ヒト膵島の高品質と適切な量を達成することが成功した膵島移植のための著名な前提条件の一つです。修正された自動化された方法を使用して：このビデオでは、我々は人間の膵島の分離（ヒト膵島の精製と文化部II）の手順をステップバイステップで説明します。
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この記事について
サマリー
要約
1型糖尿病の管理は、年間1,000億ドルで、個人と社会の両方に、厄介です。グルコースモニタリングと新しいインスリン製剤の普及にもかかわらず、多くの個人はまだ壊滅的な二次的合併症を開発する。膵島移植は、糖尿病患者における正常血糖コントロールの近くに復元することができます
プロトコル
1。膵島の精製
- 膵島精製の手順を開始するには、、COBE袋をロードする緑のチューブを除くすべてのチューブをクランプし、0に外1500速度を設定し、スーパー。
- フード内でポンプと勾配のビーカーを設置し、緑のチューブにコレクションチューブを接続する。
- 今フィコール1.100のロードが開始することができます："スピン"プッシュは、フロントビーカーにフィコール1.100の110 mlを追加し、COBE袋をロードするためにポンプを起動します。フィコールがロードされると、、スーパーを押してポンプを停止し、ポンプヘッドをアンクランプし、100超アウト速度を設定します。
- フィコールをビーカーに達すると、すべての空気がポンプヘッドにチューブ、再クランプから追放されている場合。 3,000〜スピン速度、および超アウト速度を0に設定します。
- 今はフロントビーカーに重い勾配を注いでグラデーションをロードするための準備。少しの空気を除去する2つのビーカーの間にクランプを解除してください。その後戻ってビーカーの中に光のグラデーションを注ぐ。
- マグネチックスターラーの電源を入れ、、COBEのマシン上で"スピン"を押して2つのビーカーを接続するチューブからクランプを削除し、視覚的に重いと光のグラデーションが混合されていることを確認します。
- 勾配は、混合開始後は、遠心機の電源を入れます。 1分間待ってから、混合勾配をロードするためにポンプ....
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ディスカッション
人間の膵島分離の技術において著しい進歩にもかかわらず、膵島の収量は非常に変化し、予測不能のまま。消化された膵組織の精製は、移植のための成功した酵素消化後に十分な島の質量を回復することが重要です。高純度ヒト膵島の優れた回復がこのメソッドを使用して実証されたためUIC精製法が推奨されます。また、消化された組織の最大50 mlをこのように分離に使用される合計時間を短縮することによってヒト膵島の虚血に関連する負傷を最小限に抑える、精製のために実行する単一のCOBEにロードすることができます。
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謝辞
イリノイ大学シカゴ校から設立だけでなく、膵島細胞リソースセンターNIHの助成金（RFA - RR 05から003）、クリストファー財団、Efroymson財団、およびテラブス財団によってサポート。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント | |
|---|---|---|---|---|
| 遠心分離機 | 装置 | Beckman Coulter Inc. | 424803 | |
| Cobe 2991 セルプロセッサー | 装置 | Gambro. BCT | 2556 | 膵島精製 |
| MZ6倒立顕微鏡 TLBD4.1 | 装置 | Leica Microsystems | 4103 | |
| 2 mmグリッド付き細胞培養ディッシュ | 装置 | Nalge Nunc international | 174926 | 膵島計数 |
| Digital Sight DS L1 | 装置 | Nikon Instruments | 217267 | |
| COBEバッグ | 使い捨て器具 | O.R. Solution | 66707003 | |
| T175培養フラスコ | 使い捨て器具 | Sarstedt Ltd | 83.1812.500 | |
| ウィスコンシン大学（UW）溶液 | 試薬 | DURAMED | 1000-46-06 | |
| Hank’s 平衡塩溶液 (HBSS) | 試薬 | Mediatech, Inc. | 99-597-CM | |
| Ficoll 1.100 | 試薬 | Bichrom AG | L6155 | |
| M199培地（洗浄液） | 試薬 | Mediatech, Inc. | 99-784-CM | |
| 最終洗浄用／培養用培地 | 試薬 | Mediatech, Inc. | 99-785-CV | |
| ジチゾン | 試薬 | Sigma-Aldrich | D5130 |
参考文献
- Shapiro, A. M. Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen. N Engl J Med. 343, 230-238 (2000).
- Nano, R. ....
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