細胞呼吸

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  1. マイクロレスピロメーターを使用した呼吸の定量化
    • 注:この実験では、酸素の交換速度を測定することにより、種子の発芽のための細胞呼吸速度を測定します。エネルギーを供給するために酸素が消費されると、発芽した種子は二酸化炭素を放出します。この二酸化炭素は炭酸カリウムに吸収されるため、呼吸器計の全体的なガス圧が低下します。仮説:実験的仮説は、発芽する種子は対照ガラスビーズよりも高い呼吸速度を示すというものです。さらに、高温では、種子の細胞呼吸速度が増加します。帰無仮説は、ガラスビーズと発芽種子の両方が同様の細胞呼吸速度を示し、温度は呼吸に影響を与えないというものです。
    • コントロールを設定するには、まず準備されたマイクロレスパイロメーターからプランジャーを取り外し、コントロールルームの温度か加熱処理かに応じて、それぞれ「CR」または「CH」のラベルを付けます。
    • ガラスマイクロビーズを各マイクロレスピロメーターに0.5mLマークまで追加し、シリンジのプランジャーを1mLマークまで押し込みます。
    • 3〜4個のワッシャーを各マイクロレスピロメーターのフレアエンドに配置して、ウォーターバスで重量を量ります。 注:マイクロレスパイロメーターは、毛細管の端を上にして座ります。
    • 制御デバイスを横に置きます。
    • 実験用着座式呼吸計を設定するには、準備したマイクロレスピロメーターからプランジャーを取り外し、実験室の室温か加熱処理かに応じて、それぞれ「ER」または「EH」のラベルを付けます。
    • 0.5mLの発芽種子をマイクロレスピロメーターのツベルクリン注射器に測定します。
    • 次に、シリンジを1mLマークまで押し込みます。
    • 各マイクロレスピロメーターのフレアエンドに3〜4個のワッシャーを配置して、ウォーターバスで重量を量ります。
    • マイクロレスピロメーターを使用するには、「CR」と「ER」マイクロレスピロメーターを室温のウォーターバスに慎重に押し込みます。シリンジ全体を水没させる必要がありますが、毛細管は完全に露出させる必要があります。この位置に達するまで、バスから水を取り除きます。キャピラリーチューブの上部が開いていることを確認してください。
    • 「CH」と「EH」の微量呼吸計に対して同じ手順(ステップ9)を実行して、より高い温度の実験グループを設定します。
    • マイクロレスピロメーターの温度がウォーターバスと等しくなるまで、5分間待ってから次に進んでください。
    • マイクロレスピロメーターチャンバーを密閉する4つの毛細管のそれぞれの上部に圧力計液を1滴追加します。 注:チャンバーが正常に機能している場合、圧力計の液体はキャピラリーチャンバーに吸い込まれます。
    • 浴槽にセットされたプランジャーを使用して、圧力計の液体をキャピラリーに吸い込みます。流体がキャピラリーチューブの約半分まで来たら停止します。重要:マイクロレスプロメーターは、浴槽に追加した後は邪魔しないでください。チャンバーが密閉されて均等化された後は、テーブルをぶつけたり、ウォーターバスに物を挿入したり、ウォーターバスから何かを取り出したりしないでください。
    • チャンバーに近い圧力計液の下端をマークします。これは、時点 0 を表します。
    • タイマーを5分後に鳴らすように設定します。
    • 5分後、各微小呼吸計の圧力計の液体がある場所に新しいマークを作成します。25分が経過するまで、または圧力計液が毛細管の全長を移動するまで、5分ごとに繰り返します。
    • 次に、呼吸計をウォーターバスから取り外します。
    • 各マーク間の距離を測定し、正しい時点の隣の表1に記録します。表 1 をダウンロードするにはここをクリックしてください
    • クリーンアップ中、圧力計は再利用するために分解するか、ゴミ箱に捨てる必要があります。
  2. 結果
    • 収集したデータを分析するには、まず、x軸を時間、y軸を圧力計が移動した距離としてデータポイントをプロットします。これは酸素消費量を表します。
    • この式を使用して各線の傾きを計算します。
    • 表2の各微小呼吸計のこれらの値を記録します。注:この値は、実験の過程で発生した細胞呼吸の量を表します。 表 2 をダウンロードするにはここをクリックしてください
    • 呼吸数を棒グラフでプロットします。
    • 両方のグラフを調べてください。結果が仮説にどのように適合するかを検討します。コントロールビーズと発芽種子との間の呼吸数に観察された違いに注意してください。温度の上昇が呼吸数に何らかの影響を与えたかどうかを判断します。

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