細胞内分画

細胞内分画は、細胞溶解物から異なる細胞小器官の純粋な画分を得るために使用されます。

細胞内分画に一般的に使用される2つの方法は、示差遠心分離と密度勾配遠心分離です。

示差遠心分離では、細胞小器官のサイズベースの分離のために、徐々に速度を上げて逐次遠心分離を行います。

まず、サンプルを約400〜600 x gの低速で遠心分離して、核や細胞の破片などの大きな構造を沈殿させます。

次に、上清を10,000〜20,000 x gの範囲の高速で回転させ、ミトコンドリア、リソソーム、ペルオキシソームなどの細胞小器官をペレット化します。

さらに、80,000 x gを超える速度での遠心分離サイクルにより、ミクロソーム、膜画分、さらにはリボソームを分離することができます。

しかし、示差遠心分離では、ミトコンドリアなど、サイズや密度が非常に近い細胞小器官をペルオキシソームから分離することはできません。

このような場合、より感度の高い方法である密度勾配遠心分離が貴重なツールとなります。

この方法では、化学物質を使用して確立された密度勾配を使用します

スクロースやグリセロールなど、単一のチューブ内のサイズ、形状、または密度に基づいて細胞小器官を異なる層に分離します。