Name: Etichettatura retrograda di cellule gangliari della retina mediante lapplicazione di fluoro-oro sulla superficie del collicolo superiore (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-06-17T17:19:00.000+00:00
Duration: 14 min 5 s
Description: Impara l'etichettatura retrograda delle cellule gangliari della retina con fluoro-oro applicato sul collicolo superiore. Questa tecnica permette di studiare le vie neuronali e valutare gli effetti di farmaci sulla sopravvivenza cellulare.

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Gli autori desiderano ringraziare per il sostegno del Programma Nazionale Glaucoma Foundation Assistant Salute americano.

<ol><li> Anestetizzare il ratto di iniezione intra-peritoneale di ketamina (80mg/kg) e xilazina (8mg/kg) (rapporto tra volume a 2:1). Applicare lubrificante sterile unguento oculare per evitare l&#39;essiccazione delle cornee durante l&#39;intervento chirurgico. </li><li> Accorciare il pelo testa (da occhio a livello delle orecchie) e fissare la testa sul palco testa da un capo morsetto e impostarne il incisivi nella barra degli incisivi. </li><li> Disinfettati zona di operazione con una soluzione di iodio povidone al 10% seguito dal 70% di alcol. </li><li> Tagliare la pelle ed i muscoli per esporre cranio e suture (sagittale, coronale e trasversale suture) (Figura 1). Applicare analgesico, bupivicaine come una spruzzata di zona incisione (non superiore a 2 mg / kg). </li><li> Praticare un foro del cranio (ø 2x2 mm, 0,5 mm da entrambi i punti di sutura sagittale e trasverso) su ogni lato della sutura sagittale. Evitare la rottura delle meningi e del seno che giacciono sotto le suture. <img src="/files/ftp_upload/old/819_2008_6_18_3/ratSkull.png" alt="Caratteristiche del cranio topo vivo." width="469" height="317" /> Figura 1. Caratteristiche del cranio topo vivo. </li><li> Taglio aperto le meningi con le forbici a molla, di evitare strappi. </li><li> Aspirare il contenuto cerebrale che si trova sulla superficie dorsale del collicolo superiore attentamente dalla pompa del vuoto e tre check-point può essere osservato: <ol><li> il colore del tessuto cerebrale cambia dal grigio al bianco al grigio </li><li> interrompere l&#39;aspirazione quando il fluido cerebrospinale incolore uscire </li><li> attentamente allargare il più basso livello di aspirazione orizzontale per esporre il collicolo superiore giallastro coperto dalla durata </li></ol></li><li> Aspirare il contenuto del cervello su SC fino a quattro bordi di SC può essere osservato direttamente al microscopio. La porzione di corteccia cerebrale rimosso deve essere ridotta al minimo per evitare effetti collaterali indesiderati (ad esempio, disfunzione motoria). Fare attenzione a non toccare il seno. </li><li> Assorbire il liquido nel foro con sottile striscia di cotone sterile per ottenere la superficie della SC più asciutto possibile. Poi, posto un sottile strato di gelatina spugna pre-impregnato con il 6% Fluoro-oro sulla superficie di SC (FG è occupato dai terminali degli assoni delle cellule gangliari della retina e bilateralmente trasportato retrogrado alla sua somas nella retina). </li><li> Riempire il buco con Gelfoam e chiudere la ferita pelle con clip sutura. </li><li> Gli animali sono stati autorizzati a recuperare sotto lampade a incandescenza per tenere in caldo. Analgesico, buprenorfina (100mcg/kg), viene applicato per via orale nell&#39;acqua da bere per 5 giorni dopo l&#39;etichettatura SC. </li></ol>

