate per Pax7 (verde). L'assenza di MyoD (rosso) conferma che le cellule satelliti non si sono ancora impegnate nell'attivazione miogenica. Le fibre sono state controcolorate con DAPI (blu). Le cellule sono state successivamente osservate tramite un microscopio a fluorescenza. Barra di scala = 20 μm. (C) 5 μg di proteina è stata utilizzata per l'immunoblotting di mioblasti, miotubi e campioni derivati da miofibre. I pannelli immunoblottanti mostrano l'espressione di MyHC I, MyHC II, PGC-1α, COX IV, GLUT4, α-tubulina, β-actina e GAPDH sono stati utilizzati come bersagli di mantenimento/normalizzazione. La colorazione Ponceau S è stata utilizzata come controllo del carico totale di proteine. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/70637/70637fig3large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>

Saggio di isolamento a fibra singola per la valutazione del comportamento ossidativo delle miofibre

Skeletal muscle is composed of multinucleated myofibers whose integrity and function are essential for movement and overall health. In neuromuscular ...

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Saponina permeabilizzate preparazione fibra in collaborazione con respirometrico analisi fosforilazione ossidativa fornisce una valutazione integrativa della funzione mitocondriale. Respirazione mitocondriale in stati fisiologici e patologici possono riflettere varie influenze normative ivi comprese le interazioni mitocondriale, morfologia e biochimica.

Respirometriche valutazione fosforilazione ossidativa in fibre cardiache saponina permeabilizzate

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L'isolamento e la cultura della miofibre è il gold...

Isolamento e la coltura di miofibre individuali e delle loro cellule satelliti da adulto muscolo scheletrico

In questo protocollo viene descritto un metodo di coltivazione e analisi funzionale in vitro per le cellule staminali muscolari, che conserva la maggior parte delle loro interazioni con la loro nicchia endogena.

Test di coltura di una singola miofibra per la valutazione della funzionalità delle cellule staminali muscolari adulte Ex Vivo

La capacità di rilevare con precisione i componenti della giunzione neuromuscolare è fondamentale per valutare le modifiche nella sua architettura a causa di processi patologici o di sviluppo. Qui presentiamo una descrizione completa di un metodo semplice per ottenere immagini di alta qualità di giunzioni neuromuscolari a montaggio intero che possono essere utilizzate per eseguire misurazioni quantitative.

Dissezione di fibre muscolari scheletriche singole per analisi immunofluorescenti e morfometriche di giunzioni neuromuscolari a montaggio intero

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Isolamento dei mitocondri dal muscolo scheletrico del topo per saggi respirometrici

I cavalli hanno un'eccezionale capacità di esercizio aerobico, rendendo il muscolo scheletrico equino un tessuto importante sia per lo studio della fisiologia dell'esercizio equino che per la fisiologia mitocondriale dei mammiferi. Questo articolo descrive le tecniche per la valutazione completa della funzione mitocondriale nel muscolo scheletrico equino.

Fluoro-respirometria ad alta risoluzione del muscolo scheletrico equino

Qui, presentiamo una raccolta di saggi per misurare direttamente la funzione mitocondriale nelle cellule di mammifero indipendentemente dalla loro capacità di consumare ossigeno molecolare.

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Identificazione del tipo di fibra del muscolo scheletrico umano

Descriviamo un protocollo per ottenere fibre enzimaticamente dissociate di diverse lunghezze e tipologie da sei muscoli di topi adulti: tre di essi già descritti (flessore breve delle dita, estensore lungo delle dita, soleo) e tre di essi dissociati con successo per la prima volta (estensore lungo dell'alluce, peroneo lungo, peroneo delle dita quarti).

Fibre muscolari scheletriche corte, intermedie e lunghe intatte ottenute dalla dissociazione enzimatica di sei muscoli degli arti posteriori di topi: oltre il flessore breve delle dita

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Misurazione della respirazione mitocondriale nelle fibre muscolari scheletriche umane e di topo mediante repirometria ad alta risoluzione

Scopri l'isolamento di miofibre singole intatte dal muscolo soleo murino con questo protocollo ottimizzato. La tecnica preserva la viabilità e riduce la contaminazione per analisi accurate in biologia muscolare.

Saggio di isolamento a fibra singola per la valutazione del comportamento ossidativo delle miofibre

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