赤血球凝集アッセイを用いて血清の反応性と力価の決定

サマリー

赤血球凝集は、抗体が赤血球に結合凝集の形式です。赤血球は、両方とも容易に入手可能であり、結果は容易に肉眼を使って観測している。このビデオでは、結果を解釈し、力価を決定する、赤血球凝集アッセイに必要な手順を示しています。

要約

赤血球凝集は凝集の特定の形式であり、抗体が粒子状抗原として​​機能する赤血球、にバインドするときに使用されます。赤血球は、容易に入手できるように特に有用な標的であると凝集は肉眼を用いて観測される。この手法は、一般的に血液型判定およびウイルス定量のために、抗体（Ab）の力価を決定するために使用されます。このビデオでは、赤血球凝集アッセイの準備と実行に必要なステップは、血液型抗原は、赤血球（Revercells）に追加するに特異的な抗体を用いて示されています。抗血清は、シリアルRevercellsの懸濁液を添加された96ウェルU底マイクロタイタートレイ、中に希釈される。サンプルを混合し、その後60分間37℃でインキュベートする。この時間後、次いで、試料を容易にVE、+ VEと中間(-/+)の赤血球凝集反応のために得点することができます。このアプローチは、迅速かつ簡単な手法を用いて評価される血清サンプルの反応性と力価が可能になります。ビデオは、アッセイを変更する方法、力価が決定される方法、結果を読み、どのように解釈されるか、分析の背後にある理論をカバーし、この技術の使用に関連するあらゆる問題になります。

プロトコル

5倍のベロナール緩衝生理食塩水の調製（VBS）

1. ベロナール緩衝生理食塩水（VBS）を準備するには、3つの別々のソリューションが用意する必要があります。
2. 蒸留水の350ミリリットルでナトリウムBarbitoneのNaClおよび0.94gmの21.25gmを溶解して溶液1を準備します。 NaClおよびナトリウムBarbitoneの最終濃度は、それぞれ1.02Mと13mmです。
3. ホット蒸留水の125​​ミリリットルでBarbitoneの1.44gmを溶解して溶液2を準備します。 Barbitoneの最終濃度が62.5mMである。
4. 蒸留水の100mlにCaCl ₂のMgCl ₂と4.41gmの20.33gmを溶解して溶液3を準備。 MgCl ₂とCaCl ₂の最終濃度は2.18M、それぞれ440mMである。
5. ミックスのソリューション1と2と室温まで冷却。
6. 組み合わせた溶液を冷却した後、溶液3の1.25 mlを追加し、1M HClを用いて7.3から7.5にpHを調整する。
7. 5倍のストック溶液を調製するために蒸留水で500ミリリットルに、最終的な音量を調整します。
8. 1Xワーキング溶液を調製するために、蒸留水で株式1:5に希釈する。

Rever....

ディスカッション

赤血球凝集アッセイは、時間の短い期間内に評価される血清サンプルの多数を可能にするとても簡単なテクニックです。それが適している目で、特殊な装置を必要とせずに読み取られるという利点もあります。この手法はまた、赤血球凝集阻害試験の一環として、尿中のヒト絨毛性ゴナドトロピンホルモンの存在の検出のため変更することができます。標準血球凝集試験に関連して、ケアが正しく実行されるアッセイのために考慮する必要があるいくつかの領域があります。まず、このテクニックは、凹面上のセルのセトリングに基づいています。このように、それがU -または丸底マイクロタイタープレートが使用されていることが不可欠である。負と正の反応が同一の表示されるように、一般的にELISAのために使用されるように平らな底板の使用は、適切ではありません。それはまた別の血清サンプルが使用されているときに、反応性抗体は、異なる濃度で存在している可能性があることを理解すべきである。高い抗体濃度で、抗原（Revercells）が制限されることがありますし、プロゾーンの効果が観察されることがあります。これは陽性反応が最後に目撃された最後の幸福として決定されるので、しかしこれは、力価の値の決定には影響しま.......

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
Revercells	CSL	02490201	1% 最終
抗 A 血清	CSL	02611305
96 ウェル U 底板	TRP	92097	底
Veronal 緩衝生理食塩水			1x 最終
37° での使用。Cルーム/インキュベーター
手袋