<ol><li>Ahmed, A. K. M. F., Dong, K., Sugioka, K., Yamadori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retrograde+double+labeling+of+retinal+ganglion+cells+in+the+newborn+and+adult+albino+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Protocols%22%5BJournal%5D)">Retrograde double labeling of retinal ganglion cells in the newborn and adult albino rat.</a> Neurosci. Protocols. 1, 1-11 (1996).</li>
<li>Chan, H. C., Chang, R. C. C., Ip, A. K. C., Chiu, K., Yuen, W. H., Zee, S. Y., So, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+effects+of+Lycium+barbarum+Lynn+on+protecting+retinal+ganglion+cells+in+an+ocular+hypertension+model+of+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective effects of Lycium barbarum Lynn on protecting retinal ganglion cells in an ocular hypertension model of glaucoma.</a> Experimental Neurology. 203, 269-273 (2007).</li>
<li>Forrester, J., Peters, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nerve+fibers+in+the+optic+nerve+of+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Nerve fibers in the optic nerve of rat.</a> Nature. 214, 245-247 (1967).</li>
<li>Ji, J. Z., Elyaman, W., Yip, H. K., Lee, V. W. H., Yick, L. W., Hugon, J., So, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CNTF+promotes+survival+of+retinal+ganglion+cells+after+induction+of+ocular+hypertension+in+rats%3A+the+possible+involvement+of+STAT3+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">CNTF promotes survival of retinal ganglion cells after induction of ocular hypertension in rats: the possible involvement of STAT3 pathway.</a> European Journal of Neuroscience. 19, 265-272 (2004).</li>
<li>Li, R. S., Chen, B. Y., Tay, D. K., Chan, H. H. L., Pu, M. L., So, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melanopsin-Expressing+Retinal+Ganglion+Cells+Are+More+Injury-Resistant+in+a+Chronic+Ocular+Hypertension+Model.+Investigative%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Melanopsin-Expressing Retinal Ganglion Cells Are More Injury-Resistant in a Chronic Ocular Hypertension Model. Investigative.</a> Ophthalmology & Visual Science. 47, 2951-2958 (2006).</li>
</ol>

<ol><li> Perché usare questo metodo chirurgico per la conta delle cellule gangliari della retina? Nel ratto circa il 98% delle cellule gangliari retiniche (RGC) sono noti per progetto al controlaterale collicolo superiore (SC). L&#39;applicazione di fluoro-oro sulla superficie di SC può etichettare quasi tutti i RGCs, in modo che possiamo concentrarci su questa neuroni più vulnerabili della retina nel glaucoma. Confronta con marcatura retrograda di RGC mettendo FG a tronco di transected nervo ottico per 2 giorni, l&#39;interferenza...

etichettatura retrograda di cellule gangliari della retina mediante l&#39;applicazione di fluoro-oro sulla superficie del collicolo superiore

Retrograde Labeling of Retinal Ganglion Cells by Application of Fluoro-Gold on the Surface of Superior Colliculus

Cellule gangliari della retina (RGC) conteggio è essenziale per valutare la degenerazione retinica soprattutto nel glaucoma. Etichettatura affidabile RGC è fondamentale per valutare gli effetti di qualsiasi trattamento. Nel ratto, circa il 98% del RGCs è noto per proiettare al controlaterale collicolo superiore (SC) (Forrester e Peters, 1967). L&#39;applicazione di fluoro-oro (FG) sulla superficie di SC può etichettare quasi tutte le RGCs, in modo che possiamo concentrarci su questa neuroni più vulnerabili della retina nel glaucoma. FG è occupato dai terminali degli assoni delle cellule gangliari della retina e bilateralmente trasportato retrogrado alla sua somas nella retina. Confronta con marcatura retrograda di RGC mettendo FG a tronco di transected nervo ottico per 2 giorni, l&#39;interferenza di sopravvivenza RGC è ridotto al minimo. Confronta con colorazione violetto cresolo che RGCs macchie, le cellule amacrine ed endotelio dei vasi sanguigni nello strato di cellule gangliari della retina, questo metodo di etichettatura più specifico per il RGC. Questo video descrive il metodo di marcatura retrograda di RGC FG applicando sulla superficie del SC. Le procedure chirurgiche includono perforazione del cranio; aspirando la corteccia per esporre la SC e l&#39;applicazione di spugna di gelatina su tutta la superficie dorsale del SC sono mostrati. Consigli utili per evitare la massiccia emorragia intracranica e l&#39;aspirazione delle SC sono state date.

Questo video descrive il metodo di marcatura retrograda di RGC mediante l&#39;applicazione di fluoro-oro (FG) sulla superficie del collicolo superiore (SC). Tecnica consiste nel forare il cranio, aspirando la corteccia, e l&#39;applicazione di spugna di gelatina su tutta la superficie dorsale del SC.

Etichettatura retrograda di cellule gangliari della retina mediante l&#39;applicazione di fluoro-oro sulla superficie del collicolo superiore

Il conteggio delle cellule gangliari della retina (RGC) è essenziale per valutare la degenerazione retinica, in particolare nel glaucoma. Una marcatura affidabile delle RGC è fondamentale per...

Ciao, sono Tu del laboratorio GOSO dell'Università di Hong Kong. Oggi illustrerò come etichettare retrogradamente il ratto. Cellula gangliare retinica.I neuroni gangliari della retina verranno etichettati retrogradamente applicando un colorante tracciante sulla superficie del collicolo superiore in modo da poter conteggiare successivamente i neuroni gangliari retinici nella preparazione piatta della retina, al fine di valutare la morte cellulare o l'effetto del farmaco applicato. Questa immagine illustra il percorso dal collicolo superiore alla retina. Il colorante fluorescente CLE può essere trasportato retrogradamente dal collicolo superiore CLE attraverso il tratto ottico.Attraversare il chiasma ottico attraverso il nervo ottico fino alla retina nell'occhio. Utilizziamo un microscopio operatorio per eseguire l'intervento chirurgico. Pompa di aspirazione per rimuovere la corteccia cerebrale sulla superficie dorsale dello stadio CLE per mantenere il cappuccio rosso in posizione.Chiave e seno per fissare il trapano per ratto per l'apertura del cranio e pinza assorbibile per applicare il colorante fluorescente FG sulla superficie del cranio. Gli strumenti sono stati sterilizzati in

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Resezione del nervo ottico è un modello ampiamente utilizzato degli adulti lesioni del SNC. Il novanta per cento delle cellule gangliari della retina (RGCs) i cui assoni sono completamente recisi (assotomia) muoiono entro 14 giorni dopo assotomia. Questo modello è facilmente suscettibile di manipolazioni sperimentali e altamente riproducibile.

Resezione del nervo ottico: un modello di apoptosi Neuron adulti nel Sistema Nervoso Centrale

Resezione del nervo ottico è un modello ampiamente utilizzato degli adulti lesioni del SNC. Questo modello è ideale per eseguire una serie di manipolazioni sperimentali che colpiscono la retina globalmente o direttamente alla popolazione bersaglio feriti neuronale delle cellule gangliari retiniche.

Metodi per manipolazioni sperimentali dopo resezione del nervo ottico nel sistema nervoso centrale dei mammiferi

Questo articolo fornisce una descrizione del modo di sezionare e registrare dalla preparazione della retina isolata nel topo. In particolare, viene descritto come registrare le risposte luce da una popolazione di cellule gangliari fluorescente e successivamente identificare e analizzare la sua morfologia.

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Trasfezione delle cellule gangliari della retina di topo In vivo Elettroporazione

Trasporto retrogrado di colorante fluorescente etichetta una sotto-popolazione di neuroni basati su proiezione anatomica. Assoni con etichetta possono essere mirati...

Retrograda Etichettatura fluorescente Consente mirata extracellulare singola unità di registrazione da parte dei neuroni identificati<em&gt; In vivo</em

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Introduciamo un metodo efficiente per marcare retrogrademente le cellule gangliari retiniche (RGC) nel pesce zebra adulto.

Etichettatura retrograda di cellule gangliari della retina in Zebrafish adulti con coloranti fluorescenti

Il metodo immunogold post-inclusione è uno dei modi più efficaci per fornire analisi ad alta risoluzione della localizzazione subcellulare di molecole specifiche. Qui descriviamo un protocollo per analizzare quantitativamente i recettori del glutammato nelle sinapsi del nastro retinico.

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Milioni di persone soffrono di malattie degenerative della retina che provocano cecità irreversibile. Un elemento comune di molte di queste malattie è la perdita delle cellule del ganglio retinico (RGC). Questo protocollo dettagliato descrive l'isolamento di RGC murine primari mediante selezione positiva e negativa con citometria a flusso.

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Impara l'etichettatura retrograda delle cellule gangliari della retina con fluoro-oro applicato sul collicolo superiore. Questa tecnica permette di studiare le vie neuronali e valutare gli effetti di farmaci sulla sopravvivenza cellulare.

Etichettatura retrograda di cellule gangliari della retina mediante lapplicazione di fluoro-oro sulla superficie del collicolo superiore (Video) | JoVE Journal

Etichettatura retrograda di cellule gangliari della retina mediante l'applicazione di fluoro-oro sulla superficie del collicolo superiore

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