14.11
パッチクランプ法は、ニューロンや筋線維などの興奮性細胞のイオンチャネルの挙動を研究するための電気生理学的ツールです。
パッチクランプセットアップには、1つ以上のイオンチャネルを含む細胞膜の小さな領域に対してガラスマイクロピペットが配置されています。電解質溶液と塩素化銀電極で構成されており、電圧と電流を測定します。
小さな吸引力を加えると、「メンブレンパッチ」がピペットの先端にしっかりと密着します。
このメガシェイプのメンブレン領域はギガオームシールと呼ばれ、電気的に絶縁されているため、チャネルを流れるイオンはピペットにのみ通過します。
マイクロピペット内の記録電極は、イオンチャネル内のイオンの移動に起因する電流または電圧の変動を増幅する高感度アンプに接続されており、生成された電気信号の測定を可能にします。
「電圧クランプ」では、電圧が特定の値に設定され、その結果生じる電流の流れの変化が測定されます。あるいは、電流を設定値にクランプして、メンブレン全体の電圧変動を測定することもできます。
筋収縮や神経伝達などの多くの基本的な細胞機能は、細胞膜を貫通する正および負に帯電したイオンの移動によって生成される電気信号に依存しています。 細胞全体または単一のイオンチャネルを流れる電流を記録する有効な方法の 1 つは、パッチクランプ法です。
この方法では、電解質溶液を含むガラス製マイクロピペットが細胞膜のごく一部に対してしっかりと密閉されます。 その結果、細胞膜の一部が電気的に隔離され、チャネルを横切って移動するイオンがマイクロピペットにのみ流入することが保証されます。 さらに、細胞が浮遊している浴溶液にイオンが逃げるのを防ぎます。
さまざまなパッチクランプ法:
研究の関心に応じて、パッチクランプ法のいくつかのバリエーションを細胞の生物物理学的特性の測定に使用できます。 たとえば、研究者は膜電圧をクランプ(調節)し、膜を通過できるようにします電流を測定できます。 あるいは、電流をクランプして膜電圧の変化を測定することもできます。
細胞付着モードでは、単一または少数のイオンチャネルを含む膜パッチはそのまま残ります。 その結果、膜パッチのみを流れる電流を測定することができます。 対照的に、全細胞法では、短時間強い吸引を加えることによって膜パッチを破壊します。 その結果、ピペットの内部は細胞質と連続した状態になります。 この方法では、細胞全体の電流と電圧を測定できます。
別のパッチクランプ法では、取り付けられたピペットをゆっくりと引き戻す必要があります。 その結果、膜パッチは密閉されたまま切除されます。 この裏返しの構成では、膜の細胞内部分が浴溶液にさらされ、チャネル機能に影響を与える細胞内因子の研究が可能になります。
パッチクランプ法は、ニューロンや筋線維などの興奮性細胞のイオンチャネルの挙動を研究するための電気生理学的ツールです。
パッチクランプセットアップには、1つ以上のイオンチャネルを含む細胞膜の小さな領域に対してガラスマイクロピペットが配置されています。電解質溶液と塩素化銀電極で構成されており、電圧と電流を測定します。
小さな吸引力を加えると、「メンブレンパッチ」がピペットの先端にしっかりと密着します。
このメガシェイプのメンブレン領域はギガオームシールと呼ばれ、電気的に絶縁されているため、チャネルを流れるイオンはピペットにのみ通過します。
マイクロピペット内の記録電極は、イオンチャネル内のイオンの移動に起因する電流または電圧の変動を増幅する高感度アンプに接続されており、生成された電気信号の測定を可能にします。
「電圧クランプ」では、電圧が特定の値に設定され、その結果生じる電流の流れの変化が測定されます。あるいは、電流を設定値にクランプして、メンブレン全体の電圧変動を測定することもできます。
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