Name: Le cellule umane ES: Cultura partire da cellule congelate (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-09T00:00:00.000+00:00
Duration: 2 min 47 s
Description: Impara a coltivare cellule staminali embrionali umane HuES da stock congelati per studi di neuroscienza e biologia dello sviluppo. Questo protocollo garantisce riproducibilità e vitalità cellulare per ricerche future.

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Disgelo da uno stock congelati: <ol><li> Prima di scongelamento cellule sfumature, in modo che la piastra di MEF è già stato preparato correttamente placcato e in buone condizioni. NON tenta di utilizzare una piastra meno desiderabile, o uno che è più vecchio di tre giorni. Si consiglia di pre-label in uso tutti i tubi conici e pozzi. </li><li> Pre-riscaldare i media RIFLESSI a 37 ° C. RIFLESSI aliquota media in una provetta sterile conica per ogni linea. Rimuovere RIFLESSI fiala / s da -80 e subito immergere la metà inferiore del tubo in un bagno di acqua a 37 ° C. Occorrono circa 45-60 secondi prima che le cellule sono 80% scongelati (piccola porzione congelata a sinistra). </li><li> Portare rapidamente il tubo alla cappa a flusso laminare, spruzzo giù con alcool al 70%, e delicatamente trasferire le cellule al di pre-riscaldato media. Rotazione del tubo, rimuovere il supporto, e risospendere in un volume adeguato di fresco, pre-riscaldato i media tonalità. </li><li> Aspirare fuori i media dal MEF come pozzi quanti sarete in scongelamento. Rapidamente, aliquota pre-riscaldata mezzi RIFLESSI tornare in ciascun pozzetto della piastra, facendo attenzione a non disturbare l&#39;allegata MEF. Sistemare la piastra da parte del cofano. Come con MEF, i migliori risultati si ottengono se le gocce sono distribuite uniformemente sulla piastra. Riportare attentamente la piastra a 37 ° C in incubatore durante la notte per consentire alle cellule RIFLESSI alle sementi il ​​MEF. Modificare i media ~ 48 ore dopo il disgelo, sostituendo con i media fresca tonalità. </li></ol>

<ol><li>Cowan, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+Embryonic+Stem+Cells+from+Human+Blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Derivation of Embryonic Stem Cells from Human Blastocysts.</a> , 1650-1656 (2004).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da dichiarare.

In questo video si mostra come il nostro laboratorio di routine stabilisce un essere umano RIFLESSI coltura di cellule staminali embrionali da uno stock congelati. Questo processo è suscettibile di uso generale con qualsiasi cellula di mammifero se congelati in una soluzione di DMSO. Scongelamento efficiente è essenziale per stabilire una nuova cultura di cellule RIFLESSI da uno stock congelati, ed è importante per la coerenza sperimentale.

RIFLESSI i media 651,5 ml di DMEM-KO 500 ml PenStrep Glutamin 6,5 ml 6,5 ml 6,5 ml NEAA beta-mercaptoetanolo 0.5ul KO Serum 65 ml sostituzione Plasmanate bFGF2 65 ml (10 ng / ml finale) 0,65 ml

le cellule umane es: cultura partire da cellule congelate

Human ES cells: Starting Culture from Frozen Cells

Qui mostriamo come il nostro laboratorio ha inizio un essere umano RIFLESSI coltura di linee cellulari staminali embrionali da uno stock congelati. In primo luogo, un 1-2 giorno di vita piatto dieci cm di circa un (a due) milioni di cellule embrionali di topo irradiati alimentatore fibroblasti è risciacquata con i media RIFLESSI siero per rimuovere residui e detriti cellulari, e poi i media RIFLESSI aggiunto e sinistra per equilibrare in cella cultura incubatore. Un flaconcino di cellule congelato da stoccaggio a lungo termine azoto liquido o un congelatore-80C è di provenienza e rapidamente immersi in un bagno d&#39;acqua 37 ° C per lo scongelamento rapido. Celle di congelamento nei media vengono poi rimossi dal flaconcino e collocato in un grande volume di media tonalità. Il grande volume di sfumature dei media facilita la rimozione di un eccesso di siero e DMSO, che possono causare RIFLESSI cellule staminali embrionali umane per differenziare. Le cellule sono gentilmente è andato fuori di sospensione, e poi risospese in un piccolo volume di fresca mezzi toni che viene poi utilizzato per inizializzare il piatto MEF. E &#39;considerato importante per seminare la piastra MEF delicatamente aggiungendo le cellule tonalità nel modo goccia a goccia a disperdere in modo uniforme in tutto il loro piatto. La nuova costituzione cultura RIFLESSI piatto viene restituito l&#39;incubatore per 48 ore prima media è sostituito, poi è alimentato ogni 24 ore successive.

Qui mostriamo come il nostro laboratorio ha inizio un essere umano RIFLESSI coltura di linee cellulari staminali embrionali da uno stock congelati.

Le cellule umane ES: Cultura partire da cellule congelate

In questo video dimostriamo come il nostro laboratorio avvii la coltura di una linea di cellule staminali embrionali umane HuES a partire da uno stock congelato. Inizialmente, una piastra da 10 cm di un giorno o due di...

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Biologia

Qui mostriamo come il nostro laboratorio si blocca RIFLESSI embrionali umane linee di cellule staminali.

Congelamento cellule staminali embrionali umane

Dal momento che James Thomson et al sviluppato una tecnica nel 1998 per isolare e far crescere hES in coltura, le cellule per un uso successivo congelamento e scongelamento ed espandere cellule da uno stock congelati sono diventati importanti procedure di routine effettuato in colture cellulari hES. Dato che le cellule hES sono molto sensibili alle sollecitazioni di gelo e disgelo, particolare cura deve intraprendere. Qui mostriamo la tecnica adeguata per il rapido scongelamento cellule hES...

Congelamento e scongelamento cellule staminali embrionali umane

Vi presentiamo un protocollo efficace per la riprogrammazione di cellule somatiche umane in cellule staminali pluripotenti indotte umane (hiPSC) che utilizzano vettori retrovirali codificanti Oct3 / 4, Sox2, Klf4 e c-myc (OSKM) e l'individuazione di hiPSC correttamente riprogrammata mediante colorazione dal vivo con Tra- 1-81 anticorpo.

Selezione e isolamento di colonie di cellule pluripotenti indotte umane staminali riprogrammato da fibroblasti adulti

Descriviamo un protocollo per isolare e coltivare cellule epiteliali amniologiche umane (hAEC) utilizzando reagenti privi di prodotti animali in conformità con le attuali linee guida sulle buone pratiche di fabbricazione (cGMP).

Isolamento, Crioconservazione e Cultura umani Cellule epiteliali Amnion per le applicazioni cliniche

Questo manoscritto fornisce una procedura passo-passo per la derivazione e il mantenimento di cheratinociti umani da capelli strappati e la successiva generazione di cellule staminali pluripotenti indotte umane (hiPSC) prive di integrazione da vettori episomiali.

Generazione di cellule staminali Integrazione-libero umano pluripotenti indotte Utilizzando capelli derivati ​​da cheratinociti

Questo protocollo fornisce un modo semplice ed efficiente per propagare le cellule staminali pluripotenti umane (hPSC) utilizzando solo terreni condizionati derivati dalla placenta umana in un piatto rivestito di gelatina senza ulteriori supplementazioni esogene o substrati sintetici specifici per hPSC.

A Novel cultura Modello pluripotenti staminali umane propagazione delle cellule su Gelatina in Media Placenta condizionata

La pelle umana agisce come una prima linea di difesa contro l'ambiente esterno. Presentiamo un metodo per isolare i keratinocytes umani primari da pelle adulta. Questi keratinocytes isolato sono utili in numerose configurazioni sperimentali e sono un modello altamente adatto per studiare i meccanismi molecolari in biologia cutanea in vitro.

Generazione e la coltura dei Keratinocytes umani primari da pelle adulta

Un protocollo è presentato per preparare polivinil alcool-co-itaconico acido idrogel con rigidità variabile, che sono stati innestati con e senza oligopeptidi, per studiare l'effetto della rigidità dei biomateriali sulla differenziazione e proliferazione delle cellule staminali. La rigidità nel caso degli idrogeli fu controllata dal tempo di reticolazione.

Cultura di cellule staminali pluripotenti umane il polivinil alcool-Co-itaconico acido idrogel con diverse rigidità nelle circostanze senza Xeno

Questo protocollo consente il mantenimento in vitro di cellule staminali ematopoietiche umane quiescenti imitando il microambiente del midollo osseo utilizzando abbondanti acidi grassi, colesterolo, concentrazioni più basse di citochine e ipossia.

Un metodo di coltura per mantenere le cellule staminali ematopoietiche umane quiescenti

L'attuale protocollo dettaglia i passaggi per la risoluzione di problemi della derivazione di cellule staminali pluripotenti indotte (iPSC) da cellule mononucleari del sangue periferico (PBMC) di campioni di pazienti che sono state difficili da riprogrammare seguendo le istruzioni del produttore. Questo protocollo è specifico per campioni di buffy coat congelato, ma può essere applicato anche alla riprogrammazione di PBMC purificati.

Riprogrammazione delle linee di cellule staminali pluripotenti indotte da campioni di rivestimento buffy congelato

Impara a coltivare cellule staminali embrionali umane HuES da stock congelati per studi di neuroscienza e biologia dello sviluppo. Questo protocollo garantisce riproducibilità e vitalità cellulare per ricerche future.

Le cellule umane ES: Cultura partire da cellule congelate

